| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 符号与缩略词(ABBREVIATION) | 第14-16页 |
| 第一部分 文献综述 | 第16-38页 |
| 第一章 卵母细胞成熟调控及相关影响因素 | 第16-32页 |
| 1 卵母细胞成熟过程 | 第16-25页 |
| 1.1 卵母细胞的成熟与非中心体化特征 | 第16-17页 |
| 1.2 卵母细胞遗传物质与能量供应 | 第17-18页 |
| 1.3 卵母细胞成熟过程中纺锤体组装 | 第18-21页 |
| 1.4 卵母细胞成熟过程中无中心体的纺锤体的组织 | 第21-22页 |
| 1.5 卵母细胞成熟过程中染色体分离 | 第22-25页 |
| 2 老化对于卵母细胞成熟的影响 | 第25-27页 |
| 2.1 减弱的结合力是导致年龄相关的染色体分离错误的主要原因 | 第25-26页 |
| 2.2 纺锤体组装的偏差与年龄相关的异常的染色体分离联系紧密 | 第26-27页 |
| 3 肥胖对哺乳动物生殖的影响 | 第27-32页 |
| 3.1 营养环境对卵母细胞代谢的影响 | 第28页 |
| 3.2 肥胖引起氧化应激和线粒体失调 | 第28-29页 |
| 3.3 肥胖对生殖影响的可能通路或因素 | 第29-32页 |
| 第二章 SIRTUINS的研究进展 | 第32-38页 |
| 1 SIRTUINS的发现 | 第32页 |
| 2 SIRTUINS的研究进展 | 第32-38页 |
| 2.1 Sirtuins是NAD+脱乙酰化酶类和单核糖基转移酶 | 第32-33页 |
| 2.2 哺乳动物的Sirtuins | 第33-34页 |
| 2.3 哺乳动物Sirtuins的功能研究进展 | 第34-38页 |
| 第二部分 试验研究 | 第38-92页 |
| 第三章 SIRT2在小鼠卵母细胞减数分裂过程中的作用 | 第38-64页 |
| 1 材料 | 第38-42页 |
| 1.1 主要仪器 | 第38-39页 |
| 1.2 主要试剂 | 第39-41页 |
| 1.3 试剂配制 | 第41-42页 |
| 2 方法 | 第42-48页 |
| 2.1 小鼠卵母细胞的采集及培养 | 第42-43页 |
| 2.2 显微注射 | 第43页 |
| 2.3 小鼠卵母细胞RNA的提取及逆转录 | 第43-44页 |
| 2.4 PCR | 第44-45页 |
| 2.5 产物检测及胶回收 | 第45页 |
| 2.6 酶切 | 第45页 |
| 2.7 连接与转化 | 第45-46页 |
| 2.8 质粒提取 | 第46页 |
| 2.9 鉴定 | 第46页 |
| 2.10 质粒的线性化 | 第46页 |
| 2.11 蛋白免疫印迹(Western blot) | 第46-47页 |
| 2.12 免疫荧光染色 | 第47-48页 |
| 2.13 核型分析 | 第48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-61页 |
| 3.1 Sirt2影响小鼠卵母细胞减数分裂进程 | 第48-50页 |
| 3.2 Sirt2在小鼠卵母细胞减数分裂过程中的蛋白定位 | 第50-51页 |
| 3.3 Sirt2作用于纺锤体的形成和染色体组织 | 第51-53页 |
| 3.4 Sirt2-KD损害动粒微管之间的相互作用 | 第53-55页 |
| 3.5 Sirt2-KD导致K4K16和α-tubulin的高度乙酰化 | 第55-58页 |
| 3.6 Sirt2过表达改善雌性年龄相关的卵母细胞减数分裂的缺陷 | 第58-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 4.1 Sirt2与H4K16/α-tubulin脱乙酰化和纺锤体染色体的组织 | 第61-62页 |
| 4.2 Sirt2与卵母细胞老化 | 第62-63页 |
| 5 小结 | 第63-64页 |
| 第四章 SIRT3在小鼠卵母细胞减数分裂过程中的作用 | 第64-80页 |
| 1 材料 | 第65页 |
| 1.1 仪器 | 第65页 |
| 1.2 主要试剂 | 第65页 |
| 1.3 试验动物与日粮 | 第65页 |
| 2 方法 | 第65-66页 |
| 2.1 细胞内ROS的测定方法: | 第65-66页 |
| 2.2 Western blot | 第66页 |
| 3 结果 | 第66-77页 |
| 3.1 HFD小鼠卵中Sirt3的表达下降 | 第66-67页 |
| 3.2 Sirt3的下降引起卵母细胞ROS水平的上升 | 第67-69页 |
| 3.3 Sirt3的过表达减少HFD小鼠卵母细胞ROS的生成和改善减数分裂的缺陷 | 第69-71页 |
| 3.4 Sirt3控制着卵母细胞中SOD2赖氨酸68的乙酰化调节ROS的生成 | 第71-74页 |
| 3.5 模仿去乙酰化的突变体SOD2K68R有效改善HFD小鼠卵母细胞中的缺陷表型 | 第74-77页 |
| 4 讨论 | 第77-78页 |
| 5 小结 | 第78-80页 |
| 第五章 SIRTUIN抑制剂阻断猪卵母细胞减数分裂进程 | 第80-92页 |
| 1 材料 | 第80-82页 |
| 1.1 仪器 | 第80-81页 |
| 1.2 试剂 | 第81页 |
| 1.3 试剂配制 | 第81-82页 |
| 2 方法 | 第82-83页 |
| 2.1 猪卵母细胞的采集和培养 | 第82-83页 |
| 2.2 卵母细胞收集 | 第83页 |
| 2.3 猪卵免疫荧光染色 | 第83页 |
| 3 结果 | 第83-90页 |
| 3.1 NAM和Sirtinol对于猪卵母细胞减数分裂成熟的影响 | 第83-85页 |
| 3.2 NAM和Sirtinol扰乱肌动蛋白的形成 | 第85-87页 |
| 3.3 NAM和Sirtinol扰乱无皮质颗粒区域的形成 | 第87-88页 |
| 3.4 NAM和Sirtinol处理导致猪卵中纺锤体的缺陷 | 第88-90页 |
| 4 讨论 | 第90页 |
| 5 小结 | 第90-92页 |
| 全文结论 | 第92-94页 |
| 创新点 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-114页 |
| 附录:攻读博士期间发表的论文 | 第114-116页 |
| 致谢 | 第116页 |
