| 致谢 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5页 |
| 第一章 前言 | 第10-18页 |
| 1.1 马尾松概况 | 第10页 |
| 1.1.1 马尾松简介 | 第10页 |
| 1.1.2 马尾松的生态效益 | 第10页 |
| 1.1.3 马尾松的经济效益 | 第10页 |
| 1.2 针叶树种组织培养研究进展 | 第10-14页 |
| 1.2.1 针叶树组织培养方式 | 第11-12页 |
| 1.2.1.1 直接器官发生 | 第11页 |
| 1.2.1.2 间接器官发生 | 第11页 |
| 1.2.1.3 体胚发生与植株再生 | 第11-12页 |
| 1.2.2 针叶树种器官发生的影响因素 | 第12-13页 |
| 1.2.2.1 外植体 | 第12页 |
| 1.2.2.2 基本培养基类型 | 第12页 |
| 1.2.2.3 植物激素 | 第12-13页 |
| 1.2.2.4 其他原因 | 第13页 |
| 1.2.3 针叶树体胚发生的影响因素 | 第13-14页 |
| 1.3 针叶树种遗传转化研究进展 | 第14-16页 |
| 1.3.1 针叶树遗传转化方法 | 第14-15页 |
| 1.3.1.1 农杆菌介导的针叶树种转化法 | 第14页 |
| 1.3.1.2 基因枪法 | 第14页 |
| 1.3.1.3 电子法 | 第14页 |
| 1.3.1.4 PEG法 | 第14-15页 |
| 1.3.2 农杆菌介导的针叶树遗传转化的影响因素 | 第15-16页 |
| 1.3.2.1 外植体的选择 | 第15页 |
| 1.3.2.2 预培养时间 | 第15页 |
| 1.3.2.3 农杆菌菌液浓度对转化的影响 | 第15页 |
| 1.3.2.4 侵染时间对遗传转化的影响 | 第15-16页 |
| 1.3.2.5 共培养对转化的影响 | 第16页 |
| 1.3.2.6 AS对转化的影响 | 第16页 |
| 1.3.2.7 转化试验中Km的应用 | 第16页 |
| 1.3.2.8 Km添加的时间对产生抗性不定芽的影响 | 第16页 |
| 1.3.2.9 抑菌素的应用 | 第16页 |
| 1.4 RubisCO活化酶基因 | 第16-17页 |
| 1.5 RCA基因工程的研究现状 | 第17页 |
| 1.6 针叶树遗传转化存在的主要问题及其解决方法 | 第17页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 第二章 马尾松成熟胚组织培养再生体系建立 | 第18-28页 |
| 2.1 材料与方法 | 第18-19页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第18页 |
| 2.1.2 试验方法 | 第18-19页 |
| 2.1.2.1 外植体的预处理 | 第18页 |
| 2.1.2.2 成熟合子胚灭菌时间筛选 | 第18页 |
| 2.1.2.3 试验培养条件 | 第18页 |
| 2.1.2.4 基本培养基的筛选 | 第18页 |
| 2.1.2.5 6-BA与NAA组合对不定芽诱导的影响 | 第18页 |
| 2.1.2.6 Vc和柠檬酸对不定芽诱导中褐化的影响 | 第18-19页 |
| 2.1.2.7 6-BA与IBA组合对不定芽增殖的影响 | 第19页 |
| 2.1.2.8 NAA与IBA对不定芽伸长的影响 | 第19页 |
| 2.1.2.9 NAA与IBA组合对试管苗生根的影响 | 第19页 |
| 2.2 结果与分析 | 第19-27页 |
| 2.2.1 不同灭菌时间对外植体的影响 | 第19页 |
| 2.2.2 基本培养基对不定芽诱导的影响 | 第19-20页 |
| 2.2.3 6-BA与NAA组合对不定芽诱导的影响 | 第20-22页 |
| 2.2.4 褐变抑制剂对不定芽诱导中褐化的影响 | 第22页 |
| 2.2.5 6-BA与IBA组合对不定芽增殖的影响 | 第22-24页 |
| 2.2.6 生长素NAA与IBA对不定芽伸长的影响 | 第24-25页 |
| 2.2.7 NAA与IBA组合对试管苗生根的影响 | 第25-27页 |
| 2.3 讨论 | 第27-28页 |
| 第三章 马尾松成熟胚遗传转化研究 | 第28-44页 |
