| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-25页 |
| 1.1 棉花纤维发育机制研究 | 第12-16页 |
| 1.1.1 棉花纤维发育概述 | 第12页 |
| 1.1.2 棉花纤维发育的过程及其分子机制 | 第12-13页 |
| 1.1.3 棉花纤维线性生长模式 | 第13-15页 |
| 1.1.4 乙烯在棉花纤维发育中的作用 | 第15-16页 |
| 1.2 VLCFA在植物发育中的作用 | 第16-18页 |
| 1.2.1 VLCFA的合成 | 第16-17页 |
| 1.2.2 VLCFA在植物发育中的作用 | 第17-18页 |
| 1.3 KCS研究进展 | 第18-20页 |
| 1.4 VLCFA与KCS在棉花纤维发育中的作用与研究进展 | 第20-23页 |
| 1.4.1 脂肪酸及VLCFA在棉花纤维发育中的作用 | 第20-22页 |
| 1.4.2 KCS在棉花纤维发育中的研究进展 | 第22-23页 |
| 1.5 VLCFA与乙烯之间的关系 | 第23页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第23-24页 |
| 1.7 技术路线 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 基因来源 | 第25页 |
| 2.1.2 棉花材料 | 第25页 |
| 2.1.3 菌株和载体 | 第25页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-36页 |
| 2.2.1 载体构建方法 | 第26-27页 |
| 2.2.1.1 载体构建策略 | 第26页 |
| 2.2.1.2 引物设计 | 第26-27页 |
| 2.2.1.3 PCR产物的TA克隆、测序 | 第27页 |
| 2.2.2 运用Gateway(?)技术构建表达载体 | 第27-30页 |
| 2.2.2.1 BP-LR重组反应原理 | 第27-28页 |
| 2.2.2.2 表达载体的构建 | 第28-30页 |
| 2.2.3 农杆菌介导的棉花下胚轴遗传转化 | 第30页 |
| 2.2.4 DNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.2.4.1 DNA的抽提及纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.4.2 DNA浓度的测定 | 第31页 |
| 2.2.5 转基因植株的阳性检测 | 第31-32页 |
| 2.2.6 Southern blot | 第32-33页 |
| 2.2.6.1 Southern blot探针制备 | 第32页 |
| 2.2.6.2 Southern blot | 第32-33页 |
| 2.2.7 RNA的提取及纯化 | 第33-34页 |
| 2.2.7.1 RNA的提取 | 第33-34页 |
| 2.2.7.2 RNA的纯化 | 第34页 |
| 2.2.8 RNA的反转录 | 第34页 |
| 2.2.9 RT/Real time PCR | 第34-36页 |
| 2.2.9.1 RT-PCR | 第34-35页 |
| 2.2.9.2 Real time PCR | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-54页 |
| 3.1 生物信息学分析表明GhKCS13可能定位于内质网 | 第36-44页 |
| 3.1.1 GhKCS13核苷酸序列分析和氨基酸序列预测 | 第36-39页 |
| 3.1.2 GhKCS13蛋白质保守结构域和进化树分析 | 第39-44页 |
| 3.2 GhKCS13在棉花纤维伸长期优势表达 | 第44-45页 |
| 3.3 GhKCS13超表达及抑制表达转基因棉花的获得 | 第45-47页 |
| 3.3.1 GhKCS13表达载体的构建 | 第45-46页 |
| 3.3.2 GhKCS13转基因棉花的获得 | 第46-47页 |
| 3.4 T0转基因再生植株Southern blot检测 | 第47-49页 |
| 3.4.1 T0转基因再生植株快速PCR阳性鉴定 | 第47-48页 |
| 3.4.2 T0转基因再生植株Southern blot检测 | 第48-49页 |
| 3.5 35S::GhKCS13超表达转基因棉早衰 | 第49页 |
| 3.6 GhKCS13在超表达转基因棉花纤维中表达量上调不明显 | 第49-50页 |
| 3.7 RNAi转基因棉花GhKCS13在纤维中表达量被明显抑制 | 第50页 |
| 3.8 35S::GhKCS13超表达转基因棉花GhKCS13在叶片中表达量上调明显 | 第50-51页 |
| 3.9 改变GhKCS13的表达模式影响乙烯合成途径相关基因的表达 | 第51-54页 |
| 3.9.1 35S::GhKCS13超表达转基因植株叶片中GhACO3上调表达 | 第51-52页 |
| 3.9.2 超表达转基因植株纤维中GhACO1、GhACO3和GhACS6上调表达 | 第52-53页 |
| 3.9.3 RNAi转基因植株纤维中GhACO1、GhACO3和GhACS6下调表达不明显 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-57页 |
| 4.1 超表达GhKCS13引起乙烯合成相关基因在叶片中上调表达,导致叶片早衰 | 第54页 |
| 4.2 乙烯的产生在GhKCS13转基因植株纤维中有一个内源平衡过程 | 第54-55页 |
| 4.3 关于GhKCS13基因研究的展望 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-67页 |
| 附录 | 第67-70页 |
| 附录1 缓冲液配方 | 第67页 |
| 附录2 棉花转化相关培养基配方 | 第67页 |
| 附录3 50ul DNA酶切检测体系 | 第67页 |
| 附录4 DNA变性液及转膜液配方 | 第67-68页 |
| 附录5 50ul Southern blot探针标记体系(Promega labeling kit) | 第68页 |
| 附录6 Southern blot洗膜液配方 | 第68页 |
| 附录7 RNA提取相关溶液的配方 | 第68-69页 |
| 附录8 常用储存液 | 第69页 |
| 附录9 常用缓冲液 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
