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棉铃虫中肠cDNA文库的构建、V-ATP酶亚基B基因的克隆与功能研究

摘要第1-7页
Abstract第7-12页
第一章 引言第12-20页
   ·棉铃虫的危害概况和转Bt棉花的种植情况第12页
   ·苏云金芽孢杆菌及其作用机制第12-14页
     ·苏云金芽孢杆菌简介第12-13页
     ·苏云金芽孢杆菌的作用机制第13-14页
   ·Bt抗性机制第14-15页
   ·昆虫中肠受体种类第15-18页
     ·类钙粘蛋白第15-16页
     ·氨肽酶N第16-17页
     ·碱性磷酸酯酶第17页
     ·糖脂第17页
     ·肌动蛋白和 V-ATP酶第17-18页
   ·文库构建的研究进展第18-19页
   ·本实验的目的和意义第19-20页
第二章 棉铃虫中肠均一化cDNA文库的构建第20-33页
   ·材料与方法第20-27页
     ·供试昆虫第20页
     ·主要药剂第20-21页
     ·主要仪器设备第21页
     ·培养基及试剂的配制第21-22页
     ·技术路线第22页
     ·主要方法第22-27页
   ·结果与分析第27-31页
     ·棉铃虫中肠RNA的提取第27-28页
     ·cDNA双链的合成第28页
     ·均一化处理第28-29页
     ·cDNA文库质量的鉴定第29页
     ·EST序列测定与拼接第29页
     ·序列分析第29-31页
   ·讨论第31-33页
第三章 棉铃虫中肠V-ATP酶亚基B的基因克隆第33-46页
   ·材料与方法第33-39页
     ·供试昆虫第33页
     ·主要试剂第33-34页
     ·主要仪器设备第34页
     ·培养基及试剂的配制第34-35页
     ·技术路线第35页
     ·主要方法第35-39页
   ·结果与分析第39-44页
     ·棉铃虫中肠总RNA的提取第39-40页
     ·V-ATP酶亚基B基因PCR扩增产物第40-41页
     ·序列结果与分析第41-42页
     ·氨基酸序列同源性分析第42-44页
   ·讨论第44-46页
第四章 棉铃虫V-ATP酶亚基B基因的原核表达及Ligand Blot分析第46-56页
   ·材料与方法第46-52页
     ·供试昆虫第46页
     ·主要试剂第46-47页
     ·主要仪器设备第47页
     ·培养基及试剂的配制第47-50页
     ·技术路线第50页
     ·主要方法第50-52页
   ·结果与分析第52-54页
     ·目的蛋白的诱导表达第52页
     ·Western blot 分析第52-53页
     ·Ligand blot 分析第53-54页
     ·生物学测定结果第54页
   ·讨论第54-56页
第五章 抗感棉铃虫V-ATP酶亚基B基因表达量的比较第56-64页
   ·材料与方法第56-60页
     ·供试昆虫第56页
     ·主要试剂第56-57页
     ·仪器设备第57页
     ·培养基及试剂的配制第57-58页
     ·技术路线第58页
     ·主要方法第58-60页
   ·结果与分析第60-62页
     ·棉铃虫RNA的提取和cDNA的合成第60页
     ·扩增效率的验证第60页
     ·棉铃虫不同虫态V-ATP酶亚基B基因的表达第60-61页
     ·棉铃虫肠道不同部位V-ATP酶亚基B基因的表达第61页
     ·棉铃虫不同品系V-ATP酶亚基B基因的表达第61-62页
   ·讨论第62-64页
第六章 全文结论第64-66页
参考文献第66-73页
致谢第73-74页
作者简历第74页

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