| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 缩略词表 | 第15-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-23页 |
| 1.1 丙酮酸激酶的概述 | 第16页 |
| 1.2 丙酮酸激酶在糖酵解中的作用 | 第16-17页 |
| 1.3 丙酮酸激酶研究意义 | 第17-20页 |
| 1.3.1 丙酮酸及ATP及简介 | 第17-19页 |
| 1.3.2 丙酮酸激酶在ATP再生系统中的应用 | 第19-20页 |
| 1.4 丙酮酸激酶的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.5 不同丙酮酸激酶动力学常数对比 | 第21页 |
| 1.6 课题研究的主要内容 | 第21-23页 |
| 第二章 PykA表达质粒构建 | 第23-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 材料与试剂 | 第23页 |
| 2.1.2 仪器与设备 | 第23-24页 |
| 2.1.3 菌株及质粒 | 第24页 |
| 2.1.4 主要溶液及培养基配制 | 第24-25页 |
| 2.2 试验方法 | 第25-32页 |
| 2.2.1 菌株培养方法 | 第26-27页 |
| 2.2.2 化学感受态的制备(BL21(DE3)/TOP10/) | 第27页 |
| 2.2.3 用高保真聚合酶扩增目的基因 | 第27-29页 |
| 2.2.4 提取质粒pET28a(+)（SanPrep柱式质粒DNA小量提取试剂盒） | 第29页 |
| 2.2.5 酶切载体质粒pET28a(+)以及目的基因 pykA | 第29-30页 |
| 2.2.6 酶切产物纯化（San Prep柱式PCR产物纯化试剂盒） | 第30-31页 |
| 2.2.7 胶回收（San Prep柱式DNA胶回收试剂盒） | 第31页 |
| 2.2.8 连接酶切后的载体质粒和目的基因 | 第31页 |
| 2.2.9 化学转化 | 第31-32页 |
| 2.3 分析方法 | 第32-33页 |
| 2.3.1 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| 2.3.2 菌落PCR | 第32-33页 |
| 2.4 结果与分析 | 第33-42页 |
| 2.4.1 基因序列分析 | 第33-34页 |
| 2.4.2 氨基酸序列对比分析 | 第34-36页 |
| 2.4.3 pykA凝胶电泳 | 第36-37页 |
| 2.4.4 pET28a(+)凝胶电泳 | 第37-38页 |
| 2.4.5 胶回收 | 第38-39页 |
| 2.4.6 菌落PCR检验TOP10/pET28a(+)-pykA | 第39页 |
| 2.4.7 pET28a(+)-pykA凝胶电泳 | 第39-40页 |
| 2.4.8 BglⅡ酶切检验重组质粒pET28a(+)-pykA | 第40-41页 |
| 2.4.9 菌落PCR检验BL21/ pET28a(+)-pykA | 第41-42页 |
| 2.5 本章小结 | 第42-43页 |
| 第三章 PykA的表达纯化 | 第43-53页 |
| 3.1 实验材料与方法 | 第43-45页 |
| 3.1.1 材料与试剂 | 第43页 |
| 3.1.2 仪器与设备 | 第43-44页 |
| 3.1.3 主要溶液及培养基配制 | 第44-45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-47页 |
| 3.2.1 IPTG诱导蛋白表达 | 第45页 |
| 3.2.2 蛋白纯化（镍柱纯化） | 第45-46页 |
| 3.2.3 蛋白透析 | 第46-47页 |
| 3.3 分析方法 | 第47-49页 |
| 3.3.1 蛋白SDS-PAGE电泳 | 第47-48页 |
| 3.3.2 Bradford法对蛋白质浓度的测定（Bradford法蛋白浓度测定试剂盒） | 第48-49页 |
| 3.4 结果与分析 | 第49-52页 |
| 3.4.1 蛋白表达 | 第49-50页 |
| 3.4.2 蛋白纯化 | 第50-51页 |
| 3.4.3 蛋白定量 | 第51-52页 |
| 3.5 本章小结 | 第52-53页 |
| 第四章 PykA功能研究 | 第53-60页 |
| 4.1 材料 | 第53-54页 |
| 4.1.1 材料与试剂 | 第53页 |
| 4.1.2 仪器与设备 | 第53页 |
| 4.1.3 主要溶液配制 | 第53-54页 |
| 4.2 实验方法 | 第54-55页 |
| 4.2.1 反应体系 | 第54页 |
| 4.2.2 反应体系分析——高效液相色谱 | 第54-55页 |
| 4.3 结果分析 | 第55-59页 |
| 4.3.1 ATP、ADP标品分析 | 第55-57页 |
| 4.3.2 PykA催化功能分析 | 第57-59页 |
| 4.4 本章小结 | 第59-60页 |
| 第五章 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 攻读学位期间的学术活动及结果清单 | 第69-70页 |
