| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 前言 | 第12-24页 |
| 1 拟穴青蟹Glutaminyl-peptide cyclotransferase基因全长序列的克隆 | 第24-39页 |
| 1.1 试验材料与仪器 | 第24-25页 |
| 1.1.1 试验动物 | 第24页 |
| 1.1.2 试验试剂 | 第24页 |
| 1.1.3 试验仪器与设备 | 第24-25页 |
| 1.2 试验方法 | 第25-32页 |
| 1.2.1 样品采集 | 第25页 |
| 1.2.2 血淋巴总RNA提取 | 第25-26页 |
| 1.2.3 cDNA末端快速扩增（RACE） | 第26-32页 |
| 1.2.3.1 引物设计 | 第26-27页 |
| 1.2.3.2 SMARTer RACE 5’/3’ Kit合成第一链cDNA | 第27-28页 |
| 1.2.3.3 PCR与巢氏PCR进行序列扩增 | 第28-29页 |
| 1.2.3.4 DNA凝胶回收 | 第29-30页 |
| 1.2.3.5 QPCT基因片段克隆载体的连接与转化 | 第30-31页 |
| 1.2.3.6 菌液PCR与测序 | 第31页 |
| 1.2.3.7 测序结果分析 | 第31-32页 |
| 1.3 试验结果分析 | 第32-38页 |
| 1.3.1 全长序列拼接与分析 | 第32-34页 |
| 1.3.2 保守性分析 | 第34-36页 |
| 1.3.3 进化树构建 | 第36-38页 |
| 1.4 讨论 | 第38页 |
| 1.5 小结 | 第38-39页 |
| 2 拟穴青蟹QPCT基因敲低及免疫功能探究 | 第39-56页 |
| 2.1 试验材料与仪器 | 第39-40页 |
| 2.1.1 试验动物与毒种 | 第39页 |
| 2.1.2 试验试剂 | 第39-40页 |
| 2.1.3 试验仪器与设备 | 第40页 |
| 2.2 试验方法 | 第40-49页 |
| 2.2.1 组织表达量检测 | 第40-43页 |
| 2.2.1.1 拟穴青蟹组织总RNA提取 | 第40-41页 |
| 2.2.1.2 cDNA合成 | 第41-42页 |
| 2.2.1.3 实时荧光定量检测 | 第42-43页 |
| 2.2.1.4 结果分析 | 第43页 |
| 2.2.2 dsRNA质粒构建 | 第43-44页 |
| 2.2.2.1 HT115感受态细胞的制备 | 第43页 |
| 2.2.2.2 引物设计 | 第43-44页 |
| 2.2.2.3 融合表达载体 | 第44页 |
| 2.2.3 QPCT-dsRNA的诱导表达 | 第44-45页 |
| 2.2.3.2 dsRNA退火 | 第44页 |
| 2.2.3.3 dsRNA纯化 | 第44-45页 |
| 2.2.3.4 dsRNA纯度检测 | 第45页 |
| 2.2.4 QPCT-dsRNA干扰效果检测 | 第45-46页 |
| 2.2.4.2 RNA提取 | 第45页 |
| 2.2.4.3 cDNA合成 | 第45-46页 |
| 2.2.4.4 实时荧光定量检测 | 第46页 |
| 2.2.5 免疫基因检测 | 第46-47页 |
| 2.2.5.2 引物设计 | 第46-47页 |
| 2.2.5.3 dsRNA注射处理 | 第47页 |
| 2.2.5.4 RNA提取 | 第47页 |
| 2.2.5.5 cDNA合成 | 第47页 |
| 2.2.5.6 实时荧光定量检测 | 第47页 |
| 2.2.6 免疫活性检测 | 第47-48页 |
| 2.2.6.2 dsRNA注射处理 | 第48页 |
| 2.2.6.3 血细胞总数（THC）检测 | 第48页 |
| 2.2.6.4 PO活性 | 第48页 |
| 2.2.6.5 SOD活性 | 第48页 |
| 2.2.7 数据统计 | 第48-49页 |
| 2.3 试验结果 | 第49-54页 |
| 2.3.1 QPCT组织表达差异性分析 | 第49页 |
| 2.3.2 dsRNA体外试验干扰QPCT表达 | 第49-52页 |
| 2.3.2.1 QPCT-dsRNA质粒构建 | 第49-50页 |
| 2.3.2.2 dsRNA纯度检测 | 第50页 |
| 2.3.2.3 QPCT-dsRNA干扰效果检测 | 第50-51页 |
| 2.3.2.4 干扰时效检测 | 第51-52页 |
| 2.3.3 重要相关免疫基因的表达量检测 | 第52页 |
| 2.3.4 免疫活性检测 | 第52-54页 |
| 2.3.4.1 血细胞总数（THC）检测 | 第52-53页 |
| 2.3.4.2 酚氧化酶（PO）活性 | 第53页 |
| 2.3.4.3 超氧化物歧化酶（SOD）活性 | 第53-54页 |
| 2.4 讨论 | 第54-55页 |
| 2.5 小结 | 第55-56页 |
| 3 拟穴青蟹QPCT基因抗菌活性的探究 | 第56-66页 |
| 3.1 试验材料与仪器 | 第56页 |
