| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 缩略语 | 第12-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-40页 |
| 第一章 植物转录因子的研究进展 | 第14-28页 |
| 1 转录因子的结构与功能 | 第15-20页 |
| 1.1 DNA结合区(DNA-binding domain) | 第15-17页 |
| 1.2 转录调控区(transcription regulation domain) | 第17-19页 |
| 1.3 核定位信号(nuclear localization signal,NLS) | 第19页 |
| 1.4 寡聚化位点(oligomerization site) | 第19-20页 |
| 2 转录因子的活性调控 | 第20-21页 |
| 3 植物转录因子的功能 | 第21-28页 |
| 3.1 转录因子与植物激素的应答反应 | 第21-22页 |
| 3.2 转录因子与植物的生长发育和形态建成 | 第22-23页 |
| 3.3 转录因子与植物防御和胁迫反应 | 第23-25页 |
| 3.4 转录因子与植物的次生代谢 | 第25-28页 |
| 第二章 植物TFⅢA型锌指蛋白的研究进展 | 第28-40页 |
| 摘要 | 第28页 |
| Abstract | 第28-29页 |
| 1 TFⅢA锌指蛋白的结构特征 | 第29-30页 |
| 2 植物TFⅢA锌指蛋白与目标序列的作用 | 第30-32页 |
| 2.1 TFⅢA锌指蛋白与DNA的作用 | 第30-31页 |
| 2.2 TFⅢA锌指蛋白与蛋白质的相互作用 | 第31-32页 |
| 3 植物TFⅢA锌指蛋白的功能 | 第32-38页 |
| 3.1 参与生长发育过程的调控 | 第32-35页 |
| 3.2 参与逆境胁迫的应答 | 第35-38页 |
| 4 TFⅢA型锌指蛋白的研究展望 | 第38-40页 |
| 第二部分 研究报告 | 第40-96页 |
| 第三章 水稻锌指蛋白ZFP179的功能研究 | 第40-64页 |
| 摘要 | 第40页 |
| Abstract | 第40-41页 |
| 1 材料和方法 | 第41-47页 |
| 1.1 植物材料 | 第41-42页 |
| 1.2 植物材料的处理 | 第42页 |
| 1.3 菌株、质粒和试剂盒 | 第42页 |
| 1.4 总RNA的提取和cDNA第一链的合成 | 第42页 |
| 1.5 Quantitative Real-time PCR分析 | 第42-43页 |
| 1.6 转录激活载体构建 | 第43页 |
| 1.7 酵母感受态细胞制备和转化 | 第43-44页 |
| 1.8 转录激活活性检测 | 第44-45页 |
| 1.9 ZFP179过量表达转基因植株的检测 | 第45页 |
| 1.9.1 ZFP179过量表达转基因植株的PCR检测 | 第45页 |
| 1.9.2 ZFP179过量表达转基因植株的RT-PCR检测 | 第45页 |
| 1.10 转基因水稻的耐逆处理 | 第45-46页 |
| 1.11 脯氨酸含量测定 | 第46页 |
| 1.12 可溶性糖含量测定 | 第46页 |
| 1.13 DAB染色 | 第46-47页 |
| 1.14 POD活性测定 | 第47页 |
| 1.15 SOD活性测定 | 第47页 |
| 1.16 转基因水稻对外源ABA的敏感性分析 | 第47页 |
| 2 结果和分析 | 第47-60页 |
| 2.1 ZFP179在水稻不同组织的表达和幼苗中的诱导表达 | 第47-50页 |
| 2.2 ZFP179的转录活性分析 | 第50-51页 |
| 2.3 转基因水稻植株的PCR检测 | 第51-52页 |
| 2.4 转基因水稻植株的RT-PCR检测 | 第52-53页 |
| 2.5 T_3代转基因水稻植株的耐盐性鉴定 | 第53-54页 |
| 2.6 转基因水稻和野生型水稻幼苗脯氨酸和可溶性糖含量 | 第54-55页 |
