| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 英文缩略表 | 第11-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-22页 |
| ·口蹄疫与口蹄疫病毒 | 第13页 |
| ·蹄疫疫苗研究进展 | 第13-20页 |
| ·传统疫苗 | 第13-14页 |
| ·弱毒疫苗 | 第13-14页 |
| ·灭活疫苗 | 第14页 |
| ·新型基因工程疫苗 | 第14-20页 |
| ·合成肽疫苗 | 第14-15页 |
| ·病毒空衣壳疫苗 | 第15-16页 |
| ·可饲疫苗 | 第16页 |
| ·DNA疫苗 | 第16-17页 |
| ·活载体疫苗 | 第17-18页 |
| ·重组蛋白亚单位疫苗 | 第18-20页 |
| ·细胞因子免疫佐剂 | 第20页 |
| ·总结与展望 | 第20-22页 |
| 第二章 牛IL-2基因的表达、纯化与抗体制备 | 第22-33页 |
| ·试验材料 | 第22页 |
| ·载体与动物 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·试验方法 | 第22-29页 |
| ·引物的设计与合成 | 第22-23页 |
| ·牛IL-2基因的克隆 | 第23-25页 |
| ·牛IL-2基因原核表达载体的构建及鉴定 | 第25-27页 |
| ·牛IL-2基因的诱导表达 | 第27-28页 |
| ·牛IL-2重组蛋白的大量表达与纯化 | 第28页 |
| ·重组蛋白IL-2豚鼠抗血清制备 | 第28-29页 |
| ·试验结果 | 第29-32页 |
| ·牛IL-2基因的RT-PCR | 第29页 |
| ·牛IL-2基因的克隆及鉴定 | 第29-30页 |
| ·牛IL-2基因原核表达载体的构建及鉴定 | 第30页 |
| ·牛IL-2基因的诱导表达 | 第30-31页 |
| ·牛IL-2重组蛋白的大量表达与纯化 | 第31页 |
| ·重组蛋白IL-2豚鼠抗血清制备 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 A型口蹄疫病毒多抗原表位真核表达载体的构建与表达 | 第33-54页 |
| ·试验材料 | 第33-34页 |
| ·质粒、细胞及菌株 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33-34页 |
| ·试验方法 | 第34-44页 |
| ·A型口蹄疫病毒多抗原表位基因B的设计 | 第34页 |
| ·克隆重组质粒pUC57-BIL2的构建及鉴定 | 第34-36页 |
| ·重组质粒pFastBac~(TM)HTB-B与pFastBac~(TM)HTB-BIL2的构建及鉴定 | 第36-38页 |
| ·E.coli DH10 Bac感受态制备 | 第38-39页 |
| ·重组质粒转化至E.coli DH10 Bac感受态细胞 | 第39页 |
| ·重组杆状病毒质粒的提取 | 第39-40页 |
| ·重组杆状病毒质粒的PCR鉴定 | 第40页 |
| ·Sf9细胞的复苏与培养 | 第40-41页 |
| ·重组杆状病毒质粒转染Sf9细胞 | 第41页 |
| ·重组杆状病毒的收获与扩增 | 第41页 |
| ·重组杆状病毒滴度的测定 | 第41-42页 |
| ·目的蛋白的表达与检测 | 第42-43页 |
| ·目的蛋白的表达条件的优化 | 第43页 |
| ·目的蛋白的大量表达 | 第43页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第43-44页 |
| ·试验结果 | 第44-52页 |
| ·QIL2目的基因的扩增 | 第44页 |
| ·克隆重组质粒pUC57-BIL2的构建及鉴定 | 第44-45页 |
| ·A型口蹄疫病毒多抗原表位基因B序列分析 | 第45页 |
| ·目的基因pB与pBIL2的扩增 | 第45页 |
| ·重组质粒pFastBac~(TM)HTB-B与pFastBac~(TM)HTB-BIL2的构建及鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组杆状病毒质粒Bacmid-HTB-B与Bacmid-HTB-BIL2的PCR鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组杆状病毒质粒转染Sf9细胞 | 第47页 |
| ·重组杆状病毒滴度的测定 | 第47-48页 |
| ·目的蛋白的表达与检测 | 第48-50页 |
| ·目的蛋白的表达条件的优化 | 第50-51页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| 第四章 A型口蹄疫病毒多抗原表位重组蛋白的免疫原性分析 | 第54-64页 |
| ·试验材料 | 第54页 |
| ·病毒、细胞及动物 | 第54页 |
| ·主要试剂 | 第54页 |
| ·主要仪器 | 第54页 |
| ·试验方法 | 第54-57页 |
| ·疫苗的制备 | 第54-55页 |
| ·动物分组与免疫策略 | 第55页 |
| ·抗口蹄疫病毒特异性血清抗体检测 | 第55页 |
| ·微量中和抗体检测 | 第55-56页 |
| ·IgG亚群及细胞因子的检测 | 第56页 |
| ·外周血T淋巴细胞CD4-CD8亚群分化 | 第56-57页 |
| ·脾脏淋巴细胞增值试验 | 第57页 |
| ·动物保护性试验 | 第57页 |
| ·试验结果 | 第57-62页 |
| ·抗口蹄疫病毒特异性血清抗体水平 | 第57-58页 |
| ·中和抗体的测定 | 第58-59页 |
| ·IgG亚群及细胞因子的检测 | 第59-60页 |
| ·外周血T淋巴细胞CD4-CD8亚群分化 | 第60-61页 |
| ·脾脏淋巴细胞增值能力 | 第61-62页 |
| ·动物保护性试验 | 第62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 第五章 全文结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 附录 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 作者简历 | 第73页 |
