| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第15-33页 |
| 1.1 前言 | 第15-16页 |
| 1.2 重组胶原蛋白的研究进展 | 第16-24页 |
| 1.2.1 胶原蛋白和类胶原蛋白 | 第16-17页 |
| 1.2.2 胶原蛋白的生物合成 | 第17-18页 |
| 1.2.3 重组胶原蛋白的应用 | 第18-20页 |
| 1.2.4 胶原蛋白的重组表达进展 | 第20-24页 |
| 1.2.5 重组胶原蛋白的分离纯化 | 第24页 |
| 1.3 重组类弹性蛋白多肽的研究进展 | 第24-28页 |
| 1.3.1 弹性蛋白和类弹性蛋白多肽 | 第24-25页 |
| 1.3.2 重组类弹性蛋白多肽的应用进展 | 第25-28页 |
| 1.4 酶法合成α-酮戊二酸的研究进展 | 第28-31页 |
| 1.4.1 α -酮戊二酸的简介 | 第28-29页 |
| 1.4.2 α -酮戊二酸的生产方法 | 第29-30页 |
| 1.4.3 酶法合成α-酮戊二酸的研究进展 | 第30-31页 |
| 1.5 本课题的研究思路和主要内容 | 第31-33页 |
| 第二章 类人胶原蛋白HLC在大肠杆菌中的重组表达 | 第33-52页 |
| 2.1 前言 | 第33-34页 |
| 2.2 材料和方法 | 第34-42页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第34页 |
| 2.2.2 工具酶和主要试剂 | 第34-35页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第35-36页 |
| 2.2.4 主要培养基和缓冲液 | 第36页 |
| 2.2.5 引物设计与合成 | 第36-37页 |
| 2.2.6 表达载体pAC-HLC-P4H-ALO的构建 | 第37-38页 |
| 2.2.7 重组HLC在大肠杆菌中的表达 | 第38-39页 |
| 2.2.8 重组HLC表达条件的优化 | 第39页 |
| 2.2.9 重组HLC在10 L发酵罐上的放大培养 | 第39-40页 |
| 2.2.10 重组HLC的亲和纯化 | 第40页 |
| 2.2.11 分析测定方法 | 第40-42页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第42-51页 |
| 2.3.1 重组表达载体pAC-HLC-P4H-ALO的构建 | 第42-44页 |
| 2.3.2 重组HLC在大肠杆菌中的表达 | 第44页 |
| 2.3.3 最适培养基的选择 | 第44-45页 |
| 2.3.4 诱导条件的优化 | 第45-47页 |
| 2.3.5 重组HLC在10L发酵罐中的表达研究 | 第47-48页 |
| 2.3.6 重组HLC的分离纯化 | 第48-49页 |
| 2.3.7 重组HLC中羟基脯氨酸含量的测定 | 第49-51页 |
| 2.4 小结 | 第51-52页 |
| 第三章 化脓链球菌类胶原蛋白Scl2在大肠杆曹中的重组表达 | 第52-66页 |
| 3.1 前言 | 第52页 |
| 3.2 材料和方法 | 第52-57页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第52页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第52-53页 |
| 3.2.3 培养基和缓冲液 | 第53页 |
| 3.2.4 引物设计与合成 | 第53页 |
| 3.2.5 Scl2基因的优化及表达载体pET28a-Scl2 | 第53-54页 |
| 3.2.6 表达载体pET28a-Scl2-M的构建 | 第54-55页 |
| 3.2.7 重组Scl2-M的表达 | 第55页 |
| 3.2.8 重组Scl2-M的表达条件优化 | 第55-56页 |
| 3.2.9 重组Scl2-M在10L发酵罐上的放大培养 | 第56页 |
| 3.2.10 重组Scl2-M的纯化 | 第56页 |
| 3.2.11 分析测定方法 | 第56-57页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第57-64页 |
| 3.3.1 表达载体pET28a-Scl2和pET28a-Scl2-M的构建 | 第57-58页 |
| 3.3.2 Scl2-M在大肠杆菌中的表达 | 第58-59页 |
| 3.3.3 表达条件的优化 | 第59-62页 |
| 3.3.4 重组Scl2-M在10L发酵罐上的放大研究 | 第62页 |
| 3.3.5 重组Scl2-M的分离纯化 | 第62-63页 |
| 3.3.6 蛋白Scl2-M的活性测定 | 第63-64页 |
| 3.4 小结 | 第64-66页 |
| 第四章 Scl2-M和hbFGF蛋白的融合表达和分离纯化 | 第66-78页 |
| 4.1 前言 | 第66页 |
| 4.2 材料和方法 | 第66-70页 |
