| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第11-21页 |
| 1.1 引言 | 第11页 |
| 1.2 PUF蛋白的典型特征 | 第11-13页 |
| 1.2.1 多种生物中表达 | 第11页 |
| 1.2.2 序列和结构高度保守 | 第11-12页 |
| 1.2.3 调控多种靶标mRNA | 第12-13页 |
| 1.2.4 与多种蛋白相互作用 | 第13页 |
| 1.3 PUF蛋白的生物功能 | 第13-14页 |
| 1.3.1 功能多样性 | 第13-14页 |
| 1.3.2 共同功能—维持干细胞 | 第14页 |
| 1.4 研究PUF蛋白常用的分子生物学技术 | 第14-19页 |
| 1.4.1 分光光度技术 | 第14页 |
| 1.4.2 电泳技术 | 第14-16页 |
| 1.4.2.1 琼脂糖凝胶电泳 | 第14-15页 |
| 1.4.2.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第15页 |
| 1.4.2.3 免疫电泳 | 第15页 |
| 1.4.2.4 等电聚焦电泳 | 第15-16页 |
| 1.4.3 聚合酶链式反应 | 第16页 |
| 1.4.4 分子杂交技术 | 第16-17页 |
| 1.4.4.1 Southern Blot | 第17页 |
| 1.4.4.2 Northern Blot | 第17页 |
| 1.4.4.3 Western Blot | 第17页 |
| 1.4.5 免疫沉淀技术 | 第17-18页 |
| 1.4.5.1 免疫共沉淀技术 | 第17-18页 |
| 1.4.5.2 染色质疫沉淀技术 | 第18页 |
| 1.4.5.3 RNA结合蛋白免疫沉淀技术 | 第18页 |
| 1.4.6 免疫组织化学技术 | 第18页 |
| 1.4.7 HE染色技术 | 第18-19页 |
| 1.4.8 核酸测序技术 | 第19页 |
| 1.5 生物体PUF蛋白表达的研究进展 | 第19页 |
| 1.6 本课题的基本思路和目的 | 第19-21页 |
| 第2章 现代分子生物学技术研究哺乳动物PUM1蛋白在生殖发育中的表达 | 第21-36页 |
| 2.1 引言 | 第21-22页 |
| 2.2 实验部分 | 第22-26页 |
| 2.2.1 仪器和试剂 | 第22页 |
| 2.2.2 实验动物 | 第22-23页 |
| 2.2.3 实验方法 | 第23-26页 |
| 2.2.3.1 超声匀浆法提取小鼠组织蛋白 | 第23页 |
| 2.2.3.2 Trizol法提取小鼠组织总RNA | 第23页 |
| 2.2.3.3 实时荧光定量PCR(RT-PCR) | 第23-24页 |
| 2.2.3.4 蛋白质免疫印迹实验(Western Blot) | 第24-25页 |
| 2.2.3.5 脱水、包埋和石蜡切片 | 第25页 |
| 2.2.3.6 HE染色 | 第25页 |
| 2.2.3.7 免疫组织化学实验(IHC) | 第25-26页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第26-35页 |
| 2.3.1 小鼠Pum1蛋白的分子量 | 第26页 |
| 2.3.2 成年小鼠各个组织中Pum1的表达 | 第26-29页 |
| 2.3.3 不同时间点小鼠睾丸中Pum1的表达 | 第29-31页 |
| 2.3.4 小鼠各个组织中Pum1蛋白细胞定位实验 | 第31-34页 |
| 2.3.4.1 小鼠睾丸中Pum1的定位 | 第31-32页 |
| 2.3.4.2 小鼠卵巢中Pum1的定位 | 第32-33页 |
| 2.3.4.3 小鼠皮肤中Pum1的定位 | 第33-34页 |
| 2.3.5 人睾丸中PUM1蛋白细胞定位实验 | 第34-35页 |
| 2.4 小结 | 第35-36页 |
| 第3章 现代分子生物学技术研究哺乳动物PUM2蛋白在生殖发育中的表达 | 第36-50页 |
| 3.1 引言 | 第36-37页 |
| 3.2 实验部分 | 第37-39页 |
| 3.2.1 仪器和试剂 | 第37页 |
| 3.2.2 实验动物 | 第37-38页 |
| 3.2.3 实验方法 | 第38-39页 |
| 3.2.3.1 超声匀浆法提取小鼠组织蛋白 | 第38页 |
| 3.2.3.2 Trizol法提取小鼠组织总RNA | 第38页 |
| 3.2.3.3 实时荧光定量PCR(RT-PCR) | 第38页 |
| 3.2.3.4 蛋白质免疫印迹实验(Western Blot) | 第38页 |
| 3.2.3.5 脱水、包埋和石蜡切片 | 第38页 |
| 3.2.3.6 HE染色 | 第38-39页 |
| 3.2.3.7 免疫组织化学实验(HC) | 第39页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第39-48页 |
| 3.3.1 小鼠Pum2蛋白的分子量 | 第39-40页 |
| 3.3.2 成年小鼠各个组织中Pum2的表达 | 第40-42页 |
| 3.3.3 不同时间点小鼠睾丸中Pum2的表达 | 第42-43页 |
| 3.3.4 小鼠各个组织中Pum2蛋白细胞定位实验 | 第43-47页 |
| 3.3.4.1 小鼠睾丸中Pum2的定位 | 第43-45页 |
| 3.3.4.2 小鼠卵巢中Pum2的定位 | 第45-46页 |
| 3.3.4.3 小鼠皮肤中Pum2的定位 | 第46页 |
| 3.3.4.4 小鼠脑组织中Pum2的定位 | 第46-47页 |
| 3.3.5 人睾丸中PUM2蛋白细胞定位实验 | 第47-48页 |
| 3.4 小结 | 第48-50页 |
| 第4章 RIP技术研究与小鼠PUF蛋白结合的mRNA以及PUF家族功能 | 第50-64页 |
| 4.1 引言 | 第50-51页 |
| 4.2 实验部分 | 第51-54页 |
| 4.2.1 仪器和试剂 | 第51-52页 |
| 4.2.2 实验动物 | 第52页 |
| 4.2.3 RNA结合蛋白免疫沉淀实验 | 第52-53页 |
| 4.2.3.1 预处理样品组织裂解液 | 第52页 |
| 4.2.3.2 免疫沉淀实验 | 第52页 |
| 4.2.3.3 Trizol法提Beads中RNA | 第52-53页 |
| 4.2.4 实时荧光定量PCR | 第53-54页 |
| 4.2.5 研磨法提取小鼠睾丸蛋白 | 第54页 |
| 4.2.6 蛋白质免疫印迹实验 | 第54页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第54-62页 |
| 4.3.1 Pum1和Pum2的关系 | 第54-55页 |
| 4.3.2 RNA结合蛋白免疫沉淀实验(RIP) | 第55-61页 |
| 4.3.2.1 RIP实验原理 | 第55-56页 |
| 4.3.2.2 Pum1 RIP实验 | 第56-58页 |
| 4.3.2.3 Pum2 RIP实验 | 第58-61页 |
| 4.3.3 Pum1和Pum2蛋白与其他蛋白的关系 | 第61-62页 |
| 4.4 小结 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-77页 |
| 攻读硕士期间的主要科研成果 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
