| 缩写词 | 第1-12页 |
| 摘要 | 第12-15页 |
| Abstract | 第15-19页 |
| 第一章 引言 | 第19-29页 |
| 1 古树名木的景观价值及保护研究 | 第19-21页 |
| ·古树名木的景观价值 | 第20页 |
| ·古树名木保护现状 | 第20-21页 |
| 2 植物种质资源保存 | 第21-23页 |
| ·植物种质资源保存研究进展 | 第21-22页 |
| ·荔枝种质资源保存的研究进展 | 第22-23页 |
| 3 植物体胚发生的研究进展 | 第23-24页 |
| 4 植物启动子研究进展 | 第24-25页 |
| 5 植物SOD研究进展 | 第25-27页 |
| 6 本试验研究的意义与内容 | 第27-29页 |
| ·本试验研究的意义 | 第27-28页 |
| ·本试验研究的内容 | 第28-29页 |
| 第二章 荔枝古树EC体胚发生及离体保存优化研究 | 第29-46页 |
| 第一节 荔枝古树EC体胚发生优化研究 | 第29-35页 |
| 1 材料与方法 | 第29-31页 |
| ·材料 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30页 |
| ·荔枝古树EC体胚诱导优化 | 第30页 |
| ·荔枝古树体胚成熟与萌发 | 第30页 |
| ·数据处理 | 第30-31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-34页 |
| ·荔枝古树EC体胚诱导优化 | 第31-34页 |
| ·荔枝古树体胚成熟与萌发 | 第34页 |
| 3 讨论 | 第34-35页 |
| ·ZT、NAA、KT对荔枝古树体胚发生作用 | 第34-35页 |
| ·荔枝古树EC体胚发生同步化优化的可能性 | 第35页 |
| 第二节 荔枝古树EC的离体保存优化研究 | 第35-46页 |
| 1 材料与方法 | 第35-37页 |
| ·材料 | 第35-36页 |
| ·方法 | 第36-37页 |
| ·试验设计 | 第36页 |
| ·TTC测细胞活力 | 第36-37页 |
| ·数据处理 | 第37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-44页 |
| ·不同处理下荔枝古树EC离体保存后EC生长情况分析 | 第37页 |
| ·不同处理对荔枝古树EC离体保存后EC细胞活性的分析 | 第37-40页 |
| ·不同处理对荔枝古树EC离体保存过程中EC生长量的分析 | 第40-44页 |
| 3 讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 荔枝古树EC SOD基因和基因组的克隆及生物信息学分析 | 第46-64页 |
| 1 材料与方法 | 第46-48页 |
| ·供试材料 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-48页 |
| ·总RNA和DNA的提取及模板的合成 | 第46-47页 |
| ·引物的设计合成 | 第47-48页 |
| ·目的片段扩增 | 第48页 |
| ·目的片段的回收、克隆和测序 | 第48页 |
| ·生物信息学分析 | 第48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-61页 |
| ·荔枝古树EC SOD家族基因cDNA全长和DNA序列克隆 | 第48-53页 |
| ·荔枝古树EC LcFe-SOD7基因cDNA全长和DNA序列克隆 | 第48-50页 |
| ·荔枝古树EC LcCu/Zn-SOD3基因cDNA全长和DNA序列克隆 | 第50-51页 |
| ·荔枝古树EC LcCu/Zn-SOD4基因cDNA和DNA序列克隆 | 第51-52页 |
| ·荔枝古树EC LcMn-SOD基因组DNA序列克隆 | 第52-53页 |
| ·荔枝古树EC LcFe-SOD1基因组DNA序列克隆 | 第53页 |
| ·荔枝EC LcSODs家族基因成员的生物信息学分析 | 第53-59页 |
| ·荔枝EC LcSODs蛋白的理化性质分析 | 第53-54页 |
| ·荔枝EC LcSODs蛋白的信号肽、定位和跨膜分析 | 第54-56页 |
| ·荔枝EC LcSODs蛋白的磷酸化位点分析 | 第56-57页 |
| ·荔枝EC LcSODs蛋白结构特征分析 | 第57-59页 |
| ·荔枝古树EC LcSODs基因编码的蛋白质同源性和聚类分析 | 第59-61页 |
| 3 讨论 | 第61-64页 |