| 3.1.1 试验动物与毒种 | 第56页 |
| 3.1.2 试验试剂 | 第56页 |
| 3.1.3 试验仪器与设备 | 第56页 |
| 3.2 试验方法 | 第56-60页 |
| 3.2.1 病原诱导表达变化分析 | 第56页 |
| 3.2.1.1 拟穴青蟹攻毒处理 | 第56页 |
| 3.2.1.2 RNA提取 | 第56页 |
| 3.2.1.3 cDNA合成 | 第56页 |
| 3.2.1.4 实时荧光定量检测 | 第56页 |
| 3.2.1.5 结果分析 | 第56页 |
| 3.2.2 Kaplan–Meier生存分析试验 | 第56-57页 |
| 3.2.2.1 dsRNA及攻毒处理 | 第57页 |
| 3.2.2.2 分组设计 | 第57页 |
| 3.2.2.3 数据统计 | 第57页 |
| 3.2.3 吞噬试验 | 第57-59页 |
| 3.2.3.1 FITC标记V. alginolyticus | 第57-58页 |
| 3.2.3.2 拟穴青蟹血淋巴细胞培养 | 第58页 |
| 3.2.3.3 吞噬与制片 | 第58-59页 |
| 3.2.3.4 流式细胞术计算吞噬百分率 | 第59页 |
| 3.2.4 THC检测 | 第59页 |
| 3.2.5 血细胞凋亡 | 第59-60页 |
| 3.2.6 数据统计 | 第60页 |
| 3.3 试验结果 | 第60-65页 |
| 3.3.1 病原诱导QPCT表达变化分析 | 第60页 |
| 3.3.2 Kaplan–Meier生存分析试验 | 第60-61页 |
| 3.3.3 QPCT对细胞吞噬作用的影响 | 第61-63页 |
| 3.3.3.1 QPCT对细胞吞噬的影响 | 第61-62页 |
| 3.3.3.2 QPCT对细胞骨架蛋白的影响 | 第62-63页 |
| 3.3.4 THC检测 | 第63-64页 |
| 3.3.5 QPCT对细胞凋亡的影响 | 第64-65页 |
| 3.4 讨论 | 第65页 |
| 3.5 小结 | 第65-66页 |
| 4 拟穴青蟹QPCT基因促进病毒复制的研究 | 第66-80页 |
| 4.1 试验材料与仪器 | 第66页 |
| 4.1.1 试验动物与毒种 | 第66页 |
| 4.1.2 试验试剂 | 第66页 |
| 4.1.3 试验仪器与设备 | 第66页 |
| 4.2 试验方法 | 第66-72页 |
| 4.2.1 病原诱导QPCT表达变化分析 | 第66-67页 |
| 4.2.1.1 实验材料处理 | 第66页 |
| 4.2.1.2 RNA提取 | 第66页 |
| 4.2.1.3 cDNA合成 | 第66页 |
| 4.2.1.4 实时荧光定量检测 | 第66页 |
| 4.2.1.5 结果分析 | 第66-67页 |
| 4.2.2 WSSV提取与纯化 | 第67页 |
| 4.2.3 病毒拷贝数检测 | 第67-69页 |
| 4.2.3.1 dsRNA注射处理 | 第67页 |
| 4.2.3.2 基因组DNA提取 | 第67-68页 |
| 4.2.3.3 检测体系与程序 | 第68-69页 |
| 4.2.3.4 数据分析 | 第69页 |
| 4.2.4 THC检测 | 第69页 |
| 4.2.5 Kaplan–Meier生存分析试验 | 第69-70页 |
| 4.2.5.1 分组设计 | 第69页 |
| 4.2.5.2 数据统计 | 第69-70页 |
| 4.2.6 细胞吞噬试验 | 第70-71页 |
| 4.2.6.1 WSSV病毒灭活 | 第70页 |
| 4.2.6.2 FITC标记病毒 | 第70页 |
| 4.2.6.3 拟穴青蟹血淋巴细胞培养 | 第70页 |
| 4.2.6.4 吞噬与制片 | 第70-71页 |
| 4.2.6.5 流式细胞术计算吞噬百分率 | 第71页 |
| 4.2.7 血细胞凋亡 | 第71页 |
| 4.2.8 数据统计 | 第71-72页 |
| 4.3 试验结果 | 第72-78页 |
| 4.3.1 病原诱导表达变化分析 | 第72页 |
| 4.3.2 THC检测 | 第72-73页 |
| 4.3.3 WSSV提取 | 第73-74页 |
| 4.3.4 WSSV拷贝数检测 | 第74页 |
| 4.3.5 Kaplan–Meier生存分析试验 | 第74-75页 |
| 4.3.6 QPCT对细胞吞噬作用的影响 | 第75-77页 |
| 4.3.6.1 QPCT对细胞吞噬的影响 | 第75-76页 |
| 4.3.6.2 QPCT对细胞骨架蛋白的影响 | 第76-77页 |
| 4.3.7 QPCT对细胞凋亡的影响 | 第77-78页 |
| 4.4 讨论 | 第78-79页 |
| 4.5 小结 | 第79-80页 |
| 5. 全文总结 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-86页 |
| 个人简介 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
