| 第一章 NAC家族转录因子OsNAC2介导赤霉素信号通路参与调控水稻株高和开花时间 | 第7-59页 |
| 中文摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 1 文献综述 | 第9-18页 |
| 1.1 NAC家族转录因子 | 第9-11页 |
| 1.1.1 NAC家族基因的结构和分类 | 第9页 |
| 1.1.2 NAC家族的功能 | 第9-10页 |
| 1.1.3 NAC家族的表达和调控 | 第10-11页 |
| 1.2 赤霉素研究进展 | 第11-16页 |
| 1.2.1 赤霉素简介 | 第11页 |
| 1.2.2 赤霉素的合成 | 第11-13页 |
| 1.2.3 赤霉素的信号传递 | 第13-14页 |
| 1.2.4 赤霉素参与的生物学功能 | 第14-16页 |
| 1.2.5 赤霉素信号通路在光形态建成中的作用 | 第16页 |
| 1.2.6 赤霉素信号与其他激素信号通路构成复杂的调控网络 | 第16页 |
| 1.3 水稻NAC家族成员研究进展以及研究意义 | 第16-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-26页 |
| 2.1 植物材料 | 第18页 |
| 2.2 质粒和菌种 | 第18页 |
| 2.3 试剂 | 第18页 |
| 2.4 实验方法 | 第18-26页 |
| 2.4.1 NAC家族转录因子的序列同源性分析 | 第18-19页 |
| 2.4.2 载体的构建 | 第19-21页 |
| 2.4.3 OsNAC2的转录激活实验 | 第21页 |
| 2.4.4 OsNAC2亚细胞定位实验 | 第21页 |
| 2.4.5 OsNAC2对激素的响应 | 第21-22页 |
| 2.4.6 转基因水稻的获得和分子鉴定 | 第22页 |
| 2.4.7 转基因株系的表型分析和对赤霉素的响应 | 第22页 |
| 2.4.8 芯片的制备和qRT-PCR分析 | 第22-23页 |
| 2.4.9 赤霉素含量的测定 | 第23-24页 |
| 2.4.10 相关基因的节律表达实验 | 第24页 |
| 2.4.11 烟草瞬时表达双荧光检测 | 第24-25页 |
| 2.4.12 拟南芥的培养和转基因 | 第25页 |
| 2.4.13 花药的Alexander染色 | 第25-26页 |
| 3 结果与讨论 | 第26-47页 |
| 3.1 OsNAC2具有NAC家族转录因子特征 | 第26-28页 |
| 3.2 OsNAC2的器官与组织表达谱分析 | 第28-31页 |
| 3.2.1 启动子GUS显色分析 | 第28-30页 |
| 3.2.2 原位表达分析 | 第30-31页 |
| 3.2.3 OsNAC2基因对不同激素的响应 | 第31页 |
| 3.3 水稻转基因株系的获得和表型分析 | 第31-35页 |
| 3.3.1 过表达和RNAi转基因株系的获得和鉴定 | 第32-33页 |
| 3.3.2 转基因株系的表型分析 | 第33-35页 |
| 3.4 OsNAC2转基因株系转录组的芯片分析和相关验证 | 第35-40页 |
| 3.4.1 芯片结果 | 第35-36页 |
| 3.4.2 赤霉素合成相关基因表达量的鉴定 | 第36-37页 |
| 3.4.3 赤霉素代谢和株高相关基因表达量的鉴定 | 第37-38页 |
| 3.4.4 RNAi材料中差别表达基因的表达量分析 | 第38-39页 |
| 3.4.5 OsNAC2可能的下游基因预测 | 第39-40页 |
| 3.5 过表达转基因株系中赤霉素含量的测定 | 第40-41页 |
| 3.6 转基因株系对赤霉素的响应分析 | 第41-42页 |
| 3.6.1 水稻中OsNAC2的表达量与赤霉素浓度的关系 | 第41页 |
| 3.6.2 转基因株系对PAC的响应 | 第41-42页 |
| 3.7 转基因株系表现出开花时间的延迟 | 第42-43页 |
| 3.8 水稻(33d龄)赤霉素代谢相关基因的表达 | 第43-44页 |
| 3.9 拟南芥异源表达OsNAC2的表型以及GA_3响应分析 | 第44-47页 |
| 3.9.1 转基因拟南芥株系的鉴定 | 第44页 |
| 3.9.2 转基因种子对GA_3的敏感性 | 第44-45页 |
| 3.9.3 转基因拟南芥开花时间延长 | 第45-46页 |
| 3.9.4 转基因拟南芥株系结实率下降 | 第46-47页 |
| 4 小结 | 第47-50页 |
| 参考文献 | 第50-59页 |
| 第二章 ANAC092在根发育中的功能研究 | 第59-89页 |
| 中文摘要 | 第59页 |
| Abstract | 第59-61页 |
| 1 文献综述 | 第61-69页 |
| 1.1 生长素的生物学功能 | 第61页 |
| 1.2 生长素的生物合成和信号传递 | 第61-64页 |
| 1.2.1 生长素的生物合成 | 第61-62页 |
| 1.2.2 生长素的运输 | 第62页 |
| 1.2.3 生长素的信号传递 | 第62-64页 |
| 1.3 根的结构 | 第64-65页 |
