| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 主要符号表 | 第24-25页 |
| 1 绪论 | 第25-51页 |
| 1.1 代谢酶简介 | 第25-27页 |
| 1.2 反应型小分子荧光探针简介 | 第27-34页 |
| 1.2.1 荧光团 | 第27页 |
| 1.2.2 单光子与双光子激发 | 第27-29页 |
| 1.2.3 反应型小分子荧光探针荧光信号输出模式 | 第29-33页 |
| 1.2.4 反应型小分子荧光探针的检测模式 | 第33-34页 |
| 1.3 检测酶活性反应型荧光探针研究进展 | 第34-50页 |
| 1.3.1 氧化代谢酶荧光探针 | 第35-38页 |
| 1.3.2 还原代谢酶荧光探针 | 第38-41页 |
| 1.3.3 水解代谢酶荧光探针 | 第41-46页 |
| 1.3.4 结合代谢酶荧光探针 | 第46-50页 |
| 1.4 本文主要研究思路 | 第50-51页 |
| 2 羧酸酯酶1活性检测双光子荧光探针的设计、合成及应用 | 第51-72页 |
| 2.1 引言 | 第51-53页 |
| 2.2 HABO衍生物的合成路线 | 第53页 |
| 2.3 实验部分 | 第53-60页 |
| 2.3.1 仪器和材料 | 第53-54页 |
| 2.3.2 HABO衍生物的合成 | 第54-56页 |
| 2.3.3 羧酸酯酶1活性检测方法 | 第56页 |
| 2.3.4 探针BABO代谢产物鉴定 | 第56-57页 |
| 2.3.5 选择性测试方法 | 第57页 |
| 2.3.6 探针BABO标准曲线测试方法 | 第57页 |
| 2.3.7 探针BABO化学抑制实验测试方法 | 第57页 |
| 2.3.8 羧酸酯酶1水解BABO与氯吡格雷速率相关性测试方法 | 第57-58页 |
| 2.3.9 pH对BABO及其代谢产物HABO的影响 | 第58页 |
| 2.3.10 酶促动力学测试 | 第58页 |
| 2.3.11 探针BABO细胞毒性测试方法 | 第58页 |
| 2.3.12 探针BABO及其代谢产物HABO双光子截面积测试方法 | 第58页 |
| 2.3.13 探针BABO细胞成像测试方法 | 第58-59页 |
| 2.3.14 探针BABO组织成像测试方法 | 第59页 |
| 2.3.15 探针BABO免疫印迹法测试方法 | 第59页 |
| 2.3.16 分了对接实验方法 | 第59-60页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第60-71页 |
| 2.4.1 探针BABO对CE1的光谱响应 | 第60-61页 |
| 2.4.2 选择性测试 | 第61-62页 |
| 2.4.3 探针BABO检测CE1标准曲线的建立 | 第62-63页 |
| 2.4.4 探针BABO化学抑制实验 | 第63-64页 |
| 2.4.5 羧酸酯酶1水解BABO和氯吡格雷速率相关性测试 | 第64-65页 |
| 2.4.6 pH对BABO以及HABO荧光强度的影响 | 第65页 |
| 2.4.7 羧酸酯酶1水解BABO的动力学分析 | 第65-66页 |
| 2.4.8 探针BABO的细胞毒性测试 | 第66页 |
| 2.4.9 探针BABO的双光子成像研究 | 第66-68页 |
| 2.4.10 蛋白质免疫分析法与BABO水解结果对照 | 第68-69页 |
| 2.4.11 探针BABO与CE1和CE2对接实验 | 第69-71页 |
| 2.5 本章小结 | 第71-72页 |
| 3 羧酸酯酶2活性检测荧光探针的设计、合成及应用 | 第72-98页 |
| 3.1 引言 | 第72-73页 |
| 3.2 探针的合成路线 | 第73-74页 |
| 3.3 实验部分 | 第74-81页 |
