| 致谢 | 第5-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩写表 | 第11-16页 |
| 第1章 绪论 | 第16-46页 |
| 1.1 染料废水的处理方法 | 第17-28页 |
| 1.1.1 物理法 | 第17-18页 |
| 1.1.2 化学法 | 第18-20页 |
| 1.1.3 生物法 | 第20-28页 |
| 1.2 微生物表面展示技术 | 第28-44页 |
| 1.2.1 微生物表面展示系统构成 | 第29-30页 |
| 1.2.2 微生物细胞表面展示系统 | 第30-44页 |
| 1.3 选题背景和研究内容 | 第44-46页 |
| 第2章 三苯甲烷还原酶异源表达及酶学性质研究 | 第46-61页 |
| 2.1 材料 | 第46-48页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第46页 |
| 2.1.2 化学试剂和分子生物学试剂 | 第46-47页 |
| 2.1.3 培养基和缓冲液 | 第47-48页 |
| 2.1.4 主要仪器和设备 | 第48页 |
| 2.2 方法 | 第48-55页 |
| 2.2.1 cstmr基因密码子优化及全合成 | 第48-49页 |
| 2.2.2 CsTMR的表达载体构建 | 第49-52页 |
| 2.2.3 重组CsTMR的诱导表达 | 第52-53页 |
| 2.2.4 亲和层析纯化重组CsTMR | 第53页 |
| 2.2.5 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第53-54页 |
| 2.2.6 凝胶过滤层析 | 第54页 |
| 2.2.7 蛋白浓度测定 | 第54页 |
| 2.2.8 重组CsTMR性质的研究 | 第54-55页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第55-60页 |
| 2.3.1 cstmr基因的密码子优化 | 第55-56页 |
| 2.3.2 重组CsTMR表达质粒的构建 | 第56页 |
| 2.3.3 重组CsTMR的诱导表达和纯化 | 第56-57页 |
| 2.3.4 重组CsTMR的最适反应温度和温度稳定性 | 第57-58页 |
| 2.3.5 重组CsTMR的最适反应pH和pH稳定性 | 第58-59页 |
| 2.3.6 重组CsTMR的底物谱 | 第59页 |
| 2.3.7 金属离子和EDTA对重组CsTMR活性的影响 | 第59-60页 |
| 2.3.8 有机溶剂对重组CsTMR稳定性的影响 | 第60页 |
| 2.4 小结 | 第60-61页 |
| 第3章 三苯甲烷还原酶的大肠杆菌表面展示 | 第61-73页 |
| 3.1 材料 | 第61-62页 |
| 3.1.1 菌种和质粒 | 第61-62页 |
| 3.1.2 化学试剂和分子生物学试剂 | 第62页 |
| 3.1.3 培养基和缓冲液 | 第62页 |
| 3.1.4 主要仪器和设备 | 第62页 |
| 3.2 方法 | 第62-64页 |
| 3.2.1 截断冰核蛋白基因密码子优化及全合成 | 第62页 |
| 3.2.2 大肠杆菌表面展示载体构建 | 第62-63页 |
| 3.2.3 表面展示CsTMR的诱导表达 | 第63页 |
| 3.2.4 细胞组分分级分离 | 第63页 |
| 3.2.5 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第63页 |
| 3.2.6 蛋白印迹 | 第63页 |
| 3.2.7 蛋白酶处理全细胞 | 第63页 |
| 3.2.8 表面展示CsTMR性质的研究 | 第63-64页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第64-71页 |
| 3.3.1 inaPb-N基因的密码子优化 | 第64页 |
| 3.3.2 大肠杆菌表面展示CsTMR载体的构建 | 第64-65页 |
| 3.3.3 表面展示工程菌的诱导表达及验证 | 第65-67页 |
| 3.3.4 表面展示CsTMR的最适反应温度和温度稳定性 | 第67页 |
| 3.3.5 表面展示CsTMR的最适反应pH和pH稳定性 | 第67页 |
| 3.3.6 重组表面展示CsTMR的底物谱 | 第67-69页 |
| 3.3.7 稳态动力学研究 | 第69-71页 |
| 3.3.8 表面展示CsTMR的长期稳定性 | 第71页 |
| 3.3.9 表面展示工程菌和其他高效微生物对孔雀石绿降解率的比较 | 第71页 |
| 3.4 小结 | 第71-73页 |
| 第4章 三苯甲烷还原酶的芽孢表面展示 | 第73-85页 |
| 4.1 材料 | 第73-75页 |
| 4.1.1 菌种和质粒 | 第73-74页 |
