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丝氨酸蛋白酶与朱砂叶螨抗性相关关系的研究

中文摘要第8-10页
Abstract第10-12页
第一章 文献综述第13-19页
    1 朱砂叶螨抗药性研究现状第13-14页
        1.1 朱砂叶螨抗药性监测第13-14页
        1.2 昆虫(螨)的抗药性机制第14页
    2 甲氰菊酯和阿维菌素的抗性现状第14-16页
        2.1 甲氰菊酯研究现状第14-15页
        2.2 阿维菌素研究现状第15-16页
    3 丝氨酸蛋白酶的研究进展第16-19页
        3.1 丝氨酸蛋白酶第16页
        3.2 丝氨酸蛋白酶与抗性相关的研究第16-19页
引言第19-21页
第二章 朱砂叶螨丝氨酸蛋白酶基因克隆第21-31页
    1 材料与方法第21-27页
        1.1 供试朱砂叶螨第21页
        1.2 主要试剂第21-22页
        1.3 主要实验仪器第22页
        1.4 常用试剂的配制第22-23页
        1.5 总RNA的提取第23-24页
        1.6 RNA反转录合成cDNA模板第24页
        1.7 朱砂叶螨丝氨酸蛋白酶基因(SP-900)克隆第24-27页
    2 结果与分析第27-30页
        2.1 朱砂叶螨丝氨酸蛋白酶基因(SP-900)的克隆第27-30页
        2.2 丝氨酸蛋白酶基因生物信息学分析第30页
    3 讨论第30-31页
第三章 朱砂叶螨丝氨酸蛋白酶基因(SP-900)的定量表达研究第31-39页
    第一节 SS、FeR、AbR品系朱砂叶螨丝氨酸蛋白酶基因(SP-900)的定量表达研究第31-34页
        1 材料与方法第31-32页
            1.1 供试朱砂叶螨第31页
            1.2 主要试剂及仪器第31页
            1.3 荧光定量PCR引物设计及合成第31-32页
            1.4 总RNA的提取第32页
            1.5 RNA反转录合成cDNA模板第32页
            1.6 实时荧光定量PCR第32页
        2 结果与分析第32-34页
            2.1 溶解曲线第32-33页
            2.2 标准曲线第33页
            2.3 SS、Fe R、AbR品系朱砂叶螨丝氨酸蛋白酶基因(SP-900)的定量表达结果第33-34页
        3.讨论第34页
    第二节 药剂诱导对朱砂叶螨SP-900 基因的表达量影响的研究第34-39页
        1 材料与方法第34-35页
            1.1 供试叶螨第34页
            1.2 主要试剂和仪器第34-35页
            1.3 荧光定量PCR引物设计及合成第35页
            1.4 试验方法第35页
            1.5 RNA反转录合成cDNA模板第35页
            1.6 实时荧光定量PCR第35页
        2.结果与分析第35-38页
            2.1 溶解曲线第35-36页
            2.2 标准曲线第36页
            2.3 药剂对SS、FeR、AbR品系朱砂叶螨基因SP-900 的表达量的影响第36-38页
        3.讨论第38-39页
第四章 朱砂叶螨丝氨酸蛋白酶粗酶酶活的研究第39-51页
    第一节 SS、FeR、AbR品系朱砂叶螨丝氨酸蛋白酶粗酶活的测定第39-44页
        1 材料与方法第39-42页
            1.1 供试朱砂叶螨第39页
            1.2 主要试剂与仪器第39-40页
            1.3 常用试剂的配制第40页
            1.4 粗酶提取第40页
            1.5 牛血清蛋白标准曲线制作第40-41页
            1.6 酶源蛋白含量测定第41页
            1.7 对硝基苯胺(p-NA)标准曲线制作第41-42页
        2 结果与分析第42-44页
            2.1 酶源蛋白含量测定结果第42-43页
            2.2 对硝基苯胺(p-NA)标准曲线第43-44页
            2.3 朱砂叶螨丝氨酸蛋白酶粗酶活性测定结果第44页
        3 讨论第44页
    第二节 朱砂叶螨对药剂的敏感性与丝氨酸蛋白酶活性关系的研究第44-51页
        1 材料方法第44-46页
            1.1 供试朱砂叶螨第44页
            1.2 主要试剂与仪器第44-45页
            1.3 试剂配制第45页
            1.4 实验材料与方法第45-46页
            1.5 粗酶液提取第46页
            1.6 朱砂叶螨粗酶液酶源蛋白含量测定第46页
            1.7 丝氨酸蛋白酶活性测定第46页
        2 结果与分析第46-48页
            2.1 抑制剂对丝氨酸蛋白酶活性影响测定结果第46页
            2.2 抑制剂处理的生物测定结果第46-48页
        3 讨论第48-51页
第五章 RNAi验证丝氨酸蛋白酶与朱砂叶螨抗性相关关系第51-59页
    1 材料与方法第51-53页
        1.1 供试朱砂叶螨第51页
        1.2 主要试剂与仪器第51页
        1.3 常用试剂的配制第51页
        1.4 实验方法第51-53页
    2 结果与分析第53-56页
        2.1 SP-900 基因沉默效率检测第53页
        2.2 朱砂叶螨RNAi后粗酶酶活测定结果第53-54页
        2.3 朱砂叶螨对甲氰菊酯、阿维菌素的敏感性检测第54-56页
    3 讨论第56-59页
第六章 丝氨酸蛋白酶介导朱砂叶螨抗性机制的研究第59-67页
    第一节 丝氨酸蛋白酶与甲氰菊酯、阿维菌素结合的研究第59-62页
        1 材料与方法第59页
            1.1 供试朱砂叶螨第59页
            1.2 主要试剂与仪器第59页
            1.3 实验方法第59页
        2 结果与分析第59-61页
            2.1 甲氰菊酯、阿维菌素对SS、FeR、AbR三个品系朱砂叶螨粗酶活性的影响第59-60页
            2.2 丝氨酸蛋白酶抑制剂(APMSF)对丝氨酸蛋白酶粗酶活性的影响第60-61页
        3 讨论第61-62页
    第二节 HPLC测定朱砂叶螨ATP含量第62-67页
        1 材料与方法第62-63页
            1.1 供试朱砂叶螨第62页
            1.2 主要试剂及配制第62页
            1.3 实验仪器第62-63页
            1.4 标准溶液及样品制备第63页
            1.5 HPLC测定朱砂叶螨体内ATP含量的液谱条件第63页
            1.6 数据分析第63页
        2 结果与分析第63-65页
            2.1 色谱行为与ATP标准曲线第63-65页
            2.2 SS、FeR、AbR品系朱砂叶螨体内ATP含量测定及比较第65页
        3 讨论第65-67页
总结与展望第67-69页
    1 主要结论第67-68页
        1.1 丝氨酸蛋白酶基因(SP-900)克隆第67页
        1.2 朱砂叶螨丝氨酸蛋白酶基因(SP-900)定量表达研究第67页
        1.3 朱砂叶螨丝氨酸蛋白酶酶活的研究第67页
        1.4 RNAi验证丝氨酸蛋白酶与朱砂叶螨抗性相关关系第67-68页
        1.5 丝氨酸蛋白酶介导朱砂叶螨抗性机制的研究第68页
    2 展望第68-69页
        2.1 丝氨酸蛋白酶与朱砂叶螨抗性相关关系的深入研究第68页
        2.2 丝氨酸蛋白酶基因的原核表达研究第68页
        2.3 RNAi后解毒代谢酶基因的研究第68-69页
参考文献第69-77页
致谢第77页

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