| 3.1 试验材料 | 第28-29页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第28页 |
| 3.1.2 菌株和质粒 | 第28页 |
| 3.1.3 植物组织培养所用培养基 | 第28页 |
| 3.1.4 引物 | 第28-29页 |
| 3.2 试验方法 | 第29-33页 |
| 3.2.1 表达载体转化根癌农杆菌 | 第29页 |
| 3.2.2 阳性克隆的检测 | 第29页 |
| 3.2.3 卡那霉素本底浓度的确定 | 第29-30页 |
| 3.2.3.1 种胚分化的卡那霉素本底浓度的确定 | 第29-30页 |
| 3.2.4 抑菌抗生素浓度的确定 | 第30页 |
| 3.2.5 根癌农杆菌Ti质粒介导转化马尾松种胚 | 第30-31页 |
| 3.2.5.1 外植体的制备 | 第30页 |
| 3.2.5.2 正负对照 | 第30页 |
| 3.2.5.3 外植体的侵染 | 第30-31页 |
| 3.2.5.3.1 菌液的制备 | 第30页 |
| 3.2.5.3.2 外植体的预培养 | 第30页 |
| 3.2.5.3.3 农杆菌侵染 | 第30页 |
| 3.2.5.3.4 共培养与恢复培养 | 第30-31页 |
| 3.2.5.3.5 抗性芽诱导培养 | 第31页 |
| 3.2.5.3.6 增殖分化培养 | 第31页 |
| 3.2.6 影响农杆菌转化的各个因素 | 第31页 |
| 3.2.6.1 预培养时间 | 第31页 |
| 3.2.6.2 菌液浓度 | 第31页 |
| 3.2.6.3 侵染时间 | 第31页 |
| 3.2.6.4 共培养时间 | 第31页 |
| 3.2.6.5 AS浓度 | 第31页 |
| 3.2.7 目的基因的转化效率 | 第31-32页 |
| 3.2.8 RCA小同工型基因在幼苗各个组织中实时定量检测 | 第32-33页 |
| 3.2.8.1 马尾松根茎叶总RNA提取 | 第32页 |
| 3.2.8.2 总RNA质量检测 | 第32页 |
| 3.2.8.3 反转录cDNA第一条链合成 | 第32页 |
| 3.2.8.4 内参引物特异性鉴定 | 第32-33页 |
| 3.2.8.5 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第33页 |
| 3.2.8.6 目的片段半定量鉴定 | 第33页 |
| 3.2.8.7 引物扩增效率的验证 | 第33页 |
| 3.2.8.8 实时定量反应 | 第33页 |
| 3.3 结果与分析 | 第33-42页 |
| 3.3.1 菌液的目的片段的PCR检测 | 第33-34页 |
| 3.3.2 卡那霉素浓度的确定 | 第34-35页 |
| 3.3.2.1 种胚不定芽诱导分化的卡那霉素浓度的确定 | 第34-35页 |
| 3.3.3 抑菌性抗生素浓度的确定 | 第35页 |
| 3.3.4 正负对照 | 第35-36页 |
| 3.3.5 马尾松种胚遗传转化的条件 | 第36-40页 |
| 3.3.5.1 预培养 | 第36-37页 |
| 3.3.5.2 菌液浓度 | 第37-38页 |
| 3.3.5.3 侵染时间 | 第38页 |
| 3.3.5.4 共培养时间 | 第38-39页 |
| 3.3.5.5 AS浓度 | 第39-40页 |
| 3.3.6 转基因马尾松的获得 | 第40页 |
| 3.3.7 RCA小同工型基因在幼苗各个组织中实时定量检测 | 第40-42页 |
| 3.3.7.1 马尾松幼苗的RNA质量检测 | 第41页 |
| 3.3.7.2 内参引物特异性检测 | 第41页 |
| 3.3.7.3 内参基因引物扩增效率检测 | 第41页 |
| 3.3.7.4 半定量检测 | 第41-42页 |
| 3.3.7.5 相对定量图 | 第42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-44页 |
| 第四章 结论与展望 | 第44-46页 |
| 4.1 结论 | 第44-45页 |
| 4.2 展望 | 第45-46页 |
| 4.2.1 直接器官发生的研究中 | 第45页 |
| 4.2.2 转化体系影响因素的研究 | 第45页 |
| 4.2.3 辅助其他处理及多种转化方法结合 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
