| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 1 引言 | 第11-21页 |
| 1.1 口蹄疫概述 | 第11-13页 |
| 1.1.1 口蹄疫病毒 | 第11页 |
| 1.1.2 口蹄疫的危害及其流行性 | 第11-12页 |
| 1.1.3 口蹄疫病毒在动物体内及细胞水平感染的定位 | 第12-13页 |
| 1.2 牛鼻咽粘膜上皮细胞研究概述 | 第13-16页 |
| 1.2.1 牛咽部的结构及功能 | 第14页 |
| 1.2.2 咽部上皮组织细胞类型及形态 | 第14-15页 |
| 1.2.3 咽部粘膜上皮细胞的体外分离培养 | 第15-16页 |
| 1.3 牛肺泡上皮细胞研究概述 | 第16-18页 |
| 1.3.1 肺泡的结构与功能 | 第16-17页 |
| 1.3.2 肺泡上皮细胞类型 | 第17-18页 |
| 1.3.3 肺泡上皮细胞的体外分离培养 | 第18页 |
| 1.4 免疫荧光技术 | 第18-19页 |
| 1.4.1 原理 | 第18-19页 |
| 1.4.2 技术分类 | 第19页 |
| 1.5 本研究的目的意义及主要内容 | 第19-21页 |
| 2 实验一 牛鼻咽粘膜上皮细胞分离培养与鉴定 | 第21-31页 |
| 2.1 材料与方法 | 第21-22页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第21页 |
| 2.1.2 试剂及耗材 | 第21页 |
| 2.1.3 主要试剂配制 | 第21页 |
| 2.1.4 实验动物的采集 | 第21-22页 |
| 2.2 实验内容与方法 | 第22-24页 |
| 2.2.1 牛鼻咽粘膜上皮细胞原代培养 | 第22页 |
| 2.2.2 细胞传代培养、纯化、细胞冻存与细胞复苏 | 第22-23页 |
| 2.2.3 细胞生长曲线测定 | 第23页 |
| 2.2.4 细胞染色体数目分析 | 第23页 |
| 2.2.5 细胞免疫荧光条件摸索及鉴定 | 第23-24页 |
| 2.3 结果与分析 | 第24-28页 |
| 2.3.1 牛鼻咽粘膜上皮细胞原代培养 | 第24-25页 |
| 2.3.2 细胞纯化及传代培养 | 第25-26页 |
| 2.3.3 细胞生长曲线测定 | 第26页 |
| 2.3.4 细胞染色体数目分析 | 第26-27页 |
| 2.3.5 细胞免疫荧光鉴定 | 第27-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-30页 |
| 2.4.1 牛鼻咽粘膜上皮细胞的原代培养 | 第28-29页 |
| 2.4.2 牛鼻咽粘膜上皮细胞的纯化及传代培养 | 第29页 |
| 2.4.3 牛鼻咽粘膜上皮细胞的鉴定 | 第29-30页 |
| 2.5 小结 | 第30-31页 |
| 3 实验二 牛肺泡上皮细胞分离培养与鉴定 | 第31-39页 |
| 3.1 材料与方法 | 第31页 |
| 3.1.1 主要仪器 | 第31页 |
| 3.1.2 试剂及耗材 | 第31页 |
| 3.1.3 主要试剂配制 | 第31页 |
| 3.1.4 实验动物的采集 | 第31页 |
| 3.2 实验内容与方法 | 第31-33页 |
| 3.2.1 牛肺泡上皮细胞原代培养 | 第31-32页 |
| 3.2.2 细胞纯化、传代培养、细胞冻存与细胞复苏 | 第32页 |
| 3.2.3 细胞生长曲线测定 | 第32页 |
| 3.2.4 细胞染色体数目分析 | 第32页 |
| 3.2.5 细胞免疫荧光染色鉴定 | 第32-33页 |
| 3.3 结果与分析 | 第33-36页 |
| 3.3.1 牛肺泡上皮细胞原代培养 | 第33页 |
| 3.3.2 细胞纯化与传代培养 | 第33-34页 |
| 3.3.3 细胞生长曲线测定 | 第34-35页 |
| 3.3.4 细胞染色体数目分析 | 第35页 |
| 3.3.5 细胞免疫荧光鉴定 | 第35-36页 |
| 3.4 讨论 | 第36-38页 |
| 3.4.1 牛肺泡上皮细胞的原代及传代培养 | 第36-37页 |
| 3.4.2 牛肺泡上皮细胞的纯化 | 第37页 |
| 3.4.3 牛肺泡上皮细胞的鉴定 | 第37-38页 |
| 3.5 小结 | 第38-39页 |
| 4 实验三 牛鼻咽粘膜及肺泡上皮细胞感染FMDV研究 | 第39-47页 |
| 4.1 材料与方法 | 第39-40页 |
| 4.1.1 主要仪器 | 第39页 |
| 4.1.2 主要试剂配制 | 第39页 |
| 4.1.3 实验材料 | 第39-40页 |
| 4.2 实验内容与方法 | 第40-42页 |
| 4.2.1 细胞维持液条件的确定 | 第40页 |
| 4.2.2 口蹄疫病毒感染细胞过程 | 第40页 |
| 4.2.3 感染细胞总RNA提取 | 第40页 |
| 4.2.4 反转录合成cDNA及产物检测 | 第40-41页 |
| 4.2.5 RT-PCR扩增FMDV目的片段及产物检测 | 第41-42页 |
| 4.3 结果与分析 | 第42-45页 |
| 4.3.1 细胞维持液条件的确定 | 第42-43页 |
| 4.3.2 FMDV感染牛鼻咽粘膜及肺泡上皮细胞实验 | 第43页 |
| 4.3.3 感染细胞总RNA提取 | 第43-44页 |
| 4.3.4 反转录合成cDNA产物检测 | 第44-45页 |
| 4.3.5 RT-PCR扩增FMDV目的片段及产物检测 | 第45页 |
| 4.4 讨论 | 第45-46页 |
| 4.4.1 FMDV感染牛鼻咽粘膜及肺泡上皮细胞实验 | 第45-46页 |
| 4.4.2 RT-PCR检测FMDV | 第46页 |
| 4.5 小结 | 第46-47页 |
| 5 全文结论 | 第47-48页 |
| 6 创新点 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 附录 | 第54-56页 |
| 作者简介 | 第56页 |
