| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 第一章 综述 | 第11-18页 |
| 1 自然界中动物的白化现象 | 第11页 |
| 2 牙鲆研究现状 | 第11-12页 |
| 2.1 牙鲆在国内外的养殖情况 | 第11-12页 |
| 2.2 牙鲆的形态特征 | 第12页 |
| 2.3 牙鲆的生活习性 | 第12页 |
| 3 牙鲆等鲆鲽鱼类白化原因的研究进展 | 第12-13页 |
| 4 牙鲆白化在分子水平上的研究现状及发展动态分析 | 第13-16页 |
| 4.1 色素细胞的信号调控通路及关键基因研究进展 | 第13-14页 |
| 4.2 原色和白化牙鲆的转录组测序 | 第14页 |
| 4.3 原色和白化牙鲆的microRNA测序分析 | 第14-16页 |
| 4.3.1 MicroRNA的发现及应用 | 第15页 |
| 4.3.2 miRNA的形成机制 | 第15页 |
| 4.3.3 miRNA的作用方式 | 第15-16页 |
| 4.3.4 miRNA的特性 | 第16页 |
| 5 甲状腺激素T3对牙鲆白化的影响 | 第16页 |
| 6 牙鲆白化在细胞水平上的研究 | 第16页 |
| 7 本研究的目的和意义 | 第16-18页 |
| 第二章 白化相关基因及miRNA的表达分析及互作实验 | 第18-45页 |
| 1 实验材料与试剂 | 第18-20页 |
| 1.1 实验材料 | 第18页 |
| 1.2 实验试剂和仪器 | 第18-20页 |
| 1.3 实验器材 | 第20页 |
| 1.4 实验仪器 | 第20页 |
| 2 实验方法 | 第20-36页 |
| 2.1 Tyrp1a基因的克隆及表达分析 | 第20-28页 |
| 2.1.1 牙鲆各组织Total RNA的提取 | 第20-21页 |
| 2.1.2 RNA反转录 | 第21-22页 |
| 2.1.3 Tyrp1a基因克隆 | 第22-27页 |
| 2.1.3.1 Tyrp1a中间片段验证 | 第23-25页 |
| 2.1.3.2 Tyrp1a基因 5'端和 3'端的克隆 | 第25-27页 |
| 2.1.4 Tyrp1a基因实时荧光定量PCR | 第27-28页 |
| 2.1.5 Tyrp1a基因序列拼接及蛋白分析 | 第28页 |
| 2.2 原色和白化牙鲆中mmu-143 的差异表达分析 | 第28-31页 |
| 2.2.1 miRNA的提取 | 第29页 |
| 2.2.2 miRNA反转录 | 第29-30页 |
| 2.2.3 mmu-143 荧光定量 | 第30-31页 |
| 2.3 靶基因互作实验 | 第31-36页 |
| 2.3.1 靶基因预测 | 第31页 |
| 2.3.2 双荧光素酶载体pmiR-RB-REPORT?的构建 | 第31-33页 |
| 2.3.3 无内毒素质粒提取 | 第33页 |
| 2.3.4 靶位点突变 | 第33-34页 |
| 2.3.5 双荧光素酶实验 | 第34-36页 |
| 3 结果 | 第36-42页 |
| 3.1 牙鲆Tyrp1a基因全长及其蛋白分析 | 第36-38页 |
| 3.2 系统进化树构建 | 第38-39页 |
| 3.3 荧光定量结果 | 第39-40页 |
| 3.4 Mmu-143 荧光定量结果 | 第40页 |
| 3.5 靶基因预测 | 第40-41页 |
| 3.6 双荧光素酶实验结果 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-45页 |
| 第三章 牙鲆仔鱼甲状腺激素处理 | 第45-52页 |
| 1 材料与试剂 | 第45页 |
| 1.1 实验材料 | 第45页 |
| 1.2 实验试剂及仪器 | 第45页 |
| 2 实验方法 | 第45-46页 |
| 3 结果 | 第46-51页 |
| 3.1 甲状腺激素T3处理牙鲆仔鱼实验结果 | 第46-47页 |
| 3.2 高通量测序结果 | 第47-50页 |
| 3.3 荧光定量 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-52页 |
| 第四章 原色和白化牙鲆有眼侧皮肤细胞系构建 | 第52-67页 |
| 1 材料与试剂 | 第52-53页 |
| 1.1 实验材料 | 第52页 |
| 1.2 实验试剂与仪器 | 第52-53页 |
| 1.3 实验中所用溶液的配置方法 | 第53页 |
| 2 实验方法 | 第53-57页 |
| 2.1 细胞培养方法 | 第53-54页 |
| 2.1.1 原代培养 | 第54页 |
| 2.1.2 传代培养 | 第54页 |
| 2.2 牙鲆皮肤细胞系的鉴定和应用方法 | 第54-57页 |
| 2.2.1 细胞的冻存与复苏 | 第54页 |
| 2.2.2 细胞系类型的鉴定 | 第54-55页 |
| 2.2.3 细胞生长曲线绘制 | 第55页 |
| 2.2.4 染色体分析 | 第55页 |
| 2.2.5 病毒感染实验 | 第55-56页 |
| 2.2.6 GFP报告基因和siRNA的细胞转染 | 第56页 |
| 2.2.7 白化相关基因的表达 | 第56-57页 |
| 3 结果 | 第57-65页 |
| 3.1 细胞培养 | 第57-58页 |
| 3.2 细胞鉴定 | 第58页 |
| 3.3 细胞生长曲线绘制 | 第58-60页 |
| 3.4 染色体分析 | 第60页 |
| 3.5 病毒感染实验 | 第60-61页 |
| 3.6 GFP报告基因和siRNA的细胞转染 | 第61-63页 |
| 3.7 白化相关基因的表达 | 第63-64页 |
| 3.8 该细胞建系技术的主要特点 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-78页 |
| 硕士期间的研究成果 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
