| 摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第14-25页 |
| 1.1 miRNAs的研究进展 | 第14-18页 |
| 1.1.1 miRNAs的发现 | 第14页 |
| 1.1.2 miRNAs的特点 | 第14页 |
| 1.1.3 miRNAs的作用机理 | 第14-15页 |
| 1.1.4 miRNAs的检测方法 | 第15-16页 |
| 1.1.5 miRNAs的靶标预测 | 第16-17页 |
| 1.1.6 miRNAs的靶标鉴定 | 第17-18页 |
| 1.1.7 miRNAs的功能 | 第18页 |
| 1.2 miR-139研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3 GH与GHR研究进展 | 第19-21页 |
| 1.3.1 GH与GHR的结构 | 第19页 |
| 1.3.2 GHR介导的信号传导途径 | 第19-20页 |
| 1.3.3 GH的生理功能 | 第20页 |
| 1.3.4 GH及其受体在乳腺中的作用 | 第20-21页 |
| 1.4 IGF-I与IGF-IR研究进展 | 第21-23页 |
| 1.4.1 IGF-I与IGF-IR的结构 | 第21-22页 |
| 1.4.2 IGF-IR介导的信号传导途径 | 第22页 |
| 1.4.3 IGF-IR的生理功能 | 第22-23页 |
| 1.4.4 IGF-IR在乳腺中的作用 | 第23页 |
| 1.5 研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第25页 |
| 2.2 主要仪器和设备 | 第25-26页 |
| 2.3 实验试剂 | 第26-27页 |
| 2.4 试剂的配制 | 第27-28页 |
| 2.5 实验方法与步骤 | 第28-37页 |
| 2.5.1 miR-139的靶基因预测 | 第28页 |
| 2.5.2 miR-139及其靶基因在不同发育阶段及不同乳品质奶牛乳腺组织中的表达 | 第28-32页 |
| 2.5.3 奶牛乳腺上皮细胞的培养和鉴定 | 第32-33页 |
| 2.5.4 miR-139 mimic对奶牛乳腺上皮细胞泌乳的影响 | 第33-35页 |
| 2.5.5 miR-139 inhibitor对奶牛乳腺上皮细胞泌乳的影响 | 第35-36页 |
| 2.5.6 miR-139 inhibitor在GHR沉寂后对奶牛乳腺上皮细胞泌乳的影响 | 第36页 |
| 2.5.7 数据处理 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-60页 |
| 3.1 miR-139、GHR和IGF-IR在不同发育阶段及不同乳品质奶牛乳腺组织中的表达 | 第37-40页 |
| 3.1.1 不同发育阶段及不同乳品质奶牛乳腺组织中总RNA质量检测 | 第37页 |
| 3.1.2 miR-139、GHR和IGF-IR在不同发育阶段及不同乳品质奶牛乳腺组织中的m RNA表达 | 第37-39页 |
| 3.1.3 GHR在不同发育阶段及不同乳品质奶牛乳腺组织中的蛋白表达 | 第39-40页 |
| 3.2 奶牛乳腺上皮细胞的培养和鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2.1 奶牛乳腺上皮细胞的原代培养 | 第40-41页 |
| 3.2.2 奶牛乳腺上皮细胞的角蛋白18鉴定 | 第41页 |
| 3.3 miR-139的靶基因预测 | 第41-42页 |
| 3.4 miR-139基因过表达对奶牛乳腺上皮细胞的影响 | 第42-50页 |
| 3.4.1 miR-139 mimic对奶牛乳腺上皮细胞中miR-139、GHR以及IGF-IR m RNA表达的影响 | 第42-44页 |
| 3.4.2 miR-139 mimic对奶牛乳腺上皮细胞中IGF-IR及泌乳相关信号通路蛋白表达的影响 | 第44-46页 |
| 3.4.3 miR-139 mimic对奶牛乳腺上皮细胞增殖能力及活性的影响 | 第46-47页 |
| 3.4.4 miR-139 mimic对奶牛乳腺上皮细胞中 β-酪蛋白、甘油三酯和乳糖含量的影响 | 第47-50页 |
| 3.5 miR-139基因沉寂对奶牛乳腺上皮细胞泌乳的影响 | 第50-57页 |
| 3.5.1 miR-139 inhibitor对奶牛乳腺上皮细胞中miR-139、GHR以及IGF-IR m RNA表达的影响 | 第50-51页 |
| 3.5.2 miR-139 inhibitor对奶牛乳腺上皮细胞中IGF-IR及泌乳相关信号通路蛋白表达的影响 | 第51-53页 |
| 3.5.3 miR-139 inhibitor对奶牛乳腺上皮细胞增殖能力及活性的影响 | 第53-54页 |
| 3.5.4 miR-139 inhibitor对奶牛乳腺上皮细胞中 β-酪蛋白、甘油三酯和乳糖含量的影响 | 第54-57页 |
| 3.6 miR-139 inhibitor在GHR沉寂后对奶牛乳腺上皮细胞泌乳的影响 | 第57-60页 |
| 3.6.1 GHR干扰片段的筛选 | 第57-58页 |
| 3.6.2 荧光定量PCR检测GHR m RNA表达 | 第58页 |
| 3.6.3 检验GHR基因抑制后泌乳相关信号通路蛋白的表达变化 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-65页 |
| 4.1 miR-139、GHR以及IGF-IR在不同发育阶段及不同乳品质奶牛乳腺组织中的表达 | 第60-61页 |
| 4.2 miR-139对奶牛乳腺上皮细胞泌乳功能及相关信号通路蛋白的影响 | 第61-63页 |
| 4.2.1 miR-139对乳蛋白合成及相关信号通路蛋白的影响 | 第61-62页 |
| 4.2.2 miR-139对乳脂合成及相关信号通路蛋白的影响 | 第62页 |
| 4.2.3 miR-139乳糖合成及相关信号通路蛋白的影响 | 第62-63页 |
| 4.3 miR-139对奶牛乳腺上皮细胞细胞周期和细胞增殖影响 | 第63页 |
| 4.4 miR-139在GHR沉寂后对IGF-IR及泌乳相关信号通路蛋白的影响 | 第63-65页 |
| 5 结论 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 附录 | 第74-75页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文 | 第75页 |
