| 中文摘要 | 第12-15页 |
| Abstract | 第15-17页 |
| 1 前言 | 第18-28页 |
| 1.1 鸭病毒性肝炎研究进展 | 第18-23页 |
| 1.1.1 鸭甲肝病毒病原学 | 第18-19页 |
| 1.1.1.1 鸭甲肝病毒形态学 | 第18-19页 |
| 1.1.1.2 VP1蛋白 | 第19页 |
| 1.1.2 鸭甲肝病毒对理化因素的抵抗力 | 第19页 |
| 1.1.3 鸭病毒性肝炎的流行病学研究 | 第19-20页 |
| 1.1.4 鸭病毒性肝炎的临床症状 | 第20页 |
| 1.1.5 鸭病毒性肝炎的病理剖检 | 第20-21页 |
| 1.1.6 鸭病毒性肝炎的病理组织学诊断 | 第21页 |
| 1.1.7 鸭病毒性肝炎的血清学检测 | 第21页 |
| 1.1.8 鸭病毒性肝炎的防控措施 | 第21-23页 |
| 1.1.8.1 疫苗、抗血清和卵黄抗体的预防及治疗 | 第21-22页 |
| 1.1.8.2 药物预防 | 第22页 |
| 1.1.8.3 生物安全措施 | 第22-23页 |
| 1.2 鸭坦布苏病毒病研究进展 | 第23-25页 |
| 1.2.1 鸭坦布苏病毒病原学 | 第23页 |
| 1.2.1.1 鸭坦布苏病毒形态学 | 第23页 |
| 1.2.1.2 E蛋白 | 第23页 |
| 1.2.2 鸭坦布苏病毒对理化因素的抵抗力 | 第23页 |
| 1.2.3 鸭坦布苏病毒病的流行病学研究 | 第23-24页 |
| 1.2.4 鸭坦布苏病毒病的临床症状 | 第24页 |
| 1.2.5 鸭坦布苏病毒病的病理剖检 | 第24页 |
| 1.2.6 鸭坦布苏病毒病的病理组织学诊断 | 第24页 |
| 1.2.7 鸭坦布苏病毒病的血清学检测 | 第24页 |
| 1.2.8 鸭坦布苏病毒病的防控措施 | 第24-25页 |
| 1.2.8.1 疫苗预防 | 第25页 |
| 1.2.8.2 药物预防 | 第25页 |
| 1.2.8.3 生物安全措施 | 第25页 |
| 1.3 液相芯片技术 | 第25-28页 |
| 1.4 本试验的目的及意义 | 第28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-49页 |
| 2.1 材料 | 第28-34页 |
| 2.1.1 病毒、菌株、载体、血清、实验动物 | 第28-31页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第31页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第31-32页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第32-34页 |
| 2.1.4.1 琼脂糖凝胶电泳试剂 | 第32页 |
| 2.1.4.2 诱导表达试剂 | 第32-33页 |
| 2.1.4.3 SDS-PAGE试剂的配制 | 第33页 |
| 2.1.4.4 Western-blot试剂的配制 | 第33-34页 |
| 2.1.4.5 液相芯片试剂的配制 | 第34页 |
| 2.2 方法 | 第34-49页 |
| 2.2.1 鸭甲肝病毒的分离鉴定及VP1基因序列分析 | 第34-40页 |
| 2.2.1.1 病料处理 | 第34页 |
| 2.2.1.2 鸭胚接种 | 第34页 |
| 2.2.1.3 鸭胚中和试验 | 第34-35页 |
| 2.2.1.4 1 型和3型鸭甲肝病毒VP1基因引物的设计 | 第35页 |
| 2.2.1.5 鸭甲肝病毒RNA的提取 | 第35-36页 |
| 2.2.1.6 病毒RNA的RT-PCR扩增 | 第36-37页 |
| 2.2.1.7 RT-PCR产物胶回收 | 第37页 |
| 2.2.1.8 DHAV-1VP1/DHAV-3VP1基因胶回收产物与T载体的连接与转化 | 第37-38页 |
| 2.2.1.9 pMD18-T-1VP1/pMD18-T-3VP1菌落PCR鉴定 | 第38-39页 |
| 2.2.1.10 pMD18-T-1VP1/pMD18-T-3VP1阳性菌的质粒提取及酶切鉴定 | 第39-40页 |
| 2.2.1.11 1 型VP1基因和3型VP1基因的序列分析 | 第40页 |
| 2.2.2 鸭坦布苏病毒E基因的克隆分析 | 第40-42页 |
| 2.2.2.1 病毒增殖 | 第40页 |
| 2.2.2.2 鸭坦布苏病毒E基因引物的设计 | 第40-41页 |
| 2.2.2.3 鸭坦布苏病毒RNA的提取 | 第41页 |
| 2.2.2.4 鸭坦布苏病毒RNA的RT-PCR扩增 | 第41页 |
| 2.2.2.5 RT-PCR产物胶回收 | 第41页 |