| 4.2.1 菌株和质粒 | 第66-67页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第67页 |
| 4.2.3 培养基和缓冲液 | 第67页 |
| 4.2.4 基因的设计和合成 | 第67页 |
| 4.2.5 引物的设计和合成 | 第67-68页 |
| 4.2.6 融合蛋白表达载体的构建 | 第68页 |
| 4.2.7 融合蛋白Scl2-M-hbFGF的表达 | 第68-69页 |
| 4.2.8 重组大肠杆菌pET28a-Scl2-M-hbFGF在10 L发酵罐上的放大培养 | 第69页 |
| 4.2.9 融合蛋白Scl2-M-hbFGF的亲和纯化 | 第69页 |
| 4.2.10 融合蛋白Scl2-M-hbFGF的肠激酶酶切 | 第69页 |
| 4.2.11 hbFGF的分离纯化 | 第69页 |
| 4.2.12 分析测定方法 | 第69-70页 |
| 4.3 结果和讨论 | 第70-77页 |
| 4.3.1 表达载体pET28a-Scl2-M-hbFGF的构建 | 第70-71页 |
| 4.3.2 融合蛋白的表达 | 第71-72页 |
| 4.3.3 重组大肠杆菌pET28a-Scl2-M-hbFGF在10 L发酵罐上放大培养 | 第72页 |
| 4.3.4 融合蛋白Scl2-M-hbFGF的亲和纯化 | 第72-74页 |
| 4.3.5 融合蛋白Scl2-M-hbFGF的肠激酶酶切和hbFGF的分离纯化 | 第74-76页 |
| 4.3.6 hbFGF的生物活性测定 | 第76-77页 |
| 4.4 小结 | 第77-78页 |
| 第五章 类弹性蛋白多肽和L-谷氨酸氧化酶的融合表达及性质研究 | 第78-96页 |
| 5.1 前言 | 第78-79页 |
| 5.2 材料与方法 | 第79-84页 |
| 5.2.1 菌株和质粒 | 第79页 |
| 5.2.2 主要仪器 | 第79页 |
| 5.2.3 培养基 | 第79页 |
| 5.2.4 引物设计和合成 | 第79-80页 |
| 5.2.5 表达载体pET-LGOX-ELP的构建 | 第80页 |
| 5.2.6 融合蛋白LGOX-ELP的表达 | 第80页 |
| 5.2.7 融合蛋白LGOX-ELP在30 L发酵罐上的放大培养 | 第80-81页 |
| 5.2.8 成熟LGOX的制备 | 第81-82页 |
| 5.2.9 成熟LGOX的酶学性质研究 | 第82-83页 |
| 5.2.10 分析测定方法 | 第83-84页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第84-94页 |
| 5.3.1 表达载体pET-LGOX-ELP的构建 | 第84页 |
| 5.3.2 融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第84-86页 |
| 5.3.3 融合蛋白在30 L发酵罐中的培养 | 第86-88页 |
| 5.3.4 成熟L-GOX的获取 | 第88-89页 |
| 5.3.5 成熟L-GOX的性质研究 | 第89-94页 |
| 5.4 小结 | 第94-96页 |
| 第六章 成熟的L谷氨酸氧化酶催化L-谷氨酸生产α-酮戊二酸的研究 | 第96-107页 |
| 6.1 前言 | 第96页 |
| 6.2 材料与方法 | 第96-99页 |
| 6.2.1 实验材料和试剂 | 第96页 |
| 6.2.2 主要实验仪器 | 第96页 |
| 6.2.3 游离的成熟LGOX催化L-谷氨酸生成α-KG的研究 | 第96-98页 |
| 6.2.4 固定化树脂LX-1000HA的活化 | 第98页 |
| 6.2.5 酶的固定化 | 第98页 |
| 6.2.6 固定化酶在3 L发酵罐上催化生成α-KG的研究 | 第98-99页 |
| 6.2.7 固定化酶在800 L发酵罐上催化生成α-KG的研究 | 第99页 |
| 6.2.8 固定化酶在800 L发酵罐上催化生成α-KG的使用次数 | 第99页 |
| 6.2.9 分析测定方法 | 第99页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第99-105页 |
| 6.3.1 过氧化氢酶最适添加量的确定 | 第99-101页 |
| 6.3.2 最适底物浓度的确定 | 第101页 |
| 6.3.3 固定化酶在3 L发酵罐上催化生成α-KG的研究 | 第101-103页 |
| 6.3.4 固定化酶在800 L发酵罐上催化生成α-KG的研究 | 第103-104页 |
| 6.3.5 固定化酶在800 L发酵罐上催化生成α-KG的使用次数 | 第104-105页 |
| 6.4 小结 | 第105-107页 |
| 第七章 结论与展望 | 第107-111页 |
| 7.1 结论 | 第107-109页 |
| 7.2 创新点 | 第109页 |
| 7.3 展望 | 第109-111页 |
| 参考文献 | 第111-125页 |
| 作者筒历 | 第125-126页 |
| 教育经历 | 第125页 |
| 攻读博士期间的科研成果 | 第125-126页 |
| 会议论文 | 第126页 |
