| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-16页 |
| 缩略语 | 第17-18页 |
| 引言 | 第18-21页 |
| 第一章 文献综述 | 第21-49页 |
| 1 链格孢菌及其产毒相关基因研究概况 | 第21-29页 |
| 1.1 对基质广适性的链格孢种—链格孢(Alternaria alternata(Fr.)Keissler) | 第21-22页 |
| 1.2 链格孢毒素及其产毒相关基因研究概况 | 第22-29页 |
| 2 组氨酸磷酸酶家族研究进展 | 第29-37页 |
| 2.1 结构特征 | 第29-32页 |
| 2.2 组氨酸磷酸酶家族基因功能 | 第32-35页 |
| 2.3 医学和应用价值 | 第35-37页 |
| 3 本课题的目的、意义以及研究内容 | 第37-39页 |
| 3.1 研究目的和意义 | 第37-38页 |
| 3.2 研究内容 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-49页 |
| 第二章 链格孢菌突变体中缺失基因的克隆 | 第49-81页 |
| 前言 | 第49-50页 |
| 第一节 链格孢菌突变体001质粒插入边缘序列的克隆 | 第50-61页 |
| 1 材料和方法 | 第50-57页 |
| 1.1 试验材料 | 第50-51页 |
| 1.2 质粒插入边缘序列的扩增 | 第51-54页 |
| 1.3 PCR产物的克隆 | 第54-57页 |
| 1.4 基因测序与分析 | 第57页 |
| 2 结果和分析 | 第57-59页 |
| 2.1 质粒pSH75的构成 | 第57-58页 |
| 2.2 插入边缘序列的获得及分析 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-61页 |
| 第二节 链格孢菌产毒调控基因HP001的克隆 | 第61-71页 |
| 1 材料和方法 | 第61-65页 |
| 1.1 试验材料 | 第61-62页 |
| 1.2 HP001基因全长DNA序列扩增 | 第62页 |
| 1.3 HP001基因全长cDNA序列扩增 | 第62-65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-70页 |
| 2.1 HP001基因全长DNA序列的获得及分析 | 第65-67页 |
| 2.2 HP001基因全长cDNA序列的获得及分析 | 第67-70页 |
| 3 讨论 | 第70-71页 |
| 第三节 HP001基因缺失验证 | 第71-79页 |
| 1 材料和方法 | 第71-75页 |
| 1.1 试验材料 | 第71页 |
| 1.2 试剂与试剂配制 | 第71-72页 |
| 1.3 试验方法 | 第72-75页 |
| 2 结果和分析 | 第75-77页 |
| 2.1 HP001基因验证 | 第75页 |
| 2.2 质粒pSH75插入情况验证 | 第75-77页 |
| 3 讨论 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-81页 |
| 第三章 链格孢菌HP001基因表达研究 | 第81-117页 |
| 前言 | 第81-82页 |
| 第一节 链格孢菌野生型与突变体001的生理学比较 | 第82-93页 |
| 1 材料和方法 | 第83-85页 |
| 1.1 试验材料 | 第83页 |
| 1.2 培养方法 | 第83-84页 |
| 1.3 酸性磷酸酶活性测定 | 第84-85页 |
| 2 结果与分析 | 第85-92页 |
| 2.1 菌落生长速率比较 | 第85-86页 |
| 2.2 不同PH值菌丝生物量比较 | 第86-87页 |
| 2.3 不同碳源生物量比较 | 第87页 |
| 2.4 不同氮源生物量比较 | 第87-88页 |
| 2.5 不同碳氮比生物量比较 | 第88-89页 |
| 2.6 孢子产量 | 第89页 |
| 2.7 病斑 | 第89页 |
| 2.8 孢子萌发 | 第89-90页 |
| 2.9 磷酸酶活性分析 | 第90-92页 |
| 3 讨论 | 第92-93页 |
| 第二节 HP001基因的原核表达与荧光定量分析 | 第93-107页 |
| 1 材料与方法 | 第93-101页 |
| 1.1 材料 | 第93-95页 |
| 1.2 HP001原核表达 | 第95-97页 |
| 1.3 HP001基因表达的荧光定量检测 | 第97-101页 |
| 2 结果与分析 | 第101-105页 |
| 2.1 原核表达 | 第101-102页 |
