| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 禽TOLL样受体研究进展 | 第12-22页 |
| 1.1 前言 | 第12-14页 |
| 1.2 禽TLRS的进化分析 | 第14-15页 |
| 1.3 禽TLRS功能 | 第15-20页 |
| 1.3.1 禽TLR1，2，4 和 5 | 第15-16页 |
| 1.3.2 禽TLR15 | 第16页 |
| 1.3.3 禽核酸型受体 | 第16-20页 |
| 1.4 小结与展望 | 第20-22页 |
| 第二章 鸭TOLL样受体3基因克隆及序列分析 | 第22-33页 |
| 2.1 材料 | 第22页 |
| 2.2 方法 | 第22-24页 |
| 2.2.1 鸭PBMCs的分离 | 第22-23页 |
| 2.2.2 RNA提取及RT-PCR扩增 | 第23页 |
| 2.2.3 目的基因的克隆和测序 | 第23页 |
| 2.2.4 duTLR3序列的分析及结构预测 | 第23页 |
| 2.2.5 duTLR3在北京鸭体内的组织表达谱 | 第23-24页 |
| 2.3 结果 | 第24-31页 |
| 2.3.1 PBMCs总RNA提取结果 | 第24-25页 |
| 2.3.2 duTLR3不同基因基因片段RT-PCR扩增结果 | 第25页 |
| 2.3.3 duTLR3基因克隆初步鉴定结果 | 第25页 |
| 2.3.4 duTLR3基因测序结果分析 | 第25页 |
| 2.3.5 duTLR3基本理化性质分析 | 第25-26页 |
| 2.3.6 duTLR3基因编码产物的亲、疏水性，柔韧性及抗原性预测 | 第26页 |
| 2.3.7 duTLR3蛋白二级结构、跨膜区、结构域及信号肽预测 | 第26-28页 |
| 2.3.8 duTLR3基因及其编码氨基酸同源性分析 | 第28-29页 |
| 2.3.9 duTLR3基因遗传进化树的构建 | 第29-30页 |
| 2.3.10 duTLR3在北京鸭体内组织分布 | 第30-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-32页 |
| 2.5 小结 | 第32-33页 |
| 第三章 鸭TLR3基因胞外区的原核表达及多克隆抗体制备 | 第33-39页 |
| 3.1 材料 | 第33-34页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第33页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第33-34页 |
| 3.2 方法 | 第34-35页 |
| 3.2.1 TLR3基因的扩增 | 第34页 |
| 3.2.2 重组表达质粒的构建与鉴定 | 第34页 |
| 3.2.3 TLR3基因的诱导表达 | 第34页 |
| 3.2.4 TLR3融合蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| 3.2.5 抗TLR3多克隆抗体的制备 | 第35页 |
| 3.2.6 间接ELISA方法测定多克隆抗体效价 | 第35页 |
| 3.2.7 Western blot检测多克隆抗体特异性 | 第35页 |
| 3.3 结果 | 第35-37页 |
| 3.3.1 重组表达质粒的鉴定 | 第35页 |
| 3.3.2 TLR3蛋白表达、优化及纯化 | 第35-36页 |
| 3.3.3 重组蛋白TLR3多克隆抗体的鉴定与效价测定 | 第36-37页 |
| 3.4 讨论 | 第37-38页 |
| 3.5 小结 | 第38-39页 |
| 第四章 鸭TOLL样受体3实时荧光定量PCR检测方法的建立 | 第39-48页 |
| 4.1 材料 | 第39页 |
| 4.1.1 菌株及主要试剂 | 第39页 |
| 4.2 方法 | 第39-42页 |
| 4.2.1 引物设计 | 第39-40页 |
| 4.2.2 阳性标准品构建 | 第40页 |
| 4.2.3 RT-PCR检测方法的建立 | 第40-41页 |
| 4.2.4 TLR3在北京鸭体内的组织表达谱 | 第41-42页 |
| 4.3 结果 | 第42-46页 |
| 4.3.1 TLR3和 β-actin基因的扩增 | 第42页 |
| 4.3.2 标准曲线建立结果 | 第42-44页 |
| 4.3.3 FQ-PCR重复性验证 | 第44页 |
| 4.3.4 FQ-PCR特异性验证 | 第44-45页 |
| 4.3.5 FQ-PCR敏感性验证 | 第45页 |
| 4.3.6 TLR3在北京鸭体内的组织表达谱 | 第45-46页 |
| 4.4 讨论 | 第46-47页 |
| 4.5 小结 | 第47-48页 |
| 第五章 内源性鸭TLR3在抗DRV感染中的作用 | 第48-58页 |
| 5.1 材料 | 第48页 |
| 5.1.1 动物材料 | 第48页 |
| 5.1.2 病毒和菌株 | 第48页 |
| 5.1.3 载体和试剂 | 第48页 |
| 5.1.4 主要仪器 | 第48页 |
| 5.2 方法 | 第48-51页 |
| 5.2.1 DEF的制备 | 第48-49页 |
| 5.2.2 DRV感染DEF | 第49页 |
| 5.2.3 细胞总RNA提取及荧光定量PCR | 第49-50页 |
| 5.2.4 病毒滴度的测定 | 第50页 |
| 5.2.5 DRV σC和鸭TLR3蛋白的Western blotting鉴定 | 第50页 |
| 5.2.6 动物试验 | 第50-51页 |
| 5.3 结果 | 第51-56页 |
| 5.3.1 DRV(TH11)标曲的建立 | 第51-52页 |
| 5.3.2 DEF感染DRV（TH11）后鸭免疫相关基因mRNA及DRV滴度检测 | 第52-54页 |
| 5.3.3 DRV σC和鸭TLR3蛋白的Western blotting结果 | 第54页 |
| 5.3.4 鸭感染DRV(TH11)后脏器相关基因mRNA及DRV滴度检测 | 第54-56页 |
| 5.4 讨论 | 第56-57页 |
| 5.5 小结 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 英文缩略表 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 作者简介 | 第67页 |
