| 致谢 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-16页 |
| ·酚酸 | 第9-10页 |
| ·4-乙烯基酚类物质及其化学、生物合成方法 | 第10页 |
| ·酚酸脱羧酶 | 第10-12页 |
| ·酚酸脱羧酶催化的抑制因素 | 第12页 |
| ·两相转化体系 | 第12-13页 |
| ·两相转化体系简介 | 第12-13页 |
| ·两相转化体系的限制因素 | 第13页 |
| ·两相转化体系在酚酸脱羧酶上的应用 | 第13页 |
| ·酶固定化技术简介 | 第13-14页 |
| ·酶固定化方法 | 第13-14页 |
| ·酶固定化材料 | 第14页 |
| ·本文研究意义与内容 | 第14-16页 |
| ·本文研究意义 | 第14-15页 |
| ·本文研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 酚酸脱羧酶基因blpad的克隆表达 | 第16-29页 |
| ·实验材料 | 第16-17页 |
| ·菌种和质粒 | 第16页 |
| ·试剂盒 | 第16页 |
| ·工具酶及试剂 | 第16页 |
| ·培养基 | 第16-17页 |
| ·仪器 | 第17页 |
| ·实验方法 | 第17-23页 |
| ·地衣芽孢杆菌总基因组的提取 | 第17-18页 |
| ·酚酸脱羧酶基因blpad的克隆 | 第18-19页 |
| ·重组表达载体pET28b+ - blpad的构建 | 第19-20页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 (Escherichia coli)DH5α | 第20-21页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 (Escherichia coli)BL21 | 第21页 |
| ·BLPAD在大肠杆菌 (Escherichia coli)BL21中表达分析 | 第21-23页 |
| ·BLPAD的Ni-NTA Agarose亲和层析纯化 | 第23页 |
| ·结果与分析 | 第23-28页 |
| ·地衣芽孢杆菌总基因组的提取 | 第23-24页 |
| ·酚酸脱羧酶基因blpad片段的获得 | 第24-25页 |
| ·重组质粒pET28b+ - blpad阳性克隆的筛选 | 第25页 |
| ·BLPAD序列分析 | 第25-26页 |
| ·BLPAD结构分析 | 第26-27页 |
| ·BLPAD诱导表达分析 | 第27页 |
| ·BLPAD纯化验证 | 第27-28页 |
| ·小结 | 第28-29页 |
| 第三章 重组BLPAD的表达优化及酶学性质研究 | 第29-43页 |
| ·实验材料 | 第29-30页 |
| ·菌种 | 第29页 |
| ·试剂 | 第29页 |
| ·培养基 | 第29页 |
| ·实验仪器 | 第29页 |
| ·缩略词 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-34页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第30页 |
| ·HPLC及GC-MS分析方法 | 第30页 |
| ·酚酸脱羧酶 (BLPAD)酶解产物的测定 | 第30页 |
| ·酚酸脱羧酶 (BLPAD)酶活的测定 | 第30-31页 |
| ·各物质标准曲线的制作 | 第31页 |
| ·目的蛋白表达条件的优化 | 第31-32页 |
| ·重组BLPAD酶学性质的测定 | 第32-34页 |
| ·结果与分析 | 第34-42页 |
| ·各底物降解产物的HPLC图谱 | 第34-35页 |
| ·各底物降解产物的GC/MS分析 | 第35-36页 |
| ·底物及产物的标准曲线绘制 | 第36页 |
| ·目的蛋白表达条件的优化 | 第36-38页 |
| ·重组BLPAD酶学性质的测定 | 第38-42页 |
| ·小结 | 第42-43页 |
| 第四章 重组BLPAD两相体系催化生产 4-乙烯基酚类物质研究 | 第43-52页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·菌种 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43页 |
| ·培养基 | 第43页 |
| ·实验仪器 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-45页 |
| ·底物及产物在不同有机溶剂与水相间的分配系数 | 第43-44页 |
| ·各种有机溶剂对BLPAD酶活的影响 | 第44页 |
| ·各种有机溶剂对BLPAD稳定性的影响 | 第44页 |
| ·BLPAD对酚酸类物质的生物转化 | 第44页 |
| ·重组BLPAD的Ni-NTA Agarose材料固定化 | 第44-45页 |
| ·固定化酶Ni-NTA-BLPAD的单双相体系降解 | 第45页 |
| ·不同浓度底物下固定化酶Ni-NTA-BLPAD的重复利用 | 第45页 |
| ·结果与分析 | 第45-51页 |
| ·各物质在不同有机溶剂与水相间的分配系数 | 第45-46页 |
| ·各种有机溶剂对BLPAD酶活的影响 | 第46-47页 |
| ·各种有机溶剂对BLPAD稳定性的影响 | 第47-48页 |
| ·BLPAD单双相体系对酚酸类物质生物转化的对比 | 第48页 |
| ·BLPAD双相体系下对高浓度酚酸类物质的生物转化 | 第48-49页 |
| ·Ni-NTA Agarose材料固定化酶量 | 第49页 |
| ·固定化酶Ni-NTA-BLPAD的单双相体系降解结果 | 第49页 |
| ·固定化酶Ni-NTA-BLPAD的重复利用试验 | 第49-51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 第五章 两相体系下重组BLPAD分子毒性研究 | 第52-56页 |
| ·实验材料 | 第52页 |
| ·菌种 | 第52页 |
| ·试剂 | 第52页 |
| ·培养基 | 第52页 |
| ·实验仪器 | 第52页 |
| ·实验方法 | 第52-53页 |
| ·高浓度底物对BLPAD的抑制作用 | 第52页 |
| ·高浓度产物对BLPAD的抑制作用 | 第52页 |
| ·饱和产物及饱和有机溶剂对BLPAD的抑制作用 | 第52-53页 |
| ·结果与分析 | 第53-55页 |
| ·底物对BLPAD的抑制作用 | 第53页 |
| ·产物对BLPAD的抑制作用 | 第53-54页 |
| ·饱和产物及有机溶剂对BLPAD的抑制作用 | 第54-55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 总结 | 第56-57页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-61页 |
