| 中文摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-30页 |
| 1.1 引言 | 第12页 |
| 1.2 莫能菌素 | 第12-14页 |
| 1.2.1 莫能菌素理化性质 | 第12-14页 |
| 1.2.2 莫能菌素的应用 | 第14页 |
| 1.3 莫能菌素的生物合成 | 第14-19页 |
| 1.3.1 莫能聚酮合成基因 | 第16-17页 |
| 1.3.2 莫能修饰基因 | 第17-18页 |
| 1.3.3 莫能途径特异性调控基因 | 第18-19页 |
| 1.4 全局调控因子DasR | 第19-22页 |
| 1.4.1 N-乙酰葡糖对DasR调控作用的影响 | 第20页 |
| 1.4.2 DasR对链霉菌形态分化的调控 | 第20-21页 |
| 1.4.3 DasR对抗生素生物合成的调控 | 第21-22页 |
| 1.5 全局调控因子Crp | 第22-24页 |
| 1.5.1 Crp对链霉菌形态分化的调控 | 第23页 |
| 1.5.2 Crp对初级代谢与细胞功能的调控 | 第23-24页 |
| 1.5.3 Crp对抗生素生物合成的调控 | 第24页 |
| 1.6 代谢工程调控抗生素产量 | 第24-28页 |
| 1.6.1 调节前体供应 | 第25页 |
| 1.6.2 扩增生物合成基因簇或结构基因 | 第25-26页 |
| 1.6.3 生物合成途径的异源表达 | 第26页 |
| 1.6.4 操纵调控基因 | 第26-28页 |
| 1.7 研究内容与意义 | 第28-30页 |
| 1.7.1 研究内容 | 第28页 |
| 1.7.2 研究意义 | 第28页 |
| 1.7.3 技术路线 | 第28-30页 |
| 第2章 DasR和Crp蛋白的异源表达与纯化 | 第30-52页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-34页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第30-31页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第31页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第31-32页 |
| 2.1.4 培养基 | 第32页 |
| 2.1.5 溶液 | 第32-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-47页 |
| 2.2.1 PCR反应 | 第34-37页 |
| 2.2.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第37-38页 |
| 2.2.3 DNA片段的回收与纯化 | 第38-39页 |
| 2.2.4 酶切与连接 | 第39-40页 |
| 2.2.5 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第40-42页 |
| 2.2.6 CaCl_2转化法转化大肠杆菌质粒 | 第42-43页 |
| 2.2.7 电转化法转化大肠杆菌质粒 | 第43-44页 |
| 2.2.8 可溶性蛋白的纯化与鉴定 | 第44-46页 |
| 2.2.9 蛋白电泳 | 第46-47页 |
| 2.3 结果与分析 | 第47-50页 |
| 2.3.1 可溶性DasR蛋白的获得 | 第47-49页 |
| 2.3.2 可溶性Crp蛋白的获得 | 第49-50页 |
| 2.4 讨论 | 第50-51页 |
| 2.5 本章小结 | 第51-52页 |
| 第3章 DasR对莫能菌素生物合成的调控效应 | 第52-74页 |
| 3.1 实验材料 | 第52-56页 |
| 3.1.1 菌种与质粒 | 第52-53页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第53-54页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第54页 |
| 3.1.4 培养基 | 第54-55页 |
| 3.1.5 溶液 | 第55-56页 |
| 3.2 实验方法 | 第56-60页 |
| 3.2.1 肉桂地链霉菌的培养与保存 | 第56-57页 |
| 3.2.2 肉桂地链霉菌的结合转移 | 第57-58页 |
| 3.2.3 肉桂地链霉菌基因组的提取 | 第58-59页 |
| 3.2.4 莫能菌素效价的测定 | 第59-60页 |
| 3.3 结果与分析 | 第60-71页 |
| 3.3.1 dasR过表达载体及菌株的构建 | 第60-62页 |
