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通过急性髓性白血病干细胞表面CD123导入溶瘤腺病毒的研究

摘要第1-9页
Abstract第9-11页
缩略词第11-14页
第一章 引言第14-24页
   ·靶向白血病干细胞治疗进展第14-19页
     ·前言第14-16页
     ·白血病干细胞的表型特征第16-18页
     ·LSC 的靶向治疗第18-19页
   ·基于提高腺病毒靶向性的改造策略第19-23页
   ·课题来源第23页
   ·实验目的和意义第23页
   ·创新点第23页
   ·实验方案第23-24页
第二章 溶瘤腺病毒Ad.sp-E1A-sCAR-IL-3 构建及鉴定第24-54页
   ·实验材料第24-28页
     ·主要试剂第24页
     ·主要质粒、菌株及细胞株第24-25页
     ·主要实验仪器第25-26页
     ·主要溶液配制第26-27页
     ·引物的设计与合成第27-28页
   ·实验方法第28-47页
     ·质粒pAd.sp-sCAR-IL-3 的构建步骤及方法第28-41页
     ·病毒Ad.sp-E1A-sCAR-IL-3 的包装、纯化、鉴定、大量扩增及滴度测定第41-47页
   ·实验结果第47-54页
     ·质粒载体pXC2.sp-sCAR-IL-3 的构建及鉴定结果第47-51页
     ·重组目的病毒Ad.sp-E1A-sCAR-IL-3 鉴定第51-54页
第三章 溶瘤腺病毒杀伤白血病干细胞的体外研究第54-68页
   ·实验材料第54-55页
     ·细胞株第54页
     ·病毒第54页
     ·主要仪器设备第54-55页
   ·实验方法第55-58页
     ·融合蛋白sCAR-IL-3 的原核表达第55页
     ·Western blot第55-57页
     ·KG-1 细胞表型分析第57页
     ·MTT 法检测细胞存活率第57页
     ·凋亡细胞染色实验:Hochst 33342 染色第57-58页
     ·电镜观察第58页
     ·统计学分析第58页
   ·实验结果第58-68页
     ·KG-1 细胞表型分析第58-59页
     ·融合蛋白原核表达SDS-PAGE 鉴定第59-60页
     ·融合蛋白sCAR-IL-3 显著提高溶瘤腺病毒杀伤能力第60-62页
     ·重组病毒E1A 蛋白及所携带基因在KG-1 细胞中高效表达第62-63页
     ·电镜观察溶瘤腺病毒高效侵染KG-1 细胞第63页
     ·Ad.sp-E1A-sCAR-IL-3 显著抑制KG-1 增殖第63-64页
     ·重组病毒可以有效诱导KG-1 细胞凋亡第64-65页
     ·电镜观察溶瘤腺病毒诱导KG-1 细胞凋亡第65-66页
     ·Western blot 检测凋亡相关蛋白的表达第66页
     ·溶瘤腺病毒Ad.sp-E1A-sCAR-IL-3 对正常细胞的安全性第66-68页
讨论第68-70页
结论第70-71页
参考文献第71-75页
附录 Ad.sp-sCAR-IL-3 的构建示意图第75-77页
致谢第77-78页
硕士研究生期间发表论文第78-79页
硕士研究生期间参与项目与奖励第79页

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