毛竹全长均一化cDNA文库构建与快速生长相关基因的筛选
| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-20页 |
| ·引言 | 第12-13页 |
| ·研究背景 | 第12-13页 |
| ·研究目的和意义 | 第13页 |
| ·研究内容 | 第13页 |
| ·国内外研究现状与综述 | 第13-17页 |
| ·毛竹的形态结构学研究进展 | 第13-14页 |
| ·毛竹茎秆发育研究进展 | 第14-15页 |
| ·毛竹快速生长机理研究进展 | 第15-16页 |
| ·采用文库筛选基因的研究现状 | 第16-17页 |
| ·研究目标和主要内容 | 第17-18页 |
| ·研究目标 | 第17页 |
| ·主要研究方法 | 第17-18页 |
| ·工作软硬件基础 | 第18-19页 |
| ·技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 毛竹全长均一化cDNA文库的构建 | 第20-35页 |
| ·实验材料 | 第20-22页 |
| ·取样地概括 | 第20-21页 |
| ·样本采集 | 第21页 |
| ·培养基配制 | 第21页 |
| ·载体扩繁 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-29页 |
| ·总RNA提取 | 第22-23页 |
| ·逆转录反应 | 第23页 |
| ·全长cDNA第二链合成 | 第23-24页 |
| ·全长cDNA均一化处理 | 第24-25页 |
| ·均一化cDNA的扩增与胶回收 | 第25-26页 |
| ·全长均一化cDNA扩增产物与表达载体的连接 | 第26-27页 |
| ·连接产物纯化 | 第27-28页 |
| ·连接产物电击转化与涂平板 | 第28页 |
| ·挑取单克隆验证插入片段大小 | 第28页 |
| ·刮板与提取质粒 | 第28-29页 |
| ·结果与分析 | 第29-33页 |
| ·总RNA提取 | 第29页 |
| ·双链cDNA合成 | 第29-31页 |
| ·DNA均一化处理结果比较 | 第31页 |
| ·In-fusion反应 | 第31页 |
| ·电转化结果比较 | 第31-32页 |
| ·文库单克隆验证 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-35页 |
| ·RNA质量是文库构建成败的前提条件 | 第33-34页 |
| ·DSN处理过程需要谨慎 | 第34页 |
| ·In-fusion效率受PCR产物大小的影响 | 第34页 |
| ·In-fusion产物的纯化有利于电击转化 | 第34-35页 |
| 第三章 毛竹均一化cDNA文库的拟南芥转化 | 第35-42页 |
| ·实验材料 | 第36-37页 |
| ·农杆菌电击感受态的制备 | 第36页 |
| ·拟南芥的种植 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-38页 |
| ·农杆菌的电击转化 | 第37页 |
| ·农杆菌侵染拟南芥 | 第37-38页 |
| ·拟南芥的管理 | 第38页 |
| ·结果与讨论 | 第38-42页 |
| ·农杆菌的培养 | 第38-39页 |
| ·拟南芥的种植与转化 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-42页 |
| 第四章 T1代种子的阳性筛选 | 第42-46页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·方法 | 第43页 |
| ·种子“层积”处理 | 第43页 |
| ·阳性苗的抗Basta筛选 | 第43页 |
| ·结果分析 | 第43-46页 |
| ·结果 | 第43-44页 |
| ·分析 | 第44-46页 |
| 第五章 T1代转基因拟南芥表型的鉴定 | 第46-60页 |
| ·实验材料 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-58页 |
| ·表型观察 | 第46-47页 |
| ·快速生长相关表型分类 | 第47-54页 |
| ·毛竹插入基因的鉴定 | 第54-58页 |
| ·结果与分析 | 第58-60页 |
| 第六章 纯合子鉴定 | 第60-63页 |
| ·T2代种子的basta筛选 | 第60-62页 |
| ·1/2 MS培养基筛选 | 第60页 |
| ·移苗培养 | 第60-62页 |
| ·T3代种子培养基筛选 | 第62-63页 |
| ·T3代种子basta筛选 | 第62页 |
| ·移苗培养 | 第62-63页 |
| 第七章 结论与展望 | 第63-65页 |
| ·结果与讨论 | 第63-64页 |
| ·展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 附录 | 第71-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