| 3.3.2 sRNA载体及菌株的构建 | 第62-65页 |
| 3.3.3 dasR敲除载体及菌株的构建 | 第65-67页 |
| 3.3.4 发酵与效价测定 | 第67-69页 |
| 3.3.5 N-乙酰葡糖对莫能菌素生物合成的影响 | 第69-71页 |
| 3.4 讨论 | 第71-72页 |
| 3.5 本章小结 | 第72-74页 |
| 第4章 DasR调控莫能菌素生物合成的转录分析 | 第74-94页 |
| 4.1 实验材料 | 第74-75页 |
| 4.1.1 菌株与质粒 | 第74页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第74页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第74-75页 |
| 4.1.4 培养基 | 第75页 |
| 4.1.5 溶液 | 第75页 |
| 4.2 实验方法 | 第75-82页 |
| 4.2.1 凝胶迁移实验(EMSAs) | 第75-79页 |
| 4.2.2 肉桂地链霉菌RNA的提取 | 第79-80页 |
| 4.2.3 RT-PCR反应 | 第80-82页 |
| 4.3 结果与分析 | 第82-91页 |
| 4.3.1 DasR结合的启动子 | 第82-87页 |
| 4.3.2 dasR过表达上调的转录单元 | 第87-89页 |
| 4.3.3 dasR在发酵周期内的转录水平变化 | 第89-91页 |
| 4.4 讨论 | 第91-93页 |
| 4.5 本章小结 | 第93-94页 |
| 第5章 Crp对莫能菌素生物合成的调控效应 | 第94-104页 |
| 5.1 实验材料 | 第94-96页 |
| 5.1.1 菌种与质粒 | 第94-95页 |
| 5.1.2 实验仪器 | 第95页 |
| 5.1.3 实验试剂 | 第95页 |
| 5.1.4 培养基 | 第95页 |
| 5.1.5 溶液 | 第95-96页 |
| 5.2 实验方法 | 第96页 |
| 5.3 结果与分析 | 第96-101页 |
| 5.3.1 crp过表达载体与菌株的构建 | 第96-97页 |
| 5.3.2 sRNA载体及菌株的构建 | 第97-99页 |
| 5.3.3 发酵与效价测定 | 第99-101页 |
| 5.4 讨论 | 第101-102页 |
| 5.5 本章小结 | 第102-104页 |
| 第6章 Crp调控莫能菌素生物合成的转录分析 | 第104-122页 |
| 6.1 实验材料 | 第104-105页 |
| 6.1.1 菌种与质粒 | 第104-105页 |
| 6.1.2 实验仪器 | 第105页 |
| 6.1.3 实验试剂 | 第105页 |
| 6.1.4 培养基 | 第105页 |
| 6.1.5 溶液 | 第105页 |
| 6.2 实验方法 | 第105-107页 |
| 6.2.1 转录组测序 | 第105-106页 |
| 6.2.2 差异表达基因分析 | 第106页 |
| 6.2.3 差异表达基因的GO和KEGG富集分析 | 第106-107页 |
| 6.3 结果与分析 | 第107-119页 |
| 6.3.1 Crp蛋白与莫能启动子的凝胶迁移电泳实验 | 第107页 |
| 6.3.2 转录组测序分析 | 第107-113页 |
| 6.3.3 Crp对初级代谢基因和莫能基因转录的调控作用 | 第113-119页 |
| 6.4 讨论 | 第119-121页 |
| 6.5 本章小结 | 第121-122页 |
| 第7章 代谢调控构建莫能菌素高产菌株 | 第122-132页 |
| 7.1 实验材料 | 第122-124页 |
| 7.1.1 菌种与质粒 | 第122-123页 |
| 7.1.2 实验仪器 | 第123页 |
| 7.1.3 实验试剂 | 第123-124页 |
| 7.1.4 培养基 | 第124页 |
| 7.1.5 溶液 | 第124页 |
| 7.2 实验方法 | 第124页 |
| 7.3 结果与分析 | 第124-129页 |
| 7.3.1 monRI,monRII,monH过表达载体和菌株的构建 | 第124-125页 |
| 7.3.2 组合过表达载体及菌株的构建 | 第125-127页 |
| 7.3.3 菌株发酵与效价测定 | 第127-129页 |
| 7.4 讨论 | 第129-130页 |
| 7.5 本章小结 | 第130-132页 |
| 第8章 结论与展望 | 第132-136页 |
| 8.1 结论 | 第132-133页 |
| 8.2 创新点 | 第133页 |
| 8.3 展望 | 第133-136页 |
| 参考文献 | 第136-148页 |
| 发表论文及参加科研情况 | 第148-150页 |
| 致谢 | 第150-151页 |