| 2.7 ZFP179过量表达转基因水稻中非生物胁迫相关基因的表达 | 第55-56页 |
| 2.8 T_3代转基因水稻植株耐氧化胁迫鉴定 | 第56-57页 |
| 2.9 T_3代转基因水稻植株对盐胁迫诱导的活性氧清除能力分析 | 第57-58页 |
| 2.10 转基因水稻对外源ABA的敏感性分析 | 第58-60页 |
| 3 讨论 | 第60-64页 |
| 第四章 水稻锌指蛋白ZFP182相互作用蛋白的筛选 | 第64-96页 |
| 摘要 | 第64页 |
| Abstract | 第64-66页 |
| 1 材料和方法 | 第66-74页 |
| 1.1 植物材料 | 第66页 |
| 1.2 菌株、质粒和试剂盒 | 第66-67页 |
| 1.3 用pGBKT7质粒构建“诱饵”表达载体 | 第67页 |
| 1.4 酵母菌感受态制备和少量转化 | 第67页 |
| 1.5 转录激活检测 | 第67页 |
| 1.6 β-半乳糖苷酶印膜法检测lacZ报告基因的表达 | 第67页 |
| 1.7 ds cDNA文库和pGADT7-Rec质粒的构建 | 第67-68页 |
| 1.8 互作蛋白cDNA文库筛选 | 第68-69页 |
| 1.9 酵母双杂交阳性克隆的鉴定 | 第69页 |
| 1.10 一对一阳性验证(回转酵母验证) | 第69页 |
| 1.11 阳性克隆的测序比对分析 | 第69页 |
| 1.12 互作蛋白基因Z182IP7的克隆 | 第69-70页 |
| 1.13 双分子荧光互补(BiFC)载体的构建 | 第70页 |
| 1.14 基因枪法转化洋葱表皮细胞 | 第70-71页 |
| 1.15 诱饵蛋白和捕获蛋白表达载体构建 | 第71-72页 |
| 1.16 融合蛋白的诱导表达及检测 | 第72页 |
| 1.17 Pull-down方法分析蛋白之间的相互作用 | 第72-73页 |
| 1.18 Western blot方法验证蛋白之间的相互作用 | 第73-74页 |
| 2 结果和分析 | 第74-90页 |
| 2.1 ZFP182转录活性分析及其转录激活域的确定 | 第74-77页 |
| 2.2 水稻冷处理ds cDNA的获得和pGADT7-Rec质粒的构建 | 第77-78页 |
| 2.3 水稻ds cDNA和pGADT7-Rec转化含pGBKT7-ZFP182N的AH109 | 第78-79页 |
| 2.4 一对一阳性检测 | 第79-80页 |
| 2.5 阳性克隆的测序及BLAST分析 | 第80-81页 |
| 2.6 Z182IP7的克隆和序列分析 | 第81页 |
| 2.7 pUC-NE-ZFP182、pUC-CE-ZFP182和pUC-CE-Z182-7双分子荧光互补分析 | 第81-86页 |
| 2.8 His-Pull down分析蛋白体外互作 | 第86-90页 |
| 2.8.1 诱饵蛋白表达载体pGEX-ZFP182的构建 | 第86-87页 |
| 2.8.2 捕获蛋白表达载体pET-Z182IP7的构建 | 第87页 |
| 2.8.3 IPTG诱导融合蛋白的表达及检测 | 第87-88页 |
| 2.8.4 Pull-down分析蛋白体外互作 | 第88-90页 |
| 3 讨论 | 第90-96页 |
| 3.1 ZFP182的转录活性分析 | 第90-91页 |
| 3.2 互作蛋白的功能 | 第91-93页 |
| 3.2.1 与防御反应相关的蛋白 | 第91页 |
| 3.2.2 分子伴侣类蛋白 | 第91页 |
| 3.2.3 与泛素蛋白酶体途径相关的蛋白 | 第91-92页 |
| 3.2.4 与蛋白质合成相关的蛋白 | 第92-93页 |
| 3.2.5 与代谢途径相关的蛋白 | 第93页 |
| 3.3 互作蛋白的研究方法 | 第93-96页 |
| 全文结论 | 第96-98页 |
| 全文创新点 | 第98-100页 |
| 附录 | 第100-104页 |
| 参考文献 | 第104-120页 |
| 攻读博士期间发表或待发表的论文 | 第120-122页 |
| 致谢 | 第122页 |
