| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 引言(第一部分) | 第13-30页 |
| 第一节 高尔基体的形态结构与功能 | 第13-15页 |
| ·高尔基体顺面膜囊结构(cis Golgi network,CGN) | 第14页 |
| ·高尔基体中间膜囊结构(medial Golgi network) | 第14页 |
| ·高尔基体反面膜囊结构(trans Golginetwork,TGN) | 第14页 |
| ·高尔基体周围大小不同的囊泡 | 第14-15页 |
| 第二节 高尔基体相关的基质蛋白 | 第15-17页 |
| 第三节 GRASP家族蛋白的发现 | 第17-18页 |
| 第四节 GRASP55和GRASP65能够形成同源二聚体 | 第18-19页 |
| 第五节 GRASP55和GRASP65在高尔基体堆叠过程中的作用 | 第19-21页 |
| 第六节 GRASP蛋白C端的SPR结构域可以被磷酸化调节 | 第21-23页 |
| 第七节 有丝分裂过程中GRASP蛋白参与高尔基体的形态学变化 | 第23-25页 |
| 第八节 BFA处理能够可逆的改变高尔基体的形态 | 第25-26页 |
| 第九节 GRASP55和GRASP65其他研究进展 | 第26-29页 |
| ·GRASP蛋白参与非常规途径下物质运输 | 第26-27页 |
| ·GRASP蛋白与细胞凋亡 | 第27-29页 |
| 第十节 本课题的主要研究内容及意义 | 第29-30页 |
| 第二章 实验材料与原理 | 第30-56页 |
| 第一节 实验材料 | 第30-35页 |
| ·实验仪器 | 第30-31页 |
| ·实验试剂 | 第31-32页 |
| ·实验室所用菌株或细胞系 | 第32页 |
| ·实验试剂配制 | 第32-35页 |
| 第二节 实验方法 | 第35-56页 |
| ·GRASP55全长与GRASP55_N215的原核表达载体构建 | 第35-38页 |
| ·重组蛋白质的表达系统简介 | 第38-40页 |
| ·GRASP55蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第40-41页 |
| ·蛋白的纯化方法简介 | 第41-44页 |
| ·GRASP55蛋白的纯化 | 第44-45页 |
| ·X-射线晶体学简介(X-ray crystallography) | 第45-52页 |
| ·GRASP蛋白的定点突变 | 第52-53页 |
| ·细胞学实验 | 第53-54页 |
| ·EGS-Crosslink化学交联实验 | 第54页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第54-55页 |
| ·Western Blotting分析 | 第55-56页 |
| 第三章 结果与分析 | 第56-88页 |
| 第一节 GRASP55全长的克隆与表达 | 第56-57页 |
| 第二节 GRASP55全长的二级结构预测及目的片段的截短 | 第57-59页 |
| 第三节 GRASP55_N215的克隆,表达和纯化 | 第59-61页 |
| 第四节 GRASP55_N215的晶体生长 | 第61-63页 |
| 第五节 GRASP55_N215的数据收集 | 第63-65页 |
| 第六节 GRASP55_N215的硒代甲硫氨酸置换体的晶体生长与数据处理 | 第65-69页 |
| 第七节 GRASP55_N215的结构解析 | 第69-72页 |
| 第八节 GRASP55_N215的结构及分析 | 第72-73页 |
| 第九节 GRASP55_N215与分子置换模型3RLE的比较 | 第73-74页 |
| 第十节 GRASP55_N215与GRASP65_N210的结构对比 | 第74-76页 |
| 第十一节 基于晶体结构基础的GRASP蛋白聚集因素 | 第76-85页 |
| ·GRASP domain的PDZ2-PDZ2相互作用 | 第76-79页 |
| ·GRASP蛋白C-Terminal tail内部配体的插入作用 | 第79-83页 |
| ·GRASP65_N210与GRASP_N228的聚集超速离心分析 | 第83-85页 |
| 第十二节 基于GRASP55/GRASP65的高尔基体堆叠模型 | 第85-88页 |
| 第四章 引言(第二部分) | 第88-103页 |
| 第一节 细胞生命活动中的内吞作用 | 第88-89页 |
| 第二节 有被小泡介导的细胞内物质运输 | 第89-91页 |
| 第三节 囊泡运输中的一些关键因子 | 第91-92页 |
| 第四节 囊泡运输中的衔接蛋白复合物 | 第92-94页 |
| 第五节 SGIP1在内吞过程中的作用 | 第94-99页 |
| ·SGIP1参与组织细胞能量代谢平衡 | 第94-95页 |
| ·SGIP1能与内质网分子伴侣Calnexin相互作用 | 第95-96页 |
| ·SGIP1能与EPS15相互作用 | 第96-97页 |
| ·SGIP1能与ITSN1相互作用 | 第97-98页 |
| ·SGIP1的旁系同源蛋白Fcho1研究现状 | 第98-99页 |
| 第六节 μHD domain相关研究进展 | 第99-102页 |
| ·AP-2 Complex中μ2亚基的结构生物学研究 | 第99-100页 |
| ·酵母同源蛋白Syp1的μHD domain结构生物学研究 | 第100-102页 |
| 第七节 本实验研究内容及意义 | 第102-103页 |
| 第五章 实验材料和方法 | 第103-109页 |
| 第一节 SGIP1基因的分子克隆 | 第103-105页 |
| ·SGIP1基因全长cDNA的获取 | 第103-104页 |
| ·体外DNA片段的PCR扩增、连接及转化 | 第104-105页 |
| 第二节 SGIP1目的蛋白表达、纯化及晶体生长 | 第105页 |
| 第三节 硒代甲硫氨酸标记的SGIP1蛋白的表达与纯化 | 第105-106页 |
| 第四节 反常散射法寻找相位 | 第106-107页 |
| 第五节 分析型超速离心实验 | 第107页 |
| 第六节 激光扫描共聚焦实验 | 第107-109页 |
| 第六章 结果与分析 | 第109-129页 |
| 第一节 μHD domain的二级结构预测及克隆 | 第109-110页 |
| 第二节 SGIP1 μHD domain的表达纯化 | 第110-112页 |
| 第三节 晶体生长及数据收集 | 第112-115页 |
| 第四节 SGIP1 μHD domain硒代甲硫氨酸置换体的表达纯化、晶体生长及数据收集 | 第115-119页 |
| 第五节 SGIP1 μHD domain的结构解析 | 第119-123页 |
| 第六节 SGIP1 μHD domain的结构分析 | 第123-126页 |
| ·SGIP1 μHD domain与Syp1 μHD domain的结构比较 | 第124页 |
| ·SGIP1 μHD domain与AP-2 Complex中μ2亚基的结构比较 | 第124-126页 |
| 第七节 SGIP1在溶液中的聚集状态分析 | 第126-127页 |
| 第八节 SGIP1在细胞内的定位 | 第127-129页 |
| 第七章 结论 | 第129-131页 |
| 第一部分 结论 | 第129-130页 |
| 第二部分 结论 | 第130-131页 |
| 参考文献 | 第131-139页 |
| 致谢 | 第139页 |
