| 摘要 | 第11-13页 |
| ABSTRACT | 第13-14页 |
| 符号说明 | 第15-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-24页 |
| 1. 糖胺聚糖及其降解酶 | 第16-20页 |
| 1.1 糖胺聚糖 | 第16-19页 |
| 1.2 糖胺聚糖降解酶 | 第19-20页 |
| 2. 肝素副产物 | 第20-21页 |
| 3. 抗血栓药物 | 第21-22页 |
| 4. 本课题需要解决的问题 | 第22-24页 |
| 第二章 HPND纯化相关酶类的表达及纯化 | 第24-42页 |
| 1. 材料 | 第24页 |
| 1.1 试剂 | 第24页 |
| 1.2 仪器 | 第24页 |
| 2. 实验方法 | 第24-29页 |
| 2.1 rHeparinase Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的表达纯化 | 第24-27页 |
| 2.1.1 rHeparinase Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ载体的构建 | 第24-25页 |
| 2.1.2 rHeparinase Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的表达 | 第25页 |
| 2.1.3 rHeparinase Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的纯化 | 第25-26页 |
| 2.1.4 rHeparinase Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的活性检测 | 第26-27页 |
| 2.2 硫酸软骨素酶ABC(CSase ABC)的制备 | 第27-29页 |
| 2.2.1 CSase ABC表达与纯化 | 第27-29页 |
| 2.2.2 CSase ABC活性检测 | 第29页 |
| 2.3 rHCLase的克隆表达与纯化 | 第29页 |
| 3 结果 | 第29-40页 |
| 3.1 rHeparinase Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的表达纯化 | 第29-37页 |
| 3.1.1 rHeparinase Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 3.1.2 rHeparinase Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的表达 | 第30-33页 |
| 3.1.3 rHeparinase Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ产物分析及活性测定 | 第33-37页 |
| 3.2 硫酸软骨素酶ABC(CSase ABC)的制备 | 第37-38页 |
| 3.2.1 CSase ABC的诱导表达和纯化 | 第37-38页 |
| 3.2.2 CSase ABC活性检测 | 第38页 |
| 3.3 rHCLase纯化 | 第38-40页 |
| 3.3.1 rHCLase的纯化 | 第39页 |
| 3.3.2 rHCLase的活力测定 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-41页 |
| 5 本章小结 | 第41-42页 |
| 第三章 HPND各组分的生物酶法纯化和舒络地特的仿制 | 第42-62页 |
| 1 材料 | 第42页 |
| 1.1 试剂 | 第42页 |
| 1.2 仪器 | 第42页 |
| 2. 方法 | 第42-47页 |
| 2.1 SLDX的仿制方案 | 第42-43页 |
| 2.2 SLDX的分析 | 第43-45页 |
| 2.2.1 分子量分析 | 第43页 |
| 2.2.2 二糖组成分析 | 第43-45页 |
| 2.3 HPND中组分的纯化 | 第45-46页 |
| 2.3.1 HPND的生物酶处理 | 第45页 |
| 2.3.2 HPND中组分的纯化 | 第45-46页 |
| 2.3.3 分子量分析 | 第46页 |
| 2.3.4 二糖组成分析 | 第46页 |
| 2.4 HPND的分级沉淀 | 第46页 |
| 2.5 SLDX的仿制 | 第46-47页 |
| 2.5.1 按分子量仿制 | 第46页 |
| 2.5.2 按二糖组成仿制 | 第46-47页 |
| 3. 结果分析 | 第47-60页 |
| 3.1 SLDX的分析 | 第47-48页 |
| 3.1.1 SLDX的分子量分析 | 第47页 |
| 3.1.2 SLDX的二糖组成分析 | 第47-48页 |
| 3.2 生物酶纯化HPND中组分 | 第48-54页 |
| 3.2.1 纯化HS/HP的二糖组成 | 第49-51页 |
| 3.2.2 HPND纯化前后分子量分析 | 第51-52页 |
| 3.2.3 HS/HP各级分的二糖组成分析 | 第52-54页 |
| 3.3 HPND分步乙醇沉淀 | 第54-58页 |
| 3.3.1 不同乙醇沉淀分子量分析 | 第54-55页 |
| 3.3.2 HPND经乙醇分级沉淀后样品二糖组成分析 | 第55-58页 |
| 3.4 SLDX的仿制 | 第58-60页 |
| 3.4.1 按分子量仿制 | 第58页 |
| 3.4.2 按二糖组成仿制 | 第58-60页 |
| 4. 讨论 | 第60页 |
| 5. 本章小结 | 第60-62页 |
| 第四章 测定仿制药活性 | 第62-72页 |
| 1. 实验材料 | 第62-64页 |
| 1.1 试剂 | 第62-63页 |
| 1.2 仪器 | 第63-64页 |
| 2. 方法 | 第64-67页 |
| 2.1 测定仿制药抗FIIa活性 | 第64-65页 |
| 2.2 测定仿制药抗FXa因子 | 第65-66页 |
| 2.3 大鼠促LPL释放活性检测 | 第66-67页 |
| 3. 结果 | 第67-70页 |
| 3.1 仿制药与SLDX抗FIIa因子比较 | 第67-68页 |
| 3.2 仿制药与SLDX抗FXa因子比较 | 第68-69页 |
| 3.3 仿制药与SLDX对LPL释放的影响 | 第69-70页 |
| 4. 讨论 | 第70-71页 |
| 5. 本章小结 | 第71-72页 |
| 全文总结 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 硕士期间研究成果 | 第80-81页 |
| 附件 | 第81页 |
