| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语表 | 第7-13页 |
| 第1章 引言 | 第13-25页 |
| 1.1 防御素研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2 防御素的分类、分布及结构特征 | 第14-16页 |
| 1.2.1 α-防御素 | 第14页 |
| 1.2.2 β-防御素 | 第14-15页 |
| 1.2.3 θ-防御素 | 第15页 |
| 1.2.4 昆虫防御素 | 第15页 |
| 1.2.5 植物防御素 | 第15-16页 |
| 1.3 防御素作用机制 | 第16-17页 |
| 1.3.1 哺乳动物类防御素 | 第16页 |
| 1.3.2 昆虫类防御素 | 第16-17页 |
| 1.3.3 植物类防御素 | 第17页 |
| 1.4 防御素的主要功能 | 第17-20页 |
| 1.4.1 抗细菌作用 | 第17-18页 |
| 1.4.2 抗真菌作用 | 第18页 |
| 1.4.3 抗病毒作用 | 第18页 |
| 1.4.4 抗肿瘤作用 | 第18-19页 |
| 1.4.5 免疫调节作用 | 第19页 |
| 1.4.6 其它生物活性 | 第19-20页 |
| 1.5 防御素的应用现状 | 第20-22页 |
| 1.5.1 防御素在基因工程方面的应用 | 第20页 |
| 1.5.2 防御素在禽畜养殖中的应用 | 第20-21页 |
| 1.5.3 防御素在水产养殖中的应用 | 第21页 |
| 1.5.4 防御素在饲料中的应用 | 第21页 |
| 1.5.5 防御素在医药领域的应用 | 第21-22页 |
| 1.5.6 防御素在应用中的局限性和解决方案 | 第22页 |
| 1.6 水生动物防御素研究进展 | 第22-23页 |
| 1.7 本论文研究目的和意义 | 第23-25页 |
| 第2章 褶纹冠蚌防御素基因 defensin 的克隆 | 第25-55页 |
| 1 前言 | 第25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.2 菌株和质粒 | 第26页 |
| 2.3 主要试剂 | 第26页 |
| 2.4 主要仪器设备 | 第26-27页 |
| 2.5 实验方法 | 第27-35页 |
| 2.5.1 褶纹冠蚌总 RNA 的提取 | 第27页 |
| 2.5.2 褶纹冠蚌 SMART cDNA 的合成 | 第27-29页 |
| 2.5.3 褶纹冠蚌防御素基因的克隆 | 第29-30页 |
| 2.5.4 防御素基因的生物信息学分析 | 第30-33页 |
| 2.5.5 半定量 PCR 分析防御素基因的表达特征 | 第33-34页 |
| 2.5.6 实时荧光定量 PCR 分析金黄色葡萄球菌刺激后防御素基因的表达 | 第34-35页 |
| 3 实验结果 | 第35-50页 |
| 3.1 褶纹冠蚌中总 RNA 的提取 | 第35页 |
| 3.2 防御素基因的 cDNA 序列及推导的氨基酸序列 | 第35-37页 |
| 3.3 防御素基因的系统进化树 | 第37-39页 |
| 3.4 推导的防御素氨基酸序列的同源性比较 | 第39-41页 |
| 3.5 防御素基因的半定量表达 | 第41-46页 |
| 3.5.1 防御素基因在褶纹冠蚌组织中的表达 | 第41-42页 |
| 3.5.2 PBS 刺激后防御素基因在褶纹冠蚌组织中的表达 | 第42-43页 |
| 3.5.3 嗜水气单胞菌刺激后防御素基因在褶纹冠蚌血液、外套膜、鳃和肝胰腺组织中的表达变化 | 第43-46页 |
| 3.6 防御素基因的实时荧光定量表达 | 第46-50页 |
| 3.6.1 金黄色葡萄球菌刺激后防御素基因在蚌组织中的表达 | 第47-50页 |
| 4 讨论 | 第50-55页 |
| 第3章 褶纹冠蚌防御素基因的原核表达及产物活性分析 | 第55-75页 |
| 1 前言 | 第55-56页 |
| 2 材料与方法 | 第56-64页 |
| 2.1 菌株和质粒 | 第56页 |
| 2.2 试剂和主要仪器 | 第56页 |
| 2.3 实验方法 | 第56-64页 |
| 2.3.1 防御素基因的原核表达 | 第56-63页 |
| 2.3.2 重组防御素蛋白活性的测定 | 第63-64页 |
| 3 结果 | 第64-72页 |
| 3.1 防御素基因的原核表达及纯化 | 第64-67页 |
| 3.2 重组防御素蛋白浓度的测定 | 第67-68页 |
| 3.3 重组防御素蛋白活性的测定 | 第68-72页 |
| 3.3.1 微孔液体培养法检测重组防御素蛋白的抑菌活性 | 第68-70页 |
| 3.3.2 平皿抑菌圈检测重组防御素蛋白对金黄色葡萄球菌的抑菌活性 | 第70-71页 |
| 3.3.3 防御素蛋白对金黄色葡萄球菌生长曲线的影响 | 第71-72页 |
| 4 讨论 | 第72-75页 |
| 第4章 褶纹冠蚌防御素抑菌作用的超微结构观察 | 第75-82页 |
| 1 前言 | 第75页 |
| 2 材料与方法 | 第75-76页 |
| 2.1 受体菌 | 第75页 |
| 2.2 试剂和主要仪器 | 第75-76页 |
| 2.3 实验方法 | 第76页 |
| 2.3.1 激光共聚焦显微镜观察 | 第76页 |
| 2.3.2 扫描电镜观察 | 第76页 |
| 3 结果 | 第76-80页 |
| 4 讨论 | 第80-82页 |
| 第5章 结论与展望 | 第82-85页 |
| 1 结论 | 第82-84页 |
| 2 展望 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-93页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第93页 |
