| 英文缩略词表 | 第5-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 引言 | 第12-16页 |
| 实验材料与方法 | 第16-39页 |
| 1 实验材料 | 第16页 |
| 1.1 人组织样本 | 第16页 |
| 1.2 质粒和细胞系 | 第16页 |
| 2 主要试剂及配制 | 第16-24页 |
| 2.1 样本组织DNA提取相关试剂和材料 | 第16-17页 |
| 2.2 质粒提取及验证相关试剂和材料 | 第17页 |
| 2.3 细胞培养及质粒DNA转染相关材料与试剂 | 第17-18页 |
| 2.4 蛋白提取及相关实验的材料与试剂 | 第18-20页 |
| 2.5 总RNA提取和real-time PCR相关材料与试剂 | 第20-21页 |
| 2.6 Caspase9和Caspase3活性检测所用试剂 | 第21页 |
| 2.7 凋亡检测试剂 | 第21页 |
| 2.8 主要溶液及试剂配制 | 第21-24页 |
| 3 主要仪器 | 第24-25页 |
| 4 实验方法 | 第25-39页 |
| 4.1 NTD患者及对照样本组织基因组DNA提取 | 第25-26页 |
| 4.2 二代测序 | 第26-27页 |
| 4.3 Sanger测序 | 第27页 |
| 4.4 质粒构建、验证和扩增 | 第27-30页 |
| 4.5 细胞操作相关实验 | 第30-31页 |
| 4.6 细胞蛋白提取和western blot实验 | 第31-33页 |
| 4.7 PCR | 第33-34页 |
| 4.8 细胞 mRNA 的提取和 real-time PCR | 第34-36页 |
| 4.9 Caspase9和Caspase3活性检测实验 | 第36-37页 |
| 4.10 流式细胞仪检测凋亡实验 | 第37-38页 |
| 4.11 样本脑组织叶酸浓度测定 | 第38页 |
| 4.12 实验结果的统计学分析 | 第38-39页 |
| 实验结果 | 第39-53页 |
| 1 凋亡相关基因错义突变在NTDs患者中富集 | 第39-41页 |
| 2 CASP9基因错义突变的生物信息学分析 | 第41-44页 |
| 2.1 CASP9基因错义突变的分布特征 | 第41-42页 |
| 2.2 CASP9错义突变位点保守性分析 | 第42-44页 |
| 3 CASP9基因错义突变影响CASP9蛋白表达水平和活性 | 第44-47页 |
| 3.1 CASP9 p.Y251C突变影响CASP9蛋白表达水平 | 第45-46页 |
| 3.2 CASP9 p.Y251C突变导致CASP9凋亡酶活性降低 | 第46-47页 |
| 4 CASP9基因错义突变破坏凋亡功能 | 第47-49页 |
| 4.1 CASP9 p.Y251C突变降低通路中下游分子水平 | 第47-48页 |
| 4.2 CASP9 p.Y251C突变降低CASP3凋亡酶活性 | 第48-49页 |
| 4.3 CASP9 p.Y251C突变导致细胞凋亡缺陷 | 第49页 |
| 5 CASP9基因错义突变对低叶酸条件的应答减弱 | 第49-53页 |
| 5.1 低叶酸环境下CASP9错义突变降低CASP9凋亡酶活性 | 第50-51页 |
| 5.2 低叶酸环境下CASP9 p.R191G和p.Y251C突变降低CASP3凋亡酶活性 | 第51-52页 |
| 5.3 低叶酸环境下CASP9 p.R191G和p.Y251C突变减少细胞凋亡 | 第52-53页 |
| 讨论 | 第53-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 文献综述一 神经管畸形及其遗传机制的研究进展 | 第61-80页 |
| 参考文献 | 第71-80页 |
| 文献综述二 凋亡及其在神经系统发育中的作用 | 第80-95页 |
| 参考文献 | 第90-95页 |
| 伦理委员会证明 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96-99页 |
| 论文目录 | 第99页 |