| 2.2 HP001基因表达分析 | 第102-105页 |
| 3 讨论 | 第105-107页 |
| 第三节 野生型和突变体001中Gα和Gβ亚基表达研究 | 第107-114页 |
| 1 材料与方法 | 第107-109页 |
| 1.1 菌株培养条件 | 第107-108页 |
| 1.2 TotalRNA提取方法 | 第108页 |
| 1.3 试剂 | 第108页 |
| 1.4 Gβ基的克隆 | 第108页 |
| 1.5 荧光定量检测 | 第108-109页 |
| 2 结果与分析 | 第109-111页 |
| 2.1 Gβ基的克隆 | 第109-110页 |
| 2.2 Gα和Gβ基的基因表达分析 | 第110-111页 |
| 3 讨论 | 第111-114页 |
| 参考文献 | 第114-117页 |
| 第四章 链格孢菌野生型和突变体中表达差异基因的筛选 | 第117-145页 |
| 前言 | 第117-119页 |
| 第一节 抑制性消减杂交建库筛选 | 第119-135页 |
| 1 材料和方法 | 第119-128页 |
| 1.1 材料准备 | 第119-120页 |
| 1.2 方法 | 第120-126页 |
| 1.3. Subtracted cDNA Library construction and analysis | 第126-128页 |
| 2 结果与分析 | 第128-134页 |
| 2.1 菌落PCR | 第128-129页 |
| 2.2 斑点杂交 | 第129-131页 |
| 2.3 测序结果 | 第131-134页 |
| 3 讨论 | 第134-135页 |
| 第二节 Virtual Northern Blot验证和基因克隆 | 第135-143页 |
| 1 材料和方法 | 第135-138页 |
| 1.1 实验材料 | 第135-136页 |
| 1.2 菌株Total RNA提取 | 第136页 |
| 1.3 Virtual northern blot | 第136-137页 |
| 1.4 RACE法扩增目的基因 | 第137页 |
| 1.5 基因敲除载体构建 | 第137-138页 |
| 2 结果与分析 | 第138-142页 |
| 2.1 Virtual northern blot | 第138页 |
| 2.2 Race法扩增基因 | 第138-140页 |
| 2.3 基因敲除载体的构建 | 第140-142页 |
| 3 讨论 | 第142-143页 |
| 参考文献 | 第143-145页 |
| 第五章 链格孢菌野生型中HP001互作蛋白的筛选 | 第145-165页 |
| 前言 | 第145-147页 |
| 1 材料和方法 | 第147-156页 |
| 1.1 试验材料 | 第147-148页 |
| 1.2 建库 | 第148-150页 |
| 1.3 诱饵蛋白构建 | 第150-151页 |
| 1.4 双杂交文库的构建 | 第151-152页 |
| 1.5 文库保存 | 第152-153页 |
| 1.6 诱饵蛋白筛选 | 第153页 |
| 1.7 诱饵蛋白检测 | 第153-154页 |
| 1.8 文库筛选 | 第154-155页 |
| 1.9 阳性互作验证 | 第155-156页 |
| 2 结论与分析 | 第156-161页 |
| 2.1 杂交文库的构建以及筛选 | 第156-157页 |
| 2.2 诱饵蛋白的构建与检测 | 第157页 |
| 2.3 文库筛选以及捕获蛋白序列 | 第157-160页 |
| 2.4 阳性互作验证 | 第160-161页 |
| 3 讨论 | 第161-163页 |
| 参考文献 | 第163-165页 |
| 第六章 全文讨论和总结 | 第165-175页 |
| 1 讨论 | 第165-169页 |
| 1.1 HP001基因特性 | 第165-166页 |
| 1.2 真菌致病的毒力因子 | 第166-167页 |
| 1.3 链格孢菌野生型和突变体表达差异基因 | 第167-168页 |
| 1.4 HP001基因互作蛋白 | 第168-169页 |
| 2 结论 | 第169-171页 |
| 2.1 HP001基因是链格孢菌的毒力因子 | 第169页 |
| 2.2 HP001基因的缺失导致链格孢菌突变体中下游基因表达量下降 | 第169-170页 |
| 2.3 HP001基因通过互作蛋白参与代谢、致病过程 | 第170-171页 |
| 3 创新点 | 第171-172页 |
| 参考文献 | 第172-175页 |
| 致谢 | 第175-177页 |
| 攻读博士学位期间发表的研究论文 | 第177页 |
