| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-28页 |
| ·子囊霉素生物合成研究进展 | 第10-16页 |
| ·子囊霉素的理化性质与免疫抑制活性 | 第10-11页 |
| ·子囊霉素生物合成基因簇的研究进展 | 第11-12页 |
| ·子囊霉素合成前体的研究进展 | 第12-15页 |
| ·发酵法生产子囊霉素的研究进展 | 第15-16页 |
| ·~(13)C代谢通量分析及平行标记实验 | 第16-22页 |
| ·~(13)C代谢通量分析的发展 | 第16-18页 |
| ·平行标记实验 | 第18-22页 |
| ·基元模式分析的研究与应用 | 第22-25页 |
| ·基元模式分析的算法和软件 | 第22-23页 |
| ·基元模式分析的应用 | 第23-25页 |
| ·代谢组学在工业微生物领域的应用 | 第25页 |
| ·本文主要研究内容 | 第25-28页 |
| 第二章 莽草酸促进子囊霉素合成机理解析 | 第28-51页 |
| ·实验材料 | 第28-31页 |
| ·菌种和培养基 | 第28-29页 |
| ·实验药品 | 第29-30页 |
| ·仪器设备 | 第30-31页 |
| ·实验操作与方法 | 第31-37页 |
| ·吸水链霉菌子囊亚种培养条件 | 第31-32页 |
| ·莽草酸耐受突变株获得 | 第32页 |
| ·外源莽草酸添加优化 | 第32页 |
| ·发酵特性分析 | 第32-33页 |
| ·胞内代谢物分析 | 第33-35页 |
| ·胞内酶活性分析 | 第35-36页 |
| ·RT-PCR分析子囊霉素合成基因表达 | 第36-37页 |
| ·数据分析 | 第37页 |
| ·结果与讨论 | 第37-50页 |
| ·莽草酸添加优化及子囊霉素高产突变株SA68发酵特性分析 | 第37-41页 |
| ·莽草酸代谢相关的酶活性及代谢物水平比较分析 | 第41-47页 |
| ·子囊霉素生物合成相关基因转录水平比较分析 | 第47-50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 第三章 ~(13)C标记实验的代谢途径分析预测子囊霉素高产靶基因 | 第51-73页 |
| ·实验材料 | 第52-53页 |
| ·菌种 | 第52页 |
| ·培养基 | 第52-53页 |
| ·主要试剂与溶液 | 第53页 |
| ·主要仪器 | 第53页 |
| ·实验操作与方法 | 第53-57页 |
| ·~(13)C标记实验 | 第53-54页 |
| ·子囊霉素提取与检测 | 第54页 |
| ·菌体生物量测定 | 第54页 |
| ·发酵液中葡萄糖及其它代谢物测定 | 第54页 |
| ·~(13)C标记的菌体蛋白氨基酸检测 | 第54-55页 |
| ·代谢网络模型 | 第55-56页 |
| ·~(13)C代谢通量分析 | 第56页 |
| ·拟合优度分析 | 第56页 |
| ·基元模式分析 | 第56-57页 |
| ·结果与讨论 | 第57-72页 |
| ·突变株SA68在~(13)C标记培养基中发酵特性 | 第57-58页 |
| ·~(13)C平行标记实验 | 第58-61页 |
| ·代谢网络模型验证及校准 | 第61-65页 |
| ·~(13)C代谢通量分析 | 第65-67页 |
| ·完善子囊霉素合成中心代谢网络模型 | 第67页 |
| ·基元模式分析及靶基因预测 | 第67-72页 |
| ·小结 | 第72-73页 |
| 第四章 模型指导下子囊霉素菌株基因改造 | 第73-93页 |
| ·实验材料 | 第74-78页 |
| ·菌种、质粒及引物 | 第74-76页 |
| ·培养基 | 第76页 |
| ·主要试剂与溶液 | 第76-78页 |
| ·主要仪器 | 第78页 |
| ·实验操作与方法 | 第78-85页 |
| ·子囊霉素生产菌株的培养 | 第78-79页 |
| ·大肠杆菌的培养 | 第79页 |
| ·引物设计及基因测序 | 第79页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第79-80页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞转化 | 第80页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第80页 |
| ·链霉菌基因组提取 | 第80-81页 |
| ·DNA片段的回收纯化 | 第81页 |
| ·重组质粒构建 | 第81-83页 |
| ·目标基因过表达和敲除 | 第83-84页 |
| ·子囊霉素与总糖检测 | 第84页 |
| ·生物量检测 | 第84页 |
| ·酶活性分析 | 第84-85页 |
| ·结果与讨论 | 第85-92页 |
| ·fkbO基因过表达菌株TD-fkbO构建及代谢分析 | 第85-87页 |
| ·pyc基因失活菌株TD-ΔPyc构建及代谢分析 | 第87-89页 |
| ·组合基因操作工程菌株TD-ΔPyc-fkbO构建及表征 | 第89-90页 |
| ·工程菌株TD-ΔPyc-fkbO的发酵优化 | 第90-92页 |
| ·小结 | 第92-93页 |
| 第五章 结论与展望 | 第93-95页 |
| ·主要结论 | 第93-94页 |
| ·创新点 | 第94页 |
| ·展望 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-108页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第108-110页 |
| 附录 | 第110-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
