| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 英语缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-33页 |
| 1.1 单纯疱疹病毒Ⅱ型概述 | 第14-15页 |
| 1.2 HSV-2 的形态与结构 | 第15页 |
| 1.3 HSV-2 基因组及其表达 | 第15-16页 |
| 1.3.1 HSV-2 的基因组结构 | 第15-16页 |
| 1.3.2 HSV-2 的基因表达 | 第16页 |
| 1.4 HSV-2 基因组调控病毒潜伏复发 | 第16-25页 |
| 1.4.1 LAT基因概述 | 第16-18页 |
| 1.4.1.1 HSV-2 LAT结构 | 第17页 |
| 1.4.1.2 HSV-2 LAT开放读码框（ORF） | 第17-18页 |
| 1.4.1.3 LAT启动子 | 第18页 |
| 1.4.2 LAT基因与HSV-2 潜伏再激活 | 第18-21页 |
| 1.4.2.1 HSV-2 的潜伏与再激活 | 第18-19页 |
| 1.4.2.2 LAT基因在HSV-2 潜伏再激活中的作用 | 第19-21页 |
| 1.4.3 LAT基因编码的microRNA | 第21-23页 |
| 1.4.4 LAT编码的miRNA与HSV-2 潜伏再激活 | 第23-25页 |
| 1.5 宿主细胞蛋白调控病毒潜伏复发 | 第25-30页 |
| 1.5.1 CTCF蛋白概述 | 第25-26页 |
| 1.5.2 CTCF转录调控功能概述 | 第26-27页 |
| 1.5.3 CTCF在疱疹病毒潜伏复发中的作用概述 | 第27-30页 |
| 1.5.3.1 CTCF在EBV潜伏复发中的作用 | 第27-28页 |
| 1.5.3.2 CTCF在KSHV潜伏复发中的作用 | 第28-29页 |
| 1.5.3.3 CTCF在HSV潜伏复发中的作用 | 第29-30页 |
| 1.6 本课题的研究意义及主要内容 | 第30-33页 |
| 1.6.1 本课题的研究意义 | 第30-31页 |
| 1.6.2 本课题的研究内容 | 第31-33页 |
| 第二章 生物信息学预测CTCF结合位点及调控功能验证分析 | 第33-59页 |
| 2.1 引言 | 第33-34页 |
| 2.2 主要实验材料 | 第34-38页 |
| 2.2.1 实验耗材和仪器 | 第34页 |
| 2.2.2 病毒株，菌株，质粒和细胞 | 第34-35页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第35-36页 |
| 2.2.4 溶液配置 | 第36-38页 |
| 2.3 技术路线 | 第38页 |
| 2.4 实验方法 | 第38-52页 |
| 2.4.1 生物信息学预测 | 第38-39页 |
| 2.4.1.1 比较两型单纯疱疹CTCF结合序列的位置区别 | 第38-39页 |
| 2.4.1.2 HSV-2 中CTCF结合位点预测 | 第39页 |
| 2.4.2 细胞实验 | 第39-41页 |
| 2.4.2.1 细胞复苏 | 第39页 |
| 2.4.2.2 细胞换液及传代 | 第39-40页 |
| 2.4.2.3 细胞冻存 | 第40页 |
| 2.4.2.4 细胞计数 | 第40-41页 |
| 2.4.3 病毒扩增实验 | 第41页 |
| 2.4.4 预测片段重组质粒的构建 | 第41-47页 |
| 2.4.4.1 提取病毒DNA | 第41-42页 |
| 2.4.4.2 PCR扩增引物设计 | 第42-43页 |
| 2.4.4.3 PCR扩增预测结合片段 | 第43-44页 |
| 2.4.4.4 琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物 | 第44-45页 |
| 2.4.4.5 凝胶回收并纯化PCR目的产物 | 第45-47页 |
| 2.4.5 pGL3-promoter-binding motifs重组质粒的扩增 | 第47-50页 |
| 2.4.5.1 感受态大肠杆菌DH5α 的制备 | 第47-48页 |
| 2.4.5.2 重组质粒pGL3-promoter-binding motifs的转化大肠杆菌 | 第48页 |
| 2.4.5.3 重组质粒的提取 | 第48-49页 |
| 2.4.5.4 重组质粒的双酶切鉴定 | 第49-50页 |
| 2.4.5.5 测序鉴定重组载体上的插入序列 | 第50页 |
| 2.4.6 重组质粒转染 293T细胞 | 第50-51页 |
| 2.4.6.1 293T细胞的复苏和培养 | 第50页 |
| 2.4.6.2 质粒传染 293T细胞 | 第50-51页 |
| 2.4.7 双荧光检测 | 第51页 |
| 2.4.8 统计学分析 | 第51-52页 |
| 2.5 结果与讨论 | 第52-57页 |
| 2.5.1 两型单纯疱疹病毒高频“CCCTC”与“CTCCC”位置区别 | 第52页 |
| 2.5.2 HSV-2 感染Vero细胞 | 第52-53页 |
| 2.5.3 HSV-2 中CTCF结合位点预测 | 第53-55页 |
| 2.5.3.1 HSV-2 全基因组及LAT序列分析 | 第53-54页 |
| 2.5.3.2 CTCF结合序列“CCCTC”与“CTCCC”频次分析 | 第54-55页 |
| 2.5.4 预测片段重组质粒构建 | 第55-56页 |
| 2.5.5 双荧光报告检测 | 第56-57页 |
| 2.6 讨论 | 第57-59页 |
| 第三章 单纯疱疹病毒Ⅱ型在SH-SY5Y细胞中潜伏模型的建立 | 第59-67页 |
| 3.1 前言 | 第59页 |
| 3.2 实验材料 | 第59-61页 |
| 3.2.1 主要仪器和设备 | 第59-60页 |
| 3.2.2 细胞和病毒 | 第60页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第60页 |
| 3.2.4 溶液的配置 | 第60-61页 |
| 3.3 技术路线 | 第61页 |
| 3.4 实验方法 | 第61-63页 |
| 3.4.1 SH-SY5Y细胞的培养 | 第61-62页 |
| 3.4.1.1SH-SY5Y细胞的复苏 | 第61-62页 |
| 3.4.1.2 SH-SY5Y细胞的传代 | 第62页 |
| 3.4.1.3 SH-SY5Y细胞的冻存 | 第62页 |
| 3.4.2 HSV-2 在SH-SY5Y细胞中潜伏模型的建立 | 第62-63页 |
| 3.4.2.1 阿昔洛韦(ACV)对SH-SY5Y细胞的影响 | 第62-63页 |
| 3.4.2.2 HSV-2 感染ACV处理的SH-SY5Y细胞 | 第63页 |
| 3.5 结果与讨论 | 第63-66页 |
| 3.5.1 SH-SY5Y细胞的培养 | 第63-64页 |
| 3.5.2 阿昔洛韦处理SH-SY5Y细胞 | 第64-65页 |
| 3.5.3 HSV-2 感染SH-SY5Y潜伏模型的建立 | 第65-66页 |
| 3.6 小结 | 第66-67页 |
| 结论与展望 | 第67-69页 |
| 结论 | 第67页 |
| 展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 附件 | 第79页 |