| 3.3.1 仪器和材料 | 第74页 |
| 3.3.2 探针的合成 | 第74-78页 |
| 3.3.3 羧酸酯酶2活性检测方法 | 第78页 |
| 3.3.4 探针TCFB及3-AF代谢产物鉴定 | 第78页 |
| 3.3.5 选择性测试方法 | 第78-79页 |
| 3.3.6 探针TCFB及3-AF标准曲线测试方法 | 第79页 |
| 3.3.7 探针TCFB及3-AF化学抑制实验测试方法 | 第79页 |
| 3.3.8 探针TCFB及3-AF相关性测试方法 | 第79页 |
| 3.3.9 pH对TCFB、3-AF及其代谢产物的影响 | 第79页 |
| 3.3.10 探针TCFB及3-AF细胞毒性测试方法 | 第79-80页 |
| 3.3.11 探针TCFB及3-AF细胞成像测试方法 | 第80页 |
| 3.3.12 分子对接实验方法 | 第80-81页 |
| 3.4 探针TCFB检测羧酸酯酶2的结果与讨论 | 第81-90页 |
| 3.4.1 探针TCFB对羧酸酯酶2的光谱响应 | 第81-83页 |
| 3.4.2 探针TCFB选择性测试 | 第83页 |
| 3.4.3 探针TCFB检测羧酸酯酶2标准曲线的建立 | 第83-84页 |
| 3.4.4 探针TCFB化学抑制实验 | 第84-85页 |
| 3.4.5 羧酸酯酶2水解TCFB与FD速率相关性测试 | 第85页 |
| 3.4.6 pH对TCFB以及TCF荧光强度的影响 | 第85-86页 |
| 3.4.7 羧酸酯酶2水解TCFB的动力学分析 | 第86-87页 |
| 3.4.8 探针TCFB的细胞毒性测试 | 第87页 |
| 3.4.9 探针TCFB的细胞成像研究 | 第87-88页 |
| 3.4.10 探针TCFB与CE1和CE2对接实验 | 第88-90页 |
| 3.5 探针3-AF检测羧酸酯酶2结果与讨论 | 第90-97页 |
| 3.5.1 探针3-AF对羧酸酯酶2的光谱响应 | 第90-92页 |
| 3.5.2 选择性测试 | 第92页 |
| 3.5.3 探针3-AF检测羧酸酯酶2标准曲线的建立 | 第92-94页 |
| 3.5.4 探针3-AF化学抑制实验 | 第94-95页 |
| 3.5.5 羧酸酯酶2水解3-AF和FD速率相关性测试 | 第95页 |
| 3.5.6 pH对3-AF以及3-HF荧光强度的影响 | 第95-96页 |
| 3.5.7 探针3-AF的细胞毒性测试 | 第96页 |
| 3.5.8 探针3-AF的细胞成像研究 | 第96-97页 |
| 3.6 本章小结 | 第97-98页 |
| 4 人血清白蛋白活性检测荧光探针的设计、合成及应用 | 第98-115页 |
| 4.1 引言 | 第98-100页 |
| 4.2 合成路线 | 第100页 |
| 4.3 实验部分 | 第100-105页 |
| 4.3.1 仪器和材料 | 第100页 |
| 4.3.2 DDAO衍生物的合成 | 第100-103页 |
| 4.3.3 HSA水解活性测试方法 | 第103页 |
| 4.3.4 探针DDAP代谢产物鉴定 | 第103页 |
| 4.3.5 探针DDAP选择性测试方法 | 第103页 |
| 4.3.6 常见离子以及氨基酸对DDAP选择性的影响 | 第103页 |
| 4.3.7 探针DDAP标准曲线测试方法 | 第103-104页 |
| 4.3.8 pH对DDAP及其代谢产物DDAO的影响 | 第104页 |
| 4.3.9 体系中DMSO含量对HSA代谢DDAP的影响 | 第104页 |
| 4.3.10 酶促反应动力学 | 第104页 |
| 4.3.11 与BCG法相关性实验 | 第104页 |
| 4.3.12 HSA水解能力与热致变性的关系 | 第104页 |
| 4.3.13 检测HepG2分泌HSA能力 | 第104页 |
