| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-14页 |
| 符号说明 | 第14-15页 |
| 第一部分 棉铃虫功能基因重组病毒杀虫剂研究 | 第15-73页 |
| 第一章 综述:昆虫杆状病毒研究进展 | 第15-25页 |
| 1 杆状病毒的类型存在形式、结构及感染宿主后的传播过程 | 第15-17页 |
| 2 杆状病毒表达系统的研究 | 第17-22页 |
| 3 重组杆状病毒生物杀虫剂 | 第22-25页 |
| 第二章 棉铃虫激素接受子3基因重组病毒杀虫剂研究 | 第25-46页 |
| 1 前言 | 第25-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-37页 |
| ·材料 | 第27-29页 |
| ·实验用品、仪器 | 第27-28页 |
| ·昆虫和病毒 | 第28页 |
| ·试剂 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-37页 |
| ·重组表达载体Bacmid-GFP-HHR3-Polh~+的构建 | 第29-30页 |
| ·Bacmid-GFP-HHR3-Polh~+转染Sf21细胞 | 第30-32页 |
| ·重组病毒感染体外培养的Sf21细胞 | 第32页 |
| ·重组病毒在Sf21细胞中的外源基因表达检测 | 第32-34页 |
| ·重组病毒AcMNPV-GFP-HHR3-Polh~+感染棉铃虫幼虫 | 第34-35页 |
| ·重组病毒感染棉铃虫幼虫后外源基因的表达检测 | 第35-36页 |
| ·重组病毒AcMNPV-GFP-HHR3-Polh~+杀虫生物活性检测 | 第36-37页 |
| 3 结果 | 第37-44页 |
| ·重组表达载体构建和验证 | 第37-38页 |
| ·重组病毒感染Sf21细胞后外源基因的重组表达 | 第38-41页 |
| ·重组病毒感染棉铃虫幼虫后外源基因的重组表达 | 第41-42页 |
| ·重组病毒杀虫效果 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 棉铃虫组织蛋白酶B(HCB)基因重组病毒杀虫剂研究 | 第46-64页 |
| 前言 | 第46-47页 |
| 第一节 HCB在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中的试表达 | 第47-53页 |
| 1 材料 | 第47页 |
| 2 方法 | 第47-49页 |
| ·重组表达载体转染Sf21细胞 | 第47页 |
| ·转染上清液感染Sf21细胞 | 第47页 |
| ·Sf21细胞中的HCB基因的重组表达检测 | 第47-49页 |
| 3 结果与讨论 | 第49-53页 |
| ·重组表达载体的外源基因插入位置 | 第49页 |
| ·PCR鉴定重组病毒基因组中的HCB目的基因 | 第49-50页 |
| ·SDS-PAGE检测HCB的表达 | 第50页 |
| ·免疫印迹结果 | 第50-51页 |
| ·蛋白酶活性检测 | 第51-53页 |
| 第二节 棉铃虫组织蛋白酶B基因重组病毒杀虫剂研究 | 第53-64页 |
| 1 材料 | 第53页 |
| 2 方法 | 第53-55页 |
| ·重组表达载体Bacmid-GFP-HCB-Polh~+的构建 | 第53页 |
| ·Bacmid-GFP-HCB-Polh~+转染Sf21细胞、转染液感染Sf21细胞 | 第53页 |
| ·重组病毒感染的Sf21细胞中外源基因的表达检测 | 第53-54页 |
| ·重组病毒AcMNPV-HCB-GFP-Polh~+感染棉铃虫幼虫 | 第54页 |
| ·重组病毒感染棉铃虫幼虫后外源基因的表达检测 | 第54-55页 |
| ·重组病毒杀虫生物活性检测 | 第55页 |
| 3 结果 | 第55-61页 |
| ·重组表达载体构建结果和验证 | 第55-56页 |
| ·Sf21感染细胞内GFP和polyhedrin的重组表达 | 第56-57页 |
| ·Sf21感染细胞内HCB的表达 | 第57-59页 |
| ·重组病毒感染棉铃虫幼虫外源基因的表达 | 第59-60页 |
| ·重组病毒杀虫效果 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-64页 |
| 参考文献 | 第64-73页 |
| 第二部分 棉铃虫表皮、精巢、卵巢细胞系建立 | 第73-109页 |
| 第一章 综述:昆虫细胞培养研究进展 | 第73-83页 |
| 1 体外培养、细胞系的概念及细胞系的鉴定 | 第73-74页 |
| 2 昆虫细胞培养基的发展和国内外建立昆虫细胞系的情况 | 第74-76页 |
| 3 昆虫细胞系的应用 | 第76-81页 |
| 4 棉铃虫细胞系的建立及研究意义 | 第81-83页 |
| 第二章 棉铃虫表皮细胞系的建立 | 第83-94页 |
| 1 材料 | 第83页 |
| 2 方法 | 第83-86页 |
| ·棉铃虫表皮细胞原代培养 | 第83-84页 |
| ·传代培养 | 第84页 |
| ·细胞的冻存 | 第84页 |
| ·细胞的复苏 | 第84页 |
| ·细胞生长曲线和群体倍增时间的测定 | 第84-85页 |
| ·染色体分析 | 第85页 |
| ·病毒敏感性检测 | 第85页 |
| ·同工酶检测 | 第85-86页 |
| ·细胞克隆化培养 | 第86页 |
| 3 结果 | 第86-91页 |
| ·棉铃虫表皮细胞系SDU-Ha-Epi的形成 | 第86-87页 |
| ·细胞的保存、复苏 | 第87-88页 |
| ·细胞生长规律和群体倍增时间 | 第88页 |
| ·染色体分析 | 第88-89页 |
| ·病毒敏感性 | 第89-91页 |
| ·同工酶检测结果 | 第91页 |
| ·细胞克隆化培养 | 第91页 |
| 4 讨论 | 第91-94页 |
| 第三章 棉铃虫精巢及卵巢细胞系建立 | 第94-103页 |
| 1 材料 | 第94页 |
| 2 方法 | 第94-96页 |
| ·原代培养方法 | 第94-95页 |
| ·传代培养 | 第95页 |
| ·细胞冻存和复苏 | 第95页 |
| ·精巢细胞系细胞生长曲线和群体倍增时间的测定 | 第95页 |
| ·精巢细胞系染色体分析 | 第95页 |
| ·精巢细胞系病毒敏感性检测 | 第95-96页 |
| ·精巢细胞系细胞克隆化培养 | 第96页 |
| 3 结果 | 第96-100页 |
| ·棉铃虫精巢细胞系SDU-Ha-Spe的形成 | 第96页 |
| ·精巢细胞系细胞的保存、复苏 | 第96-97页 |
| ·精巢细胞系细胞生长规律和群体倍增时间 | 第97-98页 |
| ·精巢细胞系染色体分析 | 第98页 |
| ·精巢细胞系病毒敏感性 | 第98-99页 |
| ·精巢细胞系细胞克隆化培养 | 第99-100页 |
| ·棉铃虫卵巢细胞系SDU-Ha-Ova的建立 | 第100页 |
| 4 讨论 | 第100-103页 |
| 参考文献 | 第103-109页 |
| 全文总结 | 第109-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 已发表和拟发表的学术论文 | 第112-113页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第113页 |