| 1.4 生长素在根发育中的功能 | 第65-67页 |
| 1.4.1 生长素浓度梯度在根发育中的功能 | 第65-66页 |
| 1.4.2 生长素在侧根发育中的功能 | 第66页 |
| 1.4.3 根尖中生长素的生物合成对根发育的影响 | 第66-67页 |
| 1.5 NAC家族转录因子通过生长素通路参与根发育的报道 | 第67-68页 |
| 1.6 有关ANAC092基因的研究背景及研究意义 | 第68-69页 |
| 2 材料与方法 | 第69-72页 |
| 2.1 植物材料 | 第69页 |
| 2.2 质粒和菌种 | 第69页 |
| 2.3 试剂 | 第69页 |
| 2.4 实验方法 | 第69-72页 |
| 2.4.1 ANAC092过表达载体的构建和转化 | 第69-70页 |
| 2.4.2 ANAC092启动子的克隆及载体的构建 | 第70页 |
| 2.4.3 GUS活性的组织化学检测 | 第70页 |
| 2.4.4 拟南芥材料的培养 | 第70页 |
| 2.4.5 ANAC092对不同激素的响应 | 第70页 |
| 2.4.6 根尖长度的统计 | 第70页 |
| 2.4.7 转基因株系根长对不同浓度生长素的响应 | 第70-71页 |
| 2.4.8 拟南芥的杂交 | 第71页 |
| 2.4.9 根尖淀粉粒的染色方法 | 第71页 |
| 2.4.10 根尖材料的PI染色和共聚焦观察 | 第71页 |
| 2.4.11 转基因材料根中相关基因表达量的qRT-PCR分析 | 第71-72页 |
| 3 结果与讨论 | 第72-82页 |
| 3.1 ANAC092启动子元件的分析 | 第72-73页 |
| 3.2 过表达株系对ABA的敏感性升高 | 第73-74页 |
| 3.3 ANAC092表达的节律性 | 第74-75页 |
| 3.4 ANAC092在根中的表达具有发育时序性 | 第75-76页 |
| 3.5 ANAC092受激素IAA的显著性诱导 | 第76页 |
| 3.6 转基因株系的获得及分子鉴定 | 第76-77页 |
| 3.7 根尖分生组织的减少造成过表达株系的根长变短 | 第77-78页 |
| 3.8 过表达株系根尖中生长素含量降低且细胞分裂减弱 | 第78-79页 |
| 3.9 过表达ANA092株系降低对生长素的响应 | 第79-80页 |
| 3.10 过表达ANA092影响生长素转运相关基因的表达 | 第80-81页 |
| 3.11 过表达ANA092影响木质素相关基因的表达 | 第81-82页 |
| 4 小结 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-89页 |
| 附录Ⅰ ANAC092在花粉发育中的功能研究 | 第89-101页 |
| 1 材料与方法 | 第90-92页 |
| 1.1 植物材料 | 第90页 |
| 1.2 质粒和菌种 | 第90页 |
| 1.3 试剂 | 第90页 |
| 1.4 实验方法 | 第90-92页 |
| 1.4.1 ANAC092过表达载体的构建和转化 | 第90页 |
| 1.4.2 启动子片段的克隆及载体的构建 | 第90页 |
| 1.4.3 GUS活性的组织化学检测 | 第90页 |
| 1.4.4 ANAC092在拟南芥中表达 | 第90-91页 |
| 1.4.5 原位杂交 | 第91页 |
| 1.4.6 转基因植株获得和PCR鉴定 | 第91页 |
| 1.4.7 花药的细胞学观察 | 第91页 |
| 1.4.8 花粉扫描电镜观察 | 第91-92页 |
| 2 结果与讨论 | 第92-98页 |
| 2.1 ANAC092在spl,ems突变体中表达量的验证 | 第92页 |
| 2.2 ANAC092在拟南芥中的表达部位 | 第92-94页 |
| 2.3 转基因株系的花粉发育特征研究 | 第94-95页 |
| 2.4 ANAC092转基因株系和ams突变体中花药发育相关的基因的表达 | 第95-98页 |
| 3 小结 | 第98-100页 |
| 3.1 ANAC092可能参与拟南芥花粉发育 | 第98页 |
| 3.2 ANAC092在根和花中表达的调控机制不同 | 第98页 |
| 3.3 ANAC092可能是AMS的下游基因 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-101页 |
| 附录Ⅱ | 第101-113页 |
| S1 大肠杆菌的转化 | 第101页 |
| S2 农杆菌的转化 | 第101页 |
| S3 DNA的提取 | 第101-102页 |
| S4 RNA的提取,逆转录和检测 | 第102-103页 |
| S5 原位杂交 | 第103-107页 |
| S6 农杆菌介导的水稻转化方法 | 第107-111页 |
| S7 酵母感受态制备 | 第111页 |
| S8 酵母转化 | 第111-112页 |
| S9 GUS染色 | 第112页 |
| S10 石蜡切片的制备 | 第112-113页 |
| 发表论文及专利 | 第113-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
