抗吡虫啉—甲基对硫磷双特异性单克隆抗体的研究
| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词说明 | 第12-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-34页 |
| 第一节 农药残留检测技术现状分析 | 第15-22页 |
| 1 农药残留现状 | 第15-16页 |
| 2 农药残留检测技术研究进展 | 第16-20页 |
| ·理化分析法 | 第17-18页 |
| ·免疫分析法 | 第18-19页 |
| ·光谱法 | 第19-20页 |
| ·酶抑制法 | 第20页 |
| ·免疫传感器技术 | 第20页 |
| 3 总结 | 第20-22页 |
| 第二节 农药小分子抗体制备研究进展 | 第22-28页 |
| 1 半抗原的设计与合成 | 第22-26页 |
| ·半抗原的设计原则 | 第22-23页 |
| ·分子模拟技术在半抗原设计中的应用 | 第23-25页 |
| ·异质半抗原的使用 | 第25-26页 |
| 2 多克隆抗体及单克隆抗体的制备 | 第26-27页 |
| 3 基因工程抗体的应用 | 第27-28页 |
| 第三节 农药多残留免疫分析技术研究进展 | 第28-34页 |
| 1 复合免疫法 | 第28页 |
| 2 通用半抗原法 | 第28-29页 |
| 3 双特异性抗体法 | 第29-34页 |
| ·化学偶联法 | 第29页 |
| ·基因工程法 | 第29页 |
| ·杂交-杂交瘤法 | 第29-34页 |
| 第二章 抗吡虫啉单克隆抗体的研制 | 第34-66页 |
| 第一节 人工抗原的合成与鉴定 | 第34-42页 |
| 1 试验材料 | 第34-35页 |
| ·主要试剂 | 第34-35页 |
| ·主要仪器设备 | 第35页 |
| 2 试验方法 | 第35-38页 |
| ·半抗原的设计、合成与鉴定 | 第35-37页 |
| ·人工抗原的合成与鉴定 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-40页 |
| ·分子模拟结果及半抗原的选择 | 第38页 |
| ·半抗原结构鉴定 | 第38-40页 |
| ·人工抗原偶联鉴定 | 第40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 第二节 杂交瘤细胞株的制备与筛选 | 第42-55页 |
| 1 试验材料 | 第42-43页 |
| ·生物材料 | 第42页 |
| ·试剂 | 第42页 |
| ·仪器设备 | 第42-43页 |
| 2 试验方法 | 第43-51页 |
| ·人工免疫原的制备 | 第43页 |
| ·人工包被原的制备 | 第43页 |
| ·小鼠免疫 | 第43页 |
| ·融合小鼠的选择 | 第43-44页 |
| ·杂交瘤细胞的制备 | 第44-48页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存与复苏 | 第48页 |
| ·杂交瘤细胞染色体核型分析 | 第48-49页 |
| ·单克隆抗体的大量制备 | 第49-50页 |
| ·单克隆抗体类型鉴定 | 第50-51页 |
| ·单克隆抗体与农药复合物电离常数的测定 | 第51页 |
| ·单克隆抗体的稳定性 | 第51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-53页 |
| ·融合小鼠的选择 | 第51页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立及抗体类型鉴定 | 第51-52页 |
| ·杂交瘤细胞染色体核型分析 | 第52页 |
| ·腹水制备和效价测定 | 第52-53页 |
| ·单克隆抗体与农药复合物电离常数的测定 | 第53页 |
| ·单克隆抗体稳定性测定 | 第53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| ·细胞融合技术 | 第53-54页 |
| ·细胞单克隆化 | 第54-55页 |
| 第三节 吡虫啉残留免疫分析方法的建立 | 第55-66页 |
| 1 试验材料 | 第55页 |
| ·试剂 | 第55页 |
| ·仪器设备 | 第55页 |
| 2 试验方法 | 第55-58页 |
| ·包被原的合成 | 第55页 |
| ·抗体的准备 | 第55-56页 |
| ·吡虫啉酶联免疫分析条件的优化 | 第56-58页 |
| 3 结果与分析 | 第58-64页 |
| ·包被原与抗体工作浓度优化 | 第58页 |
| ·有机溶剂的选择 | 第58-59页 |
| ·离子强度对体系的影响 | 第59-60页 |
| ·pH值对体系的影响 | 第60-61页 |
| ·标准曲线的建立 | 第61-62页 |
| ·交叉反应率 | 第62-63页 |
| ·添加回收实验 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| 第三章 双特异性单克隆抗体的研制 | 第66-84页 |
| 1 试验材料 | 第67-68页 |
| ·生物材料 | 第67页 |
| ·试剂 | 第67页 |
| ·仪器设备 | 第67-68页 |
| 2 试验方法 | 第68-73页 |
| ·吡虫啉人工免疫原的制备 | 第68页 |
| ·吡虫啉及甲基对硫磷人工包被原的制备 | 第68-69页 |
| ·小鼠免疫及融合小鼠的选择 | 第69页 |
| ·三体杂交瘤细胞的制备 | 第69-70页 |
| ·四体杂交瘤细胞的制备 | 第70-71页 |
| ·杂交-杂交瘤细胞染色体核型分析 | 第71页 |
| ·双特异性单克隆抗体类型鉴定 | 第71页 |
| ·腹水的制备 | 第71页 |
| ·ELISA分析方法的建立 | 第71-73页 |
| 3 结果与分析 | 第73-80页 |
| ·HGPRT酶和TK酶缺陷型细胞株的筛选 | 第73页 |
| ·融合小鼠的选择 | 第73页 |
| ·杂交-杂交瘤细胞株的建立及抗体类型鉴定 | 第73-74页 |
| ·杂交-杂交瘤细胞株染色体核型分析 | 第74页 |
| ·腹水制备和效价测定 | 第74-75页 |
| ·ELISA工作浓度的优化 | 第75页 |
| ·有机溶剂对检测体系的影响 | 第75页 |
| ·pH值对检测体系的影响 | 第75-76页 |
| ·离子强度对检测体系的影响 | 第76-77页 |
| ·标准曲线的建立 | 第77页 |
| ·交叉反应 | 第77-79页 |
| ·添加回收率的测定 | 第79-80页 |
| 4 讨论 | 第80-84页 |
| ·双特异性单克隆抗体制备技术 | 第80-81页 |
| ·三体杂交瘤和四体杂交瘤制备方法的比较 | 第81页 |
| ·双特异性单克隆抗体的应用 | 第81-84页 |
| 全文总结 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-92页 |
| 附录 | 第92-98页 |
| 附录Ⅰ ELISA试剂及细胞培养液配制方法 | 第92-95页 |
| 附录Ⅱ 化合物结构鉴定核磁图 | 第95-98页 |
| 致谢 | 第98-100页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文和申请的专利 | 第100页 |