| 4.1.2 化学试剂和分子生物学试剂 | 第74页 |
| 4.1.3 培养基和缓冲液 | 第74-75页 |
| 4.1.4 主要仪器和设备 | 第75页 |
| 4.2 方法 | 第75-77页 |
| 4.2.1 芽孢展示载体构建 | 第75页 |
| 4.2.2 枯草芽孢杆菌转化及筛选 | 第75-76页 |
| 4.2.3 重组芽孢的制备 | 第76-77页 |
| 4.2.4 蛋白酶处理全细胞 | 第77页 |
| 4.2.5 表面展示CsTMR性质的研究 | 第77页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第77-84页 |
| 4.3.1 芽孢表面展示载体的构建 | 第77-79页 |
| 4.3.2 诱导产孢及芽孢展示验证 | 第79页 |
| 4.3.3 芽孢表面展示三苯甲烷还原酶的酶学性质 | 第79-81页 |
| 4.3.4 芽孢表面展示葡萄糖脱氢酶的酶学性质 | 第81-83页 |
| 4.3.5 染料全细胞脱色自循环系统 | 第83-84页 |
| 4.4 小结 | 第84-85页 |
| 第5章 新型双功能染料降解酶的挖掘及功能研究 | 第85-101页 |
| 5.1 材料 | 第85-86页 |
| 5.1.1 菌种和质粒 | 第85-86页 |
| 5.1.2 化学试剂和分子生物学试剂 | 第86页 |
| 5.1.3 培养基和缓冲液 | 第86页 |
| 5.1.4 主要仪器和设备 | 第86页 |
| 5.2 方法 | 第86-89页 |
| 5.2.1 新型染料降解酶基因密码子优化及全合成 | 第86页 |
| 5.2.2 GtAZR的表达载体构建 | 第86页 |
| 5.2.3 GtAZR的诱导表达 | 第86页 |
| 5.2.4 亲和层析纯化重组三苯甲烷还原酶 | 第86-87页 |
| 5.2.5 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第87页 |
| 5.2.6 活性电泳 | 第87页 |
| 5.2.7 凝胶过滤层析 | 第87页 |
| 5.2.8 蛋白浓度测定 | 第87页 |
| 5.2.9 重组GtAZR性质的研究 | 第87-89页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第89-99页 |
| 5.3.1 GtAZR序列分析 | 第89页 |
| 5.3.2 gtazr基因的密码子优化 | 第89-91页 |
| 5.3.3 重组GtAZR质粒的构建 | 第91-92页 |
| 5.3.4 重组GtAZR的诱导表达和纯化 | 第92-93页 |
| 5.3.5 重组GtAZR的最适反应温度和温度稳定性 | 第93页 |
| 5.3.6 重组GtAZR的最适反应pH和pH稳定性 | 第93-94页 |
| 5.3.7 重组GtAZR的底物谱 | 第94-96页 |
| 5.3.8 金属离子对重组酶活性的影响 | 第96页 |
| 5.3.9 有机溶剂对重组酶稳定性的影响 | 第96页 |
| 5.3.10 稳态动力学研究 | 第96-99页 |
| 5.4 小结 | 第99-101页 |
| 第6章 三苯甲烷还原酶底物识别机制研究 | 第101-114页 |
| 6.1 材料 | 第101-102页 |
| 6.1.1 菌种和质粒 | 第101-102页 |
| 6.1.2 化学试剂和分子生物学试剂 | 第102页 |
| 6.1.3 培养基和缓冲液 | 第102页 |
| 6.1.4 主要仪器和设备 | 第102页 |
| 6.2 方法 | 第102-105页 |
| 6.2.1 同源建模 | 第102页 |
| 6.2.2 分子对接 | 第102-103页 |
| 6.2.3 分子动力学模拟及分析 | 第103页 |
| 6.2.4 突变体构建 | 第103-105页 |
| 6.2.5 突变体表达、纯化及活性测定 | 第105页 |
| 6.3 结果和讨论 | 第105-113页 |
| 6.3.1 同源建模模型评价 | 第105-106页 |
| 6.3.2 分子对接 | 第106-107页 |
| 6.3.3 分子动力学模拟 | 第107-109页 |
| 6.3.4 突变体构建 | 第109-110页 |
| 6.3.5 突变体表达、纯化及活性测定 | 第110-111页 |
| 6.3.6 推测的底物识别机制 | 第111-113页 |
| 6.4 小结 | 第113-114页 |
| 结论与展望 | 第114-118页 |
| 1、结论 | 第114-116页 |
| 2、创新点 | 第116页 |
| 3、展望 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-131页 |
| 附录 | 第131-133页 |
| 攻博期间发表的论文 | 第133页 |
