| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 缩略语表 | 第8-9页 |
| 第一章 苏云金芽胞杆菌胶原酶ColB1的功能研究 | 第9-52页 |
| 1 前言 | 第9-22页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌及其杀虫活性 | 第9-13页 |
| 1.1.1 苏云金芽胞杆菌简介 | 第9-10页 |
| 1.1.2 苏云金芽胞杆菌的生物活性物质 | 第10-13页 |
| 1.2 苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白对昆虫的作用机制 | 第13-14页 |
| 1.2.1 苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白在昆虫肠道的受体 | 第13页 |
| 1.2.2 苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白对昆虫的作用机制 | 第13-14页 |
| 1.3 苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白对秀丽小杆线虫的作用机制 | 第14-16页 |
| 1.3.1 苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白作用秀丽小杆线虫的病理特征 | 第15页 |
| 1.3.2 苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白作用秀丽小杆线虫的受体 | 第15-16页 |
| 1.3.3 其他毒力因子对秀丽小杆线虫的作用 | 第16页 |
| 1.4 芽胞杆菌群的毒力因子 | 第16-19页 |
| 1.5 胶原和胶原酶 | 第19-21页 |
| 1.5.1 胶原的结构 | 第19-20页 |
| 1.5.2 胶原酶概述 | 第20-21页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 2 实验材料与方法 | 第22-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-28页 |
| 2.1.1 菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 培养基 | 第22-23页 |
| 2.1.3 试剂 | 第23-27页 |
| 2.1.4 仪器 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-35页 |
| 2.2.1 细菌质粒的制备和DNA操作 | 第28-29页 |
| 2.2.2 转化 | 第29-30页 |
| 2.2.3 苏云金芽胞杆菌晶体的显微镜观察 | 第30页 |
| 2.2.4 苏云金芽胞杆菌菌株杀虫晶体蛋白的制备和检测 | 第30-31页 |
| 2.2.5 酶活实验 | 第31-32页 |
| 2.2.6 线虫的生物测定 | 第32-33页 |
| 2.2.7 线虫中肠的观察 | 第33-34页 |
| 2.2.8 线虫角质层蛋白的提取 | 第34-35页 |
| 3 结果和分析 | 第35-50页 |
| 3.1 苏云金芽胞杆菌胶原酶的序列分析 | 第35页 |
| 3.2 苏云金芽胞杆菌胶原酶的基因芯片分析 | 第35-36页 |
| 3.3 ColB1是具有胶原酶活性的蛋白 | 第36-40页 |
| 3.3.1 colB1基因在大肠杆菌BL21(DE3)中的纯化 | 第36-37页 |
| 3.3.2 ColB1的酶学性质 | 第37-40页 |
| 3.4 ColB1对秀丽小杆线虫具有毒力 | 第40-41页 |
| 3.5 ColB1能够提高Cry5B对线虫的毒杀活性 | 第41-44页 |
| 3.5.1 缺失colB1的突变体没有活性 | 第41-42页 |
| 3.5.2 表达Cry5B的缺失突变体活性降低 | 第42-44页 |
| 3.6 colB1基因在线虫体内有特异性表达 | 第44-48页 |
| 3.6.1 colB1基因在线虫体内的表达水平检测 | 第44-45页 |
| 3.6.2 突变体在线虫体内的表达水平检测 | 第45-48页 |
| 3.7 ColB1能够引起线虫的角质层降解和肠道皱缩 | 第48-50页 |
| 3.7.1 光学显微镜观察ColB1对线虫的作用 | 第48页 |
| 3.7.2 SDS-PAGE检测ColB1处理后的线虫皮质层蛋白 | 第48-50页 |
| 4 结论与讨论 | 第50-52页 |
| 第二章 Sbt003中类似晶体蛋白C-端结构域的ORF1对Cry65Aa1晶体蛋白表达及晶体形成的影响 | 第52-77页 |
| 1 前言 | 第52-60页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌简介 | 第52-53页 |
| 1.2 苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白 | 第53-54页 |
| 1.2.1 苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的命名与分类 | 第53页 |
| 1.2.2 苏云金芽胞杆菌Cry蛋白一级结构与晶体形成的关系 | 第53-54页 |
| 1.3 苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因的表达调控 | 第54-57页 |
| 1.3.1 转录水平的调控 | 第54-55页 |
| 1.3.2 转录后水平的调控 | 第55-56页 |
| 1.3.3 翻译水平的调控 | 第56页 |
| 1.3.4 翻译后水平的调控 | 第56-57页 |
| 1.4 辅助蛋白 | 第57-58页 |
| 1.5 目的和意义 | 第58-60页 |
| 2 实验材料与方法 | 第60-67页 |
| 2.1 实验材料 | 第60-63页 |
| 2.1.1 菌株 | 第60-62页 |
| 2.1.2 培养基与生长条件 | 第62页 |
| 2.1.3 试剂 | 第62-63页 |
| 2.2 实验方法 | 第63-66页 |
| 2.2.1 细菌质粒的制备和DNA操作 | 第63-64页 |
| 2.2.2 转化 | 第64-66页 |
| 2.3 序列分析 | 第66-67页 |
| 3 结果与分析 | 第67-76页 |
| 3.1 ORF1对Cry65Aa1晶体表达形成的影响 | 第67-72页 |
| 3.1.1 Cry65Aa1与ORF1表达载体的构建 | 第67-70页 |
| 3.1.2 Cry65Aa1与ORF1的N半段共表达可形成无晶体结构的蛋白 | 第70-72页 |
| 3.2 ORF1作为C端结构域对Cry65Aa1表达的研究 | 第72-76页 |
| 3.2.1 ORF1与Cry21Aa的C半段表达载体的构建 | 第72-73页 |
| 3.2.2 ORF1与Cry21Aa的C半段交换无晶体形成 | 第73-76页 |
| 4 结论与讨论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 附录 | 第90页 |
