| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 前言 | 第13-25页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒的发现、分类 | 第13-14页 |
| 1.1.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒的发现历程 | 第13页 |
| 1.1.2 猪繁殖与呼吸综合征病毒的分类 | 第13-14页 |
| 1.2 猪繁殖与呼吸综合征病毒的生物学特性 | 第14页 |
| 1.2.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒的形态特征 | 第14页 |
| 1.2.2 猪繁殖与呼吸综合征病毒的理化特征 | 第14页 |
| 1.2.3 猪繁殖与呼吸综合征病毒的细胞培养 | 第14页 |
| 1.3 猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子生物学特性 | 第14-18页 |
| 1.3.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因组成 | 第14-15页 |
| 1.3.2 PRRSV的结构蛋白及功能 | 第15-18页 |
| 1.3.3 PRRSV的非结构蛋白 | 第18页 |
| 1.4 PRRSV的致病机理及危害 | 第18-19页 |
| 1.4.1 致病机理 | 第18页 |
| 1.4.2 危害 | 第18-19页 |
| 1.5 PRRSV的免疫学研究 | 第19-20页 |
| 1.5.1 体液免疫 | 第19页 |
| 1.5.2 细胞免疫 | 第19-20页 |
| 1.6 PRRSV的预防及诊断 | 第20-22页 |
| 1.6.1 PRRSV的预防 | 第20页 |
| 1.6.2 诊断方法 | 第20-22页 |
| 1.7 抗原表位研究进展 | 第22-25页 |
| 1.7.1 PRRSV结构蛋白T细胞表位的研究进展 | 第22-23页 |
| 1.7.2 PRRSV结构蛋白B细胞表位的研究进展 | 第23-25页 |
| 2 PRRSV GP2a蛋白的分子克隆及其表位预测 | 第25-39页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.1 材料 | 第25页 |
| 2.1.2 试剂 | 第25页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第26页 |
| 2.2 方法 | 第26-29页 |
| 2.2.1 RNA的提取 | 第26页 |
| 2.2.2 RT-PCR | 第26-27页 |
| 2.2.3 PCR | 第27页 |
| 2.2.4 连接 | 第27-28页 |
| 2.2.5 生物信息学预测CD8~+T细胞表位 | 第28页 |
| 2.2.6 生物信息学预测CD4~+T细胞表位 | 第28-29页 |
| 2.2.7 生物信息学软件预测B细胞表位 | 第29页 |
| 2.3 结果 | 第29-36页 |
| 2.3.1 PCR结果 | 第29-30页 |
| 2.3.2 重组质粒pMD19-T-ORF2的鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3.3 生物信息学预测CD8~+T细胞表位的结果 | 第31-33页 |
| 2.3.4 生物信息学预测CD4~+T细胞表位的结果 | 第33-34页 |
| 2.3.5 生物信息学软件预测GP2a的B细胞表位 | 第34-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-38页 |
| 2.5 小结 | 第38-39页 |
| 3 PRRSV GP2a胞外区的原核表达及免疫原性分析 | 第39-58页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第39-44页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第39页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第39-40页 |
| 3.1.3 主要仪器和耗材 | 第40页 |
| 3.1.4 试剂配制 | 第40-44页 |
| 3.2 方法 | 第44-50页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第44-45页 |
| 3.2.2 PCR扩增目的基因 | 第45页 |
| 3.2.3 连接 | 第45-46页 |
| 3.2.4 感受态细胞的制备 | 第46页 |
| 3.2.5 化学转化感受态细胞 | 第46-47页 |
| 3.2.6 重组质粒的鉴定 | 第47页 |
| 3.2.7 重组蛋白的表达 | 第47页 |
| 3.2.8 Western Blot鉴定 | 第47-48页 |
| 3.2.9 重组蛋白的可溶性分析 | 第48页 |
| 3.2.10 包涵体蛋白的变性与复性 | 第48-49页 |
| 3.2.11 Bradford法测定蛋白浓度 | 第49页 |
| 3.2.12 重组蛋白的活性检测 | 第49页 |
| 3.2.13 重组蛋白三免Balb/C鼠效价的检测 | 第49-50页 |
| 3.3 结果 | 第50-56页 |
| 3.3.1 目的基因的扩增 | 第50页 |
| 3.3.2 重组质粒pET-32a-eORF2的菌液PCR与双酶切鉴定 | 第50-51页 |
| 3.3.3 重组蛋白的表达及Western Blot鉴定 | 第51-53页 |
| 3.3.4 重组蛋白的可溶性分析 | 第53页 |
| 3.3.5 重组蛋白的变性与复性 | 第53-55页 |
| 3.3.6 Bradford法测定蛋白浓度 | 第55页 |
| 3.3.7 重组蛋白的活性检测 | 第55-56页 |
| 3.3.8 重组蛋白三免后效价的测定 | 第56页 |
| 3.4 讨论 | 第56-57页 |
| 3.5 小结 | 第57-58页 |
| 4 PRRSV GP2a胞外区T、B细胞表位鉴定 | 第58-70页 |
| 4.1 材料 | 第58-60页 |
| 4.1.1 主要实验材料 | 第58页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第58页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第58-59页 |
| 4.1.4 试剂配制 | 第59-60页 |
| 4.2 方法 | 第60-65页 |
| 4.2.1 动物免疫 | 第60页 |
| 4.2.2 多肽合成 | 第60-61页 |
| 4.2.3 EndoTree(?)plasimid Mega Kits大提试剂盒提取质粒 | 第61-62页 |
| 4.2.4 氯化铵法分离Balb/C鼠脾细胞 | 第62-63页 |
| 4.2.5 IFN-γ ELISA | 第63页 |
| 4.2.6 B细胞表位鉴定 | 第63-64页 |
| 4.2.7 T细胞表位的鉴定 | 第64-65页 |
| 4.3 结果 | 第65-68页 |
| 4.3.1 动物三免后效价检测结果 | 第65页 |
| 4.3.2 B细胞表位鉴定 | 第65-67页 |
| 4.3.3 T细胞表位的鉴定 | 第67-68页 |
| 4.4 讨论 | 第68-69页 |
| 4.5 小结 | 第69-70页 |
| 5 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 附录:英文缩略词表 | 第79-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 个人简历 | 第82页 |