| 2.2.2.6 DTMUV-E基因胶回收产物与T载体的连接与转化 | 第41页 |
| 2.2.2.7 pMD18-T-E菌落PCR鉴定 | 第41-42页 |
| 2.2.2.8 pMD18-T-E阳性菌的质粒提取及酶切鉴定 | 第42页 |
| 2.2.3 1 型鸭甲肝病毒VP1基因和鸭坦布苏病毒E基因的表达 | 第42-45页 |
| 2.2.3.1 pCold-1VP1重组质粒的构建 | 第42页 |
| 2.2.3.2 pET-28a-E重组质粒的构建 | 第42-43页 |
| 2.2.3.3 pCold-1VP1和pET-28a-E的诱导表达及SDS- PAGE分析 | 第43-45页 |
| 2.2.3.4 重组蛋白的Western blot分析 | 第45页 |
| 2.2.4 1 型鸭甲肝病毒和鸭坦布苏病毒液相芯片抗体检测方法的建立 | 第45-49页 |
| 2.2.4.1 磁珠的偶联 | 第45-46页 |
| 2.2.4.2 磁珠偶联确认 | 第46-47页 |
| 2.2.4.3 临界值的确定 | 第47页 |
| 2.2.4.4 1 型鸭甲肝病毒和鸭坦布苏病毒单一液相芯片抗体检测方法的建立及评价 | 第47-48页 |
| 2.2.4.5 1 型鸭甲肝病毒和鸭坦布苏病毒双重液相芯片抗体检测方法的建立及评价 | 第48-49页 |
| 2.2.4.6 双重液相芯片方法检测临床样品 | 第49页 |
| 2.2.5 液相芯片方法与ELISA方法灵敏度的比较 | 第49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-69页 |
| 3.1 鸭甲肝病毒的分离鉴定及VP1基因序列分析 | 第49-55页 |
| 3.1.1 鸭胚接种 | 第49页 |
| 3.1.2 鸭胚中和试验 | 第49-50页 |
| 3.1.3 1 型和3型鸭甲肝病毒VP1基因的克隆 | 第50-52页 |
| 3.1.4 1 型VP1基因和3型VP1基因的序列分析 | 第52页 |
| 3.1.5 1 型鸭甲肝病毒遗传进化关系分析 | 第52-53页 |
| 3.1.6 3 型鸭甲肝病毒遗传进化关系分析 | 第53-55页 |
| 3.2 鸭坦布苏病毒E基因的克隆分析 | 第55-56页 |
| 3.3 1 型鸭甲肝病毒VP1基因和鸭坦布苏病毒E基因的表达 | 第56-60页 |
| 3.3.1 pCold-1VP1重组质粒的构建 | 第56页 |
| 3.3.2 pET-28a-E重组质粒的构建 | 第56-57页 |
| 3.3.3 pCold-1VP1和pET-28a-E的诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第57-58页 |
| 3.3.4 pCold-1VP1和pET-28a-E的大量表达及纯化 | 第58-59页 |
| 3.3.5 重组蛋白的Western blot分析 | 第59-60页 |
| 3.4 1 型鸭甲肝病毒和鸭坦布苏病毒液相芯片抗体检测方法的建立 | 第60-68页 |
| 3.4.1 抗原偶联磁珠 | 第60-63页 |
| 3.4.1.1 21 号、29 号羧基荧光磁珠三维图片的验证 | 第60-61页 |
| 3.4.1.2 Gate Value值的确定 | 第61-62页 |
| 3.4.1.3 抗原与磁珠偶联的验证 | 第62-63页 |
| 3.4.2 临界值的确定 | 第63页 |
| 3.4.3 1 型鸭甲肝病毒单一液相芯片抗体检测方法的建立及评价 | 第63-64页 |
| 3.4.3.1 检测特异性的评价 | 第63页 |
| 3.4.3.2 检测灵敏度的评价 | 第63-64页 |
| 3.4.4 鸭坦布苏病毒单一液相芯片抗体检测方法的建立及评价 | 第64页 |
| 3.4.4.1 检测特异性的评价 | 第64页 |
| 3.4.4.2 检测灵敏度的评价 | 第64页 |
| 3.4.5 1 型鸭甲肝病毒和鸭坦布苏病毒双重液相芯片抗体检测方法的建立及评价 | 第64-68页 |
| 3.4.5.1 1 型鸭甲肝病毒和鸭坦布苏病毒双重液相芯片抗体检测方法的建立 | 第64-65页 |
| 3.4.5.2 检测特异性的评价 | 第65-66页 |
| 3.4.5.3 检测灵敏度的评价 | 第66-67页 |
| 3.4.5.4 重复性评价 | 第67-68页 |
| 3.4.5.5 双重液相芯片方法检测临床样品 | 第68页 |
| 3.5 液相芯片方法与ELISA方法灵敏度的比较 | 第68-69页 |
| 4 讨论 | 第69-72页 |
| 5 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第84-85页 |
| 个人简介 | 第85页 |
