| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第1章 前言 | 第10-20页 |
| 1.1 1,3-丙二醇 | 第10-11页 |
| 1.1.1 1,3-丙二醇理化性质 | 第10页 |
| 1.1.2 1,3-丙二醇的应用 | 第10-11页 |
| 1.2 1,3-丙二醇生产途径 | 第11-14页 |
| 1.2.1 化学合成 | 第11-12页 |
| 1.2.2 生物合成 | 第12-14页 |
| 1.3 1,3-丙二醇氧化还原酶 | 第14-15页 |
| 1.4 3-羟基丙醛 | 第15-16页 |
| 1.5 蛋白质纯化概况 | 第16-17页 |
| 1.6 定点突变概况 | 第17-19页 |
| 1.6.1 定点突变的种类 | 第18页 |
| 1.6.2 定点突变的应用 | 第18-19页 |
| 1.7 选题的目的及意义 | 第19-20页 |
| 第2章 材料与方法 | 第20-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-34页 |
| 2.2.1 感受态细胞的制备 | 第20-21页 |
| 2.2.2 dhaT的克隆 | 第21-22页 |
| 2.2.3 平末端PCR产物 3’端添加碱基A | 第22页 |
| 2.2.4 dhaT克隆质粒的构建 | 第22-23页 |
| 2.2.5 连接产物的转化 | 第23页 |
| 2.2.6 菌落PCR | 第23-24页 |
| 2.2.7 质粒的提取与测序 | 第24页 |
| 2.2.8 dhaT表达质粒的构建 | 第24-25页 |
| 2.2.9 定点突变 | 第25-28页 |
| 2.2.10 菌体裂解与蛋白质纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.11 蛋白质含量的测定 | 第29-30页 |
| 2.2.12 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第30-31页 |
| 2.2.13 酶的活性测定 | 第31-32页 |
| 2.2.14 酶的动力学参数 | 第32页 |
| 2.2.15 酶的稳定性 | 第32-34页 |
| 第3章 dhaT基因的克隆及其突变体的构造 | 第34-48页 |
| 3.1 扩增dhaT基因 | 第34页 |
| 3.2 构建克隆载体 | 第34-35页 |
| 3.3 构建表达质粒 | 第35-37页 |
| 3.4 3-HPA对DhaT的抑制作用及其机制 | 第37-38页 |
| 3.5 DhaT氨基酸序列分析及突变策略 | 第38-41页 |
| 3.6 DhaT突变体的构造与表达 | 第41-45页 |
| 3.7 DhaT及其突变体的纯化 | 第45-46页 |
| 3.8 小结 | 第46-48页 |
| 第4章 DhaT及其突变体的活性和稳定性 | 第48-58页 |
| 4.1 DhaT单突变体的活性和稳定性 | 第48-49页 |
| 4.1.1 DhaT单突变体的活性 | 第48页 |
| 4.1.2 DhaT单突变体的稳定性 | 第48-49页 |
| 4.2 DhaT双重突变体的活性和稳定性 | 第49-51页 |
| 4.2.1 DhaT双重突变体的活性 | 第49-50页 |
| 4.2.2 DhaT双重突变体的稳定性 | 第50-51页 |
| 4.3 DhaT三重突变体的活性和稳定性 | 第51-52页 |
| 4.3.1 DhaT三重突变体的活性 | 第51-52页 |
| 4.3.2 DhaT三重突变体的稳定性 | 第52页 |
| 4.4 DhaT和DhaT_3-1 在不同浓度 3-HPA下的稳定性 | 第52-53页 |
| 4.5 硫醇基对DhaT_3-1 稳定性的影响 | 第53-54页 |
| 4.6 稳定突变体的正向反应 | 第54-55页 |
| 4.7 DhaT及其突变体的最适温度和最适pH | 第55-56页 |
| 4.8 DhaT与突变体的动力学研究 | 第56页 |
| 4.9 小结 | 第56-58页 |
| 第5章 结论与讨论 | 第58-60页 |
| 5.1 结论 | 第58页 |
| 5.2 讨论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-70页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |