| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第1章 引言 | 第13-26页 |
| ·IGFBP7 基因的结构与功能的研究进展 | 第13-19页 |
| ·IGF 信号通路功能的研究进展 | 第13页 |
| ·IGFBP7(IGFBP-rP1/PSF/TAF)结构的研究进展 | 第13-15页 |
| ·不同命名形式的 IGFBP7(IGFBP-rP1/MAC25/PSF/TAF)结构的研究进展 | 第15-19页 |
| ·Mac25 基因的研究进展 | 第15-16页 |
| ·TAF 基因的研究进展 | 第16-17页 |
| ·PSF 基因的研究进展 | 第17页 |
| ·IGFBP7 基因的研究进展 | 第17-19页 |
| ·RNAi 的研究进展 | 第19-22页 |
| ·RNAi 的原理及作用机制 | 第19-20页 |
| ·RANi 的主要技术方法 | 第20-22页 |
| ·海洋贝类附着变态的研究进展 | 第22-23页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第23-24页 |
| ·主要研究内容和技术路线 | 第24-26页 |
| ·主要研究内容 | 第24-25页 |
| ·主要技术路线 | 第25-26页 |
| 第2章 杂色鲍 saIGFBP7 基因的克隆和序列分析 | 第26-41页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·实验动物 | 第26页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第26页 |
| ·RACE 引物 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-31页 |
| ·总 RNA 的提取（RDP 法）和去除 DNA 的污染 | 第27页 |
| ·合成 RT-PCR cDNA 第一链和 PCR 扩增获取基因 cDNA 片段 | 第27-28页 |
| ·SMART-RACE 技术获取基因全长 | 第28-29页 |
| ·RACE cDNA 第一条链的合成 | 第28页 |
| ·5’RACE-PCR | 第28-29页 |
| (1) 第一轮 5’RACE-PCR 特异性扩增 | 第28页 |
| (2) 第二轮 5’RACE-PCR 特异性扩增（Nested-PCR） | 第28-29页 |
| ·3’RACE-PCR | 第29页 |
| (1) 第一轮 3’RACE-PCR 特异性扩增 | 第29页 |
| (2) 第二轮 3’RACE-PCR 特异性扩增（Nested-PCR） | 第29页 |
| ·割胶纯化基因片段 | 第29-30页 |
| ·与质粒载体连接 | 第30页 |
| ·感受态细胞的转化及筛选 | 第30页 |
| ·质粒插入片段的检测 | 第30页 |
| ·质粒测序 | 第30页 |
| ·目的基因的生物信息学分析 | 第30-31页 |
| ·实验结果 | 第31-39页 |
| ·杂色鲍各组织总 RNA 的抽提结果 | 第31页 |
| ·RACE-PCR 扩增结果 | 第31-32页 |
| ·saIGFBP7 基因序列分析 | 第32-39页 |
| ·saIGFBP7 基因序列分析 | 第32-33页 |
| ·同源分析和系统发育分析 | 第33-37页 |
| ·三级结构预测 | 第37-39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 第3章 杂色鲍 saIGFBP7 组织表达及免疫相关功能分析 | 第41-58页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·实验动物 | 第41页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第41页 |
| ·引物 | 第41-42页 |
| ·实时定量 PCR 引物 | 第41-42页 |
| ·原位杂交和原核表达引物 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-51页 |
| ·总 RNA 的提取和 DNA 污染的去除 | 第42页 |
| ·cDNA 第一链的合成和 saIGFBP7 cDNA 片段的获得 | 第42页 |
| ·saIGFBP7 基因片段的纯化 | 第42页 |
| ·与质粒载体连接 | 第42页 |
| ·感受态细胞的转化及筛选 | 第42页 |
| ·质粒插入片段的检测 | 第42页 |
| ·质粒测序 | 第42页 |
| ·实时定量 PCR 反应体系及条件 | 第42-43页 |
| ·石蜡切片 | 第43-44页 |
| ·HE 染色 | 第44页 |
| ·原位杂交 | 第44-46页 |
| ·目的基因与质粒载体连接 | 第44页 |
| ·感受态细胞的转化及筛选 | 第44页 |
| ·质粒插入片段的检测 | 第44页 |
| ·质粒测序及质粒提取 | 第44页 |
| ·制备线性化 DNA | 第44-45页 |
| ·DIG-标记 RNA 探针合成 | 第45页 |
| ·杂交 | 第45-46页 |
| ·免疫组化 | 第46-47页 |
| ·蛋白质免疫印迹 | 第47-49页 |
| ·杂色鲍各组织匀浆液蛋白的提取 | 第47页 |
| ·BCA 法测定蛋白浓度 | 第47页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第47-48页 |
| ·Western blot | 第48-49页 |
| ·蛋白原核表达 | 第49-51页 |
| ·含酶切位点目的基因的扩增 | 第49页 |
| ·质粒的提取纯化 | 第49页 |
| ·双酶切反应与酶切产物目的片段的纯化 | 第49-50页 |
| ·连接反应 | 第50页 |
| ·转化 | 第50页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第50页 |
| ·重组表达载体在 E.coli BL21 的表达和检测 | 第50-51页 |
| ·实验结果 | 第51-56页 |
| ·重组表达质粒 pET-IGFBP7 和 pGEX-IGFBP7 的构建 | 第51-52页 |
| ·杂色鲍 saIGFBP7 mRNA 和蛋白在各组织中的表达特征 | 第52-53页 |
| ·杂色鲍 saIGFBP7 mRNA 和蛋白在血细胞和鳃组织中的定位表达 | 第53-54页 |
| ·杂色鲍 saIGFBP7 mRNA 和蛋白在副溶血弧菌感染后的表达特征 | 第54-56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| 第4章 杂色鲍 saIGFBP7 发育相关功能分析 | 第58-82页 |
| ·材料 | 第58页 |
| ·实验材料 | 第58页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-67页 |
| ·saIGFBP7 基因标准曲线的制作 | 第58页 |
| ·幼体培育 | 第58-59页 |
| ·RNA 的提取和逆转录 | 第59页 |
| ·RT-PCR 扩增和结果分析 | 第59页 |
| ·胚胎整体原位杂交 | 第59-61页 |
| ·胚胎整体免疫组织化学 | 第61页 |
| ·设计检测 saIGFBP7 基因沉默效应的定量引物 | 第61-63页 |
| ·设计 RNA 干扰引物 | 第63页 |
| ·合成 dsRNA | 第63-64页 |
| ·过表达探针制备 | 第64页 |
| ·RNAi 实验 | 第64-65页 |
| ·杂色鲍血细胞的培养 | 第65-67页 |
| ·实验结果 | 第67-78页 |
| ·杂色鲍胚胎和早期幼体各主要形态阶段的发育过程 | 第67-68页 |
| ·杂色鲍 saIGFBP7 基因在胚胎和早期幼虫时期的表达 | 第68-71页 |
| ·杂色鲍 saIGFBP7 RNAi 中 dsRNA 的设计和合成 | 第71-72页 |
| ·杂色鲍 saIGFBP7 RNAi 影响幼虫附着变态 | 第72-73页 |
| ·杂色鲍 saIGFBP7-RNAi 对其幼虫 IGFBP7 mRNA 表达的影响 | 第73-75页 |
| ·杂色鲍血细胞中 saIGFBP7-RNAi 和过表达对其细胞增殖的影响 | 第75-78页 |
| ·讨论 | 第78-82页 |
| 第5章 杂色鲍 saIGFBP7 相关基因分析 | 第82-92页 |
| ·材料 | 第82-83页 |
| ·实验材料 | 第82页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第82页 |
| ·RACE 引物 | 第82页 |
| ·实时定量 PCR 引物 | 第82页 |
| ·原位杂交引物 | 第82-83页 |
| ·实验方法 | 第83-84页 |
| ·总 RNA 的提取（RDP 法）和去除 DNA 的污染 | 第83页 |
| ·合成 RT-PCR cDNA 第一链和 PCR 扩增获取基因 cDNA 片段 | 第83页 |
| ·SMART-RACE 技术获取基因全长 | 第83页 |
| ·割胶纯化基因片段 | 第83页 |
| ·与质粒载体连接 | 第83页 |
| ·感受态细胞的转化及筛选 | 第83页 |
| ·质粒插入片段的检测 | 第83页 |
| ·质粒测序 | 第83页 |
| ·目的基因的生物信息学分析 | 第83页 |
| ·实时定量 PCR 及绝对定量 PCR 反应体系及条件 | 第83页 |
| ·胚胎整体原位杂交 | 第83-84页 |
| ·实验结果 | 第84-90页 |
| ·筛选杂色鲍 saIGFBP7 基因的相关基因 | 第84-85页 |
| ·saEGFL6 基因在杂色鲍 saIGFBP7 基因沉默后的定位表达 | 第85页 |
| ·saVDAC2 基因在杂色鲍 saIGFBP7 基因沉默后的定位表达 | 第85-86页 |
| ·saEGFL6 基因序列分析 | 第86-87页 |
| ·杂色鲍 saEGFL6 基因在各组织中的表达 | 第87-88页 |
| ·杂色鲍 saEGFL6 基因在胚胎和早期幼虫时期的表达 | 第88页 |
| ·杂色鲍 saVDAC2 基因在各组织中的表达特征 | 第88-89页 |
| ·杂色鲍 saVDAC2 基因在胚胎和早期幼虫时期的表达 | 第89-90页 |
| ·讨论 | 第90-92页 |
| 第6章 结论与展望 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-103页 |
| 在学期间发表的学术论文 | 第103页 |
