| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 符号说明 | 第10-12页 |
| 第一章 无脊椎动物的先天免疫机制 | 第12-22页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 一、物理防御 | 第13页 |
| 二、细胞免疫 | 第13-14页 |
| 1、吞噬作用 | 第13-14页 |
| 2、细胞包被及结节作用 | 第14页 |
| 三、体液免疫 | 第14-17页 |
| 1、血淋巴的凝集 | 第14-15页 |
| 2、酚氧化酶原系统 | 第15-16页 |
| 3、抗菌肽 | 第16-17页 |
| 四、甲壳动物的常见病原 | 第17-19页 |
| 1、细菌 | 第17-18页 |
| 2、病毒 | 第18-19页 |
| 五、Syntenin的研究进展 | 第19-20页 |
| 六、本研究的意义及技术路线 | 第20-22页 |
| 第二章 接头蛋白Syntenin抗细菌免疫的功能研究 | 第22-46页 |
| 一、Syntenin的概述 | 第22页 |
| 二、材料方法 | 第22-32页 |
| 1、材料 | 第22-23页 |
| 1.1 实验动物 | 第22页 |
| 1.2 试剂 | 第22-23页 |
| 1.3 仪器 | 第23页 |
| 1.4 质粒与菌种 | 第23页 |
| 2、方法 | 第23-32页 |
| 2.1 免疫刺激 | 第23-24页 |
| 2.2 RNA提取 | 第24页 |
| 2.3 cDNA的合成 | 第24页 |
| 2.4 蛋白的提取 | 第24-25页 |
| 2.5 基因克隆 | 第25-26页 |
| 2.6 序列分析及结构分析 | 第26页 |
| 2.7 实时定量Q-PCR分析MjSyn的表达模式 | 第26-27页 |
| 2.8 MjSyn的蛋白表达纯化及多克隆抗体制备 | 第27-30页 |
| 2.9 RNA干扰 | 第30-31页 |
| 2.10 细菌清除实验 | 第31页 |
| 2.11 细菌吞噬实验 | 第31-32页 |
| 三、结果 | 第32-43页 |
| 1、MjSyn的全长基因克隆及结构域预 | 第32-33页 |
| 2、MjSyn的序列分析和进化树分析 | 第33-35页 |
| 3、MjSyn的二级结构预测 | 第35-37页 |
| 4、MjSyn的重组表达及其在对虾组织中的组成性表达 | 第37-38页 |
| 5、MjSyn响应细菌的刺激,表达量上调 | 第38-39页 |
| 6、干扰MjSyn后,对虾的细菌清除能力降低 | 第39-41页 |
| 7、MjSyn通过影响对虾的细菌吞噬能力在抗细菌免疫中发挥作用 | 第41-42页 |
| 8、干扰MjSyn后会影响吞噬相关基因MjCnx的表达 | 第42-43页 |
| 四、讨论 | 第43-46页 |
| 第三章 接头蛋白Syntenin在抗病毒免疫过程中的功能研究 | 第46-66页 |
| 一、前言 | 第46-47页 |
| 二、材料方法 | 第47-53页 |
| 1、实验材料与试剂 | 第47-48页 |
| 1.1 实验动物、试剂与仪器 | 第47页 |
| 1.2 质粒与菌种 | 第47-48页 |
| 2、方法 | 第48-53页 |
| 2.1 免疫刺激 | 第48页 |
| 2.2 蛋白的提取 | 第48页 |
| 2.3 Western Blot | 第48页 |
| 2.4 免疫细胞化学 | 第48-49页 |
| 2.5 干扰MjSyn检测VP28复制 | 第49页 |
| 2.6 分段基因的重组表达 | 第49-51页 |
| 2.7 重组蛋白的Pull-down实验 | 第51页 |
| 2.8 免疫共沉淀实验 | 第51-52页 |
| 2.9 mRNA过表达MjSyn检测VP28复制 | 第52页 |
| 2.10 病毒刺激后血淋巴中MjSyn和VP28的检测 | 第52-53页 |
| 三、实验结果 | 第53-63页 |
| 1、MjSyn受到病毒刺激后表达上调 | 第53-54页 |
| 2、受到病毒刺激后,MjSyn向细胞两端极化,并与F-actin的共定位增加 | 第54-56页 |
| 4、干扰MjSyn后VP28复制量减少 | 第56页 |
| 5、过表达MjSyn促进了病毒蛋白VP28的复制 | 第56-57页 |
| 6、GST标签的全长Syn以及分段蛋白的表达纯化 | 第57-58页 |
| 7、MjSyn全长、C端以及1+2区域能够结合病毒蛋白 | 第58-60页 |
| 8、内源性的对虾MjSyn能够结合天然的病毒蛋白VP26和VP28 | 第60-61页 |
| 9、病毒刺激后的血淋巴中有分泌的MjSyn和VP28蛋白 | 第61-63页 |
| 四、讨论 | 第63-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 已发表文章 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 附件 | 第73页 |
