红掌漆酶基因Lac的表达载体构建与剑麻的遗传转化
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-18页 |
| ·剑麻的研究进展 | 第10-12页 |
| ·剑麻生产概况 | 第10页 |
| ·剑麻的综合利用 | 第10-11页 |
| ·剑麻的病虫害 | 第11-12页 |
| ·植物基因工程技术 | 第12-13页 |
| ·现代生物技术在剑麻育种中的应用 | 第13-15页 |
| ·组织培养 | 第13-14页 |
| ·种质资源 | 第14页 |
| ·剑麻种质资源概况 | 第14页 |
| ·剑麻种质资源的研究概况 | 第14页 |
| ·遗传转化 | 第14-15页 |
| ·pBI121-Lac转化剑麻 | 第15-16页 |
| ·Lac基因 | 第15页 |
| ·GUS基因 | 第15-16页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| ·本研究的技术路线 | 第17-18页 |
| 2 剑麻组织培养体系的优化 | 第18-23页 |
| ·材料 | 第18-19页 |
| ·植物材料 | 第18页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第18页 |
| ·基本培养基 | 第18-19页 |
| ·方法 | 第19-20页 |
| ·愈伤组织诱导培养基的优化 | 第19页 |
| ·愈伤组织诱导出芽培养基的优化 | 第19-20页 |
| ·结果与分析 | 第20-23页 |
| ·愈伤组织诱导培养基的优化 | 第20-22页 |
| ·愈伤组织诱导出芽培养基的优化 | 第22-23页 |
| 3 剑麻遗传转化体系的因子优化 | 第23-28页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·主要试剂配制 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-25页 |
| ·农杆菌介导的剑麻转化方法 | 第23-24页 |
| ·潮霉素(Hyg)基础抗性测定 | 第24页 |
| ·菌液浓度对转化的影响 | 第24页 |
| ·侵染时间对转化的影响 | 第24页 |
| ·乙酰丁香酮(As)的浓度对转化的影响 | 第24页 |
| ·羧苄青霉素(Car)浓度对诱导愈伤的影响 | 第24页 |
| ·GUS组织化学染色 | 第24-25页 |
| ·结果与分析 | 第25-28页 |
| ·潮霉素(Hyg)基础抗性测定 | 第25页 |
| ·菌液浓度对转化的影响 | 第25-26页 |
| ·侵染时间对转化的影响 | 第26页 |
| ·乙酰丁香酮的浓度对转化的影响 | 第26-27页 |
| ·羧苄青霉素(Car)浓度对诱导愈伤的影响 | 第27页 |
| ·GUS组织化学染色 | 第27-28页 |
| 4 漆酶基因cDNA的获得与酶切位点的添加 | 第28-39页 |
| ·材料 | 第28-30页 |
| ·植物材料 | 第28页 |
| ·菌株和载体 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·试剂盒 | 第28页 |
| ·内切酶 | 第28页 |
| ·引物 | 第28-29页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-36页 |
| ·红掌RNA的提取 | 第30页 |
| ·红掌cDNA的获得 | 第30-31页 |
| ·漆酶cDNA全长的PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·漆酶cDNA酶切位点的添加及目的片段的回收 | 第32-33页 |
| ·漆酶cDNA酶切位点的添加 | 第32-33页 |
| ·目的片段的回收 | 第33页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第33-34页 |
| ·连接转化 | 第34页 |
| ·菌落PCR | 第34-35页 |
| ·质粒pT-Lac的提取与酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·质粒pT-Lac的提取 | 第35-36页 |
| ·质粒pT-Lac的双酶切 | 第36页 |
| ·结果与分析 | 第36-39页 |
| ·漆酶cDNA全长的PCR扩增 | 第36页 |
| ·漆酶cDNA酶切位点的添加与目的片段的回收 | 第36-37页 |
| ·菌落PCR结果 | 第37-38页 |
| ·质粒pT-Lac的提取与酶切鉴定 | 第38-39页 |
| 5 表达载体pBI121-Lac的构建 | 第39-45页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·菌株 | 第39页 |
| ·培养基 | 第39页 |
| ·内切酶及连接酶 | 第39页 |
| ·主要试剂配制 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-43页 |
| ·质粒pBI121的提取 | 第39-40页 |
| ·质粒pBI121的SacⅠ和XbaⅠ双酶切 | 第40页 |
| ·表达载体pBI121-Lac的构建 | 第40-43页 |
| ·质粒pT-Lac与pBI121连接转化 | 第41页 |
| ·重组子鉴定 | 第41-42页 |
| ·质粒pBI121-Lac的提取与酶切鉴定 | 第42页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第42-43页 |
| ·农杆菌转化 | 第43页 |
| ·菌落PCR | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-45页 |
| ·质粒pT-Lac与pBI121的双酶切 | 第43-44页 |
| ·质粒pBI121-Lac的提取与酶切鉴定 | 第44-45页 |
| 6 剑麻的遗传转化 | 第45-53页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第45-49页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·植物材料 | 第45页 |
| ·试剂 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-46页 |
| ·剑麻基因组DNA的提取 | 第45页 |
| ·PCR检测 | 第45-46页 |
| ·目的片段的回收 | 第46页 |
| ·连接转化 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-49页 |
| ·剑麻的遗传转化过程 | 第46-47页 |
| ·转基因剑麻的PCR检测 | 第47-49页 |
| ·转基因植株的RT-PCR检测及形态变化 | 第49-53页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·试剂盒 | 第49页 |
| ·引物 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-50页 |
| ·剑麻RNA的提取 | 第49页 |
| ·1st-Strand cDNA的合成 | 第49-50页 |
| ·反转录产物检测 | 第50页 |
| ·目的基因的PCR检测 | 第50页 |
| ·结果与分析 | 第50-53页 |
| ·剑麻RNA提取 | 第50-51页 |
| ·cDNA的质量检测 | 第51-52页 |
| ·反转录产物的检测 | 第52页 |
| ·反转录产物的检测 | 第52-53页 |
| 7 讨论 | 第53-56页 |
| ·继代次数对剑麻增殖的影响 | 第53-54页 |
| ·影响遗传转化的因素 | 第54页 |
| ·乙酰丁香酮(As)对基因转化的影响 | 第54页 |
| ·农杆菌菌株对基因转化的影响 | 第54页 |
| ·瞬时表达与稳定表达 | 第54-55页 |
| ·漆酶的研究 | 第55-56页 |
| 8 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
