| 第一章 伪狂犬病病毒分子生物学研究进展 | 第10-28页 |
| §1 引言 | 第10-11页 |
| §2 PRV流行病学与特点 | 第11-12页 |
| §3 PRV的一般生物学特征 | 第12-14页 |
| §4 PRV基因组的结构与功能 | 第14-16页 |
| §4．1 PRV基因组的结构 | 第14-15页 |
| §4．2 PRV基因组的功能和转录 | 第15-16页 |
| §5 PRV基因组编码的主要蛋白及其功能 | 第16-19页 |
| §5．1 PRV基因组编码的糖蛋白及其功能 | 第17-18页 |
| §5．1．1 非必须糖蛋白 | 第17-18页 |
| §5．1．2 必须糖蛋白 | 第18页 |
| §5．2 病毒基因组编码的其它主要蛋白及酶类 | 第18-19页 |
| §5．2．1 其它主要蛋白 | 第18-19页 |
| §5．2．2 主要酶类 | 第19页 |
| §6 PRV抗原性与毒力的分子基础 | 第19-21页 |
| §6．1 PRV的毒力的分子基础 | 第19-20页 |
| §6．2 PRV抗原性的分子基础 | 第20-21页 |
| §7 PRV基因工程疫苗及诊断方法的研究进展 | 第21-27页 |
| §7．1 PRV基因工程苗的研究 | 第21-24页 |
| §7．1．1 重组PRV亚单位疫苗 | 第21-22页 |
| §7．1．2 基因缺失标记疫苗 | 第22-23页 |
| §7．1．2．1 单基因缺失疫苗 | 第22页 |
| §7．1．2．2 双／多基因缺失疫苗 | 第22-23页 |
| §7．1．3 构建病毒活载体重组疫苗 | 第23-24页 |
| §7．1．3．1 以腺病毒为载体的重组PRV疫苗 | 第23页 |
| §7．1．3．2 以痘病毒为载体的重组PRV疫苗 | 第23-24页 |
| §7．1．4 基因疫苗 | 第24页 |
| §7．2 PRV鉴别诊断方法的研究 | 第24-27页 |
| §7．2．1 病原学诊断技术 | 第25-26页 |
| §7．2．1．1 病毒分离与动物实验 | 第25页 |
| §7．2．1．2 免疫荧光体染色技术（FA） | 第25页 |
| §7．2．1．3 反向间接血凝试验（RPHA） | 第25页 |
| §7．2．1．4 双抗体夹心ELISA | 第25-26页 |
| §7．2．2 血清学诊断技术 | 第26-27页 |
| §7．2．2．1 对流免疫电泳（CIE） | 第26页 |
| §7．2．2．2 微量血清中和试验（MSN） | 第26页 |
| §7．2．2．3 反向间接血凝（抑制）试验（RPHA／RPHI） | 第26页 |
| §7．2．2．4 酶联免疫吸附试验（ELISA） | 第26-27页 |
| §7．2．3 血清学鉴别ELISA | 第27页 |
| §7．2．3．1 gE-ELISA | 第27页 |
| §7．2．3．2 gG-ELISA | 第27-28页 |
| §7．2．3．3 gC-ELISA | 第28-27页 |
| §8 结束语 | 第27-28页 |
| 第二章 伪狂犬病病毒SE糖蛋白基因的克隆、测序及真核表达质粒构建 | 第28-44页 |
| §1 材料 | 第29-30页 |
| §1．1 病毒 | 第29页 |
| §1．2 细胞 | 第29页 |
| §1．3 菌株和质粒载体 | 第29页 |
| §1．4 主要试剂 | 第29页 |
| §1．5 主要仪器 | 第29-30页 |
| §2 方法 | 第30-39页 |
| §2．1 病毒增殖 | 第30页 |
| §2．2 病毒的纯化 | 第30页 |
| §2．3 PRV-MinA株DNA的提取 | 第30页 |
| §2．4 PRV-MinA株gE基因的PCR扩增 | 第30-31页 |
| §2．4．1 引物的设计与合成 | 第30页 |
| §2．4．2 gE基因的PCR扩增 | 第30-31页 |
| §2．5 PCR产物的纯化 | 第31页 |
| §2．6 扩增产物的酶切 | 第31页 |
| §2．7 酶切产物的纯化 | 第31页 |
| §2．8 克隆载体质粒的制备 | 第31-32页 |
| §2．8．1 感受态细菌的制备 | 第31-32页 |
| §2．8．2 克隆载体质粒的制备 | 第32页 |
| §2．9 克隆载体质粒的酶切 | 第32-33页 |
| §2．10 酶切产物的纯化 | 第33页 |
| §2．11 PCR产物与克隆载体质粒的连接反应 | 第33-34页 |
| §2．12 连接产物转化E．coli．JM109细菌感受态 | 第34页 |
| §2．13 重组质粒的筛选及鉴定 | 第34页 |
| §2．14 重组质粒的酶切分析鉴定 | 第34页 |
| §2．14．1 EcoRI+BamHI双酶切鉴定 | 第34页 |
| §2．14．2 SmaI酶切鉴定 | 第34页 |
| §2．15 重组质粒的PCR鉴定 | 第34-35页 |
| §2．16 gE基因核苷酸序列的测定与分析 | 第35页 |
| §2．17 转移载体质粒的构建 | 第35-36页 |
| §2．17．1 pUgE重组质粒和杆状病毒转座质粒pFastBaclEcoRI+BamHI酶切 | 第35-36页 |
| §2．17．2 EcoRI+BamHI酶切产物的回收与转移载体pFastBac-gE的连接 | 第36页 |
| §2．17．3 重组转移载体pFastBac-gE的构建 | 第36页 |
| §2．18 重组Bacmid的构建与鉴定 | 第36-37页 |
| §2．18．1 Bacmid的构建 | 第36-37页 |
| §2．18．2 rBacmid-gE的PCR鉴定 | 第37页 |
| §2．18．2．1 扩增引物及模板DNA的准备 | 第37页 |
| §2．18．2．2 PCR鉴定 | 第37页 |
| §2．19 rBacmid-gE转染sf9昆虫细胞获取重组病毒 | 第37-39页 |
| §2．19．1 sf9昆虫细胞的培养 | 第37-38页 |
| §2．19．1．1 细胞培养基的配制与使用 | 第37-38页 |
| §2．19．1．2 细胞培养 | 第38页 |
| §2．19．2 重组病毒的获取与保存 | 第38页 |
| §2．19．3 rAcV-Bac-gE的PCR鉴定 | 第38-39页 |
| §2．19．3．1 模板的制备与引物设计 | 第38页 |
| §2．19．3．2 rAcV-Bac-gE的PCR扩增 | 第38-39页 |
| §3 结果 | 第39-42页 |
| §3．1 PRV-gE基因的PCR扩增 | 第39页 |
| §3．2 PRV-gE基因重组质粒的筛选 | 第39页 |
| §3．3 PRV-gE基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列 | 第39-40页 |
| §3．4 重组转移载体pFastBac-gE的筛选及鉴定 | 第40页 |
| §3．5 重组Bacmid的获取及PCR鉴定 | 第40-41页 |
| §3．6 重组病毒rAcV-Bac-gE的获取及PCR鉴定 | 第41-42页 |
| §4 讨论 | 第42-44页 |
| §4．1 关于扩增条件的探讨 | 第42页 |
| §4．2 序列分析探索 | 第42-43页 |
| §4．3 有关表达系统选择的探讨 | 第43-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-53页 |
| 作者简介 | 第53-54页 |
| 附图 | 第54-55页 |
| 附表 | 第55-60页 |