| 4.3.14 人血浆中HSA含量检测 | 第104-105页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第105-114页 |
| 4.4.1 探针DDAP对HSA的光谱响应 | 第105-106页 |
| 4.4.2 选择性测试 | 第106-108页 |
| 4.4.3 探针DDAP检测HSA标准曲线的建立 | 第108-109页 |
| 4.4.4 pH对DDAP以及DDAO荧光强度的影响 | 第109页 |
| 4.4.5 体系中DMSO含量对HSA代谢DDAP的影响 | 第109-110页 |
| 4.4.6 HSA水解DDAP的酶促反应动力学 | 第110-111页 |
| 4.4.7 与BCG法对照实验 | 第111页 |
| 4.4.8 热致变性对HSA水解能力的影响 | 第111-112页 |
| 4.4.9 检测HepG2分泌HSA能力 | 第112页 |
| 4.4.10 实际样本中HSA的检测 | 第112-114页 |
| 4.5 本章小结 | 第114-115页 |
| 5 细胞色素P450 1A1活性检测荧光探针的设计、合成及应用 | 第115-133页 |
| 5.1 引言 | 第115-117页 |
| 5.2 探针HHPO衍生物的合成路线 | 第117页 |
| 5.3 实验部分 | 第117-123页 |
| 5.3.1 仪器和材料 | 第117页 |
| 5.3.2 HHPO衍生物的合成 | 第117-119页 |
| 5.3.3 基本孵育体系 | 第119页 |
| 5.3.4 探针CHPO代谢产物鉴定 | 第119-120页 |
| 5.3.5 探针CHPO代谢产物HHPO荧光检测条件确定 | 第120页 |
| 5.3.6 选择性测试方法 | 第120页 |
| 5.3.7 探针CHPO标准曲线测试方法 | 第120页 |
| 5.3.8 抑制实验 | 第120-121页 |
| 5.3.9 代谢动力学实验 | 第121-122页 |
| 5.3.10 不同pH对CHPO及其谢产物HHPO的荧光强度影响 | 第122页 |
| 5.3.11 探针CHPO细胞毒性测试方法 | 第122页 |
| 5.3.12 探针CHPO细胞成像测试方法 | 第122页 |
| 5.3.13 探针CHPO对接实验 | 第122-123页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第123-132页 |
| 5.4.1 探针CHPO对CYP1A1光谱响应 | 第123-125页 |
| 5.4.2 选择性测试 | 第125页 |
| 5.4.3 探针CHPO检测CYP1A1标准曲线的建立 | 第125-127页 |
| 5.4.4 探针CHPO化学抑制实验 | 第127-128页 |
| 5.4.5 探针CHPO检测不同个体CYP1A1活性差异 | 第128-129页 |
| 5.4.6 pH对CHOP以及HHPO荧光强度的影响 | 第129页 |
| 5.4.7 CYP1A1代谢CHPO的动力学分析 | 第129-130页 |
| 5.4.8 探针CHPO的细胞毒性测试 | 第130-131页 |
| 5.4.9 探针CHPO的细胞成像 | 第131-132页 |
| 5.4.10 CHPO与CYP1A1和CYP1A2晶体模型对接实验 | 第132页 |
| 5.5 本章小结 | 第132-133页 |
| 6 结论与展望 | 第133-135页 |
| 6.1 结论 | 第133-134页 |
| 6.2 创新点 | 第134页 |
| 6.3 展望 | 第134-135页 |
| 参考文献 | 第135-143页 |
| 附录A 重要化合物谱图 | 第143-151页 |
| 攻读博士学位期间科研项目及科研成果 | 第151-156页 |
| 致谢 | 第156-157页 |
| 作者简介 | 第157页 |
