| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-27页 |
| ·植物中的参与渗透逆境胁迫响应的信号路径 | 第13-15页 |
| ·植物抗病信号路径 | 第15-19页 |
| ·MAPKs参与植物抗逆和抗病反应 | 第19-25页 |
| ·植物中的MAPK-s及分类 | 第19-20页 |
| ·MAPKs与植物非生物胁迫 | 第20-22页 |
| ·MAPKs与植物抗病 | 第22-24页 |
| ·棉花中的MAPK基因 | 第24-25页 |
| ·本课题研究的意义的目的 | 第25-27页 |
| 2 材料方法 | 第27-36页 |
| ·实验材料 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-36页 |
| ·植物基因组DNA及RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·RACE技术扩增GbMPK3的cDNA序列 | 第28页 |
| ·GbMPK3全长cDNA和DNA序列的克隆及分析 | 第28页 |
| ·Southern/Northern杂交 | 第28-29页 |
| ·融合表达载体构建及烟草瞬时转化 | 第29页 |
| ·GbMPK3启动子序列克隆及顺式作用元件分析 | 第29-30页 |
| ·GbMPK3表达模式分析 | 第30页 |
| ·RT-PCR和qPCR | 第30-31页 |
| ·RNA干涉、超表达和VIGS载体构建及受体植物遗传转化 | 第31-32页 |
| ·转基因烟草非生物逆境胁迫处理 | 第32-33页 |
| ·DAB染色,过氧化氢含量和APX酶活测定 | 第33页 |
| ·叶绿素含量测定 | 第33-34页 |
| ·转基因烟草和棉花生物胁迫处理 | 第34-35页 |
| ·病情指数、发病率统计 | 第35页 |
| ·病植剖杆和病原菌恢复培养 | 第35-36页 |
| 3 实验结果与分析 | 第36-61页 |
| ·GbMPK3基因的克隆及序列分析 | 第36-40页 |
| ·GbMPK3的亚细胞定位 | 第40-41页 |
| ·GbMPK3基因的启动子元件及表达模式分析 | 第41-46页 |
| ·GbMPK3基因的启动子克隆分析 | 第41-43页 |
| ·GbMPK3的组织表达模式分析 | 第43页 |
| ·GbMPK3在生物和非生物胁迫下的表达模式分析 | 第43-46页 |
| ·超表达、干涉和VIGS载体及转基因植株的构建 | 第46-47页 |
| ·超表达、干涉和VIGS载体构建 | 第46-47页 |
| ·烟草转基因材料的构建 | 第47页 |
| ·棉花转基因材料的构建 | 第47页 |
| ·GbMPK3基因参与植物对抗非生物胁迫 | 第47-52页 |
| ·在烟草中超量表达GbMPK3增强了烟草对干旱的抗性 | 第47-50页 |
| ·GbMPK3转基因烟草在干旱胁迫下ROS的清除能力增强 | 第50页 |
| ·在烟草中超量表达GbMPK3增强了烟草对氧化胁迫的抗性 | 第50-52页 |
| ·GbMPK3基因影响植物对病原菌的抗性 | 第52-61页 |
| ·GbMPK3超量表达影响烟草对烟草花叶病毒和灰霉病菌的抗性 | 第52-54页 |
| ·GbMPK3超量表达转基因烟草对黄萎病菌抗性降低 | 第54-55页 |
| ·GbMPK3负调控棉花对黄萎病菌的抗性 | 第55-56页 |
| ·GbMPK3影响棉花在黄萎病菌侵染下SA相关抗病基因的表达 | 第56-58页 |
| ·VIGS技术干涉GbMPK3对棉花抗黄萎病菌的影响 | 第58-61页 |
| 4 讨论 | 第61-68页 |
| ·GbMPK3属于A组MAPK基因,参与棉花对逆境的响应 | 第61-63页 |
| ·GbMPK3超表达可能通过调控APX增加烟草抗旱性 | 第63-64页 |
| ·GbMPK3影响烟草和棉花对黄萎病菌的抗性 | 第64-65页 |
| ·GbMPK3影响黄萎病菌侵染下棉花SA相关基因的表达 | 第65-68页 |
| 参考文献 | 第68-83页 |
| 附录 | 第83-98页 |
| 附录1. 植物总RNA提取方法 | 第83-85页 |
| 附录2. 植物DNA提取方法 | 第85-86页 |
| 附录3. RACE技术扩增基因5’-和3’-UTR | 第86-88页 |
| 附录4. TA克隆、热激转化和电击转化 | 第88-89页 |
| 附录5. PCR扩增反应体系及步骤 | 第89-90页 |
| 附录6. Southern/Northern杂交操作步骤 | 第90-94页 |
| 附录7. BP/LR反应 | 第94-95页 |
| 附录8. 烟草瞬时转化 | 第95-96页 |
| 附录9. RNA反转录 | 第96-97页 |
| 附录10. 磷酸缓冲液和DAB染液的配制 | 第97-98页 |
| 附表1. 引物序列 | 第98-100页 |
| 附表2. 用于GbMPK3序列比对的蛋白序列 | 第100-101页 |
| 攻读学位期间已发表和待发表论文 | 第101-102页 |
| 国家专利 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