| ·荔枝古树EC LcSODs基因家族完整性克隆分析 | 第61-62页 |
| ·生物信息学初步推测荔枝古树EC LcSODs基因的潜在功能分析 | 第62-63页 |
| ·荔枝古树EC LcSODs基因的可变剪接现象分析 | 第63-64页 |
| 第四章 荔枝古树EC SOD基因家族启动子的克隆及顺式元件分析 | 第64-86页 |
| 1 材料与方法 | 第64-66页 |
| ·材料 | 第64页 |
| ·主要试剂 | 第64页 |
| ·方法 | 第64-66页 |
| ·TaKaRa的Tail-PCR法和Clonetech的酶切接头法 | 第64-66页 |
| ·目的片段的回收、克隆和测序 | 第66页 |
| ·生物信息学分析 | 第66页 |
| 2 结果与分析 | 第66-81页 |
| ·荔枝古树LcSODs基因家族启动子PCR扩增 | 第66-71页 |
| ·Tail-PCR法获得LcCSD4、LcFSD和LcMSD基因5’端调控序列 | 第66-67页 |
| ·酶切接头法获得LcCSD3、LcFSD7和LcMSD基因5’端调控序列 | 第67-71页 |
| ·荔枝古树EC LcSODs基因家族上游序列顺式元件的功能预测 | 第71-81页 |
| ·荔枝古树LcSODs基因不同成员5’侧翼序列中均富含光反应元件 | 第72-74页 |
| ·荔枝古树LcSODs基因5’端侧翼序列含有多个激素响应元件 | 第74-75页 |
| ·荔枝古树LcSODs基因5’端侧翼序列响应多种逆境应答元件 | 第75-76页 |
| ·荔枝古树LcSODs基因5’端侧翼序列含有胚乳表达响应元件 | 第76页 |
| ·荔枝古树LcSODs基因5’端侧翼序列响应细胞周期元件 | 第76页 |
| ·荔枝古树LcSODs基因5’端侧翼序列含有大量功能未知或功能特异顺式元件 | 第76-81页 |
| 3 讨论 | 第81-86页 |
| ·荔枝LcSODs启动子克隆方法的选择 | 第81-82页 |
| ·荔枝古树EC在离体保存和体胚发生过程中LcSODs启动子可能的调控方式 | 第82-86页 |
| ·荔枝古树LcSODs启动子的转录活性受不同逆境环境的诱导 | 第82-83页 |
| ·荔枝古树LcSODs可能参与的激素信号转导途径 | 第83-84页 |
| ·荔枝古树LcSODs可能受MYB、WRKY和bZIP类转录因子的调控 | 第84-85页 |
| ·荔枝古树LcSODs可能存在的其他应答调控 | 第85-86页 |
| 第五章 荔枝古树EC SOD家族部分成员启动子功能验证 | 第86-98页 |
| 1 材料与试剂 | 第86页 |
| ·植物材料 | 第86页 |
| ·菌种和载体 | 第86页 |
| ·生化试剂 | 第86页 |
| 2 实验方法 | 第86-90页 |
| ·荔枝古树LcSODs启动子表达载体的构建 | 第86-87页 |
| ·重组质粒p1301-proLcSODs-GUS转化农杆菌 | 第87页 |
| ·重组质粒p1301-proLcSODs-GUS菌液注射烟草的瞬时表达分析 | 第87-88页 |
| ·重组质粒p1301-proLcSODs-GUS菌液转化拟南芥 | 第88页 |
| ·重组质粒p1301-proLcSODs-GUS转基因拟南芥筛选 | 第88页 |
| ·转基因拟南芥GUS组织化学染色分析和DNA水平检测 | 第88页 |
| ·不同株系转基因拟南芥胁迫处理 | 第88页 |
| ·GUS组织化学染色及活性检测 | 第88-90页 |
| 3 结果与分析 | 第90-94页 |
| ·启动子片段LcSODs表达载体的构建及转化农杆菌的鉴定 | 第90-92页 |
| ·重组质粒p1301-proLcSODs-GUS菌液注射烟草的瞬时表达分析 | 第92页 |
| ·重组质粒p1301-proLcSODs-GUS菌液转化拟南芥的表达分析 | 第92-94页 |
| ·转基因的拟南芥植株的GUS染色鉴定 | 第92-94页 |
| ·转基因的拟南芥植株的分子检测 | 第94页 |
| ·转基因的拟南芥植株不同胁迫处理下GUS活性分析 | 第94页 |
| 4 讨论 | 第94-98页 |
| ·荔枝古树EC SOD基因家族不同成员启动子可响应不同胁迫 | 第94-96页 |
| ·MYB和bZIP类转录因子可能参与荔枝古树SOD启动子响应胁迫诱导 | 第96页 |
| ·荔枝古树SOD启动子响应茉莉酸甲酯胁迫 | 第96-98页 |
| 第六章 5'UTR中的内含子对LcCSD4启动子功能活性影响分析 | 第98-115页 |
| 1 材料与试剂 | 第98-99页 |
| ·植物材料 | 第98页 |
| ·菌种和载体 | 第98-99页 |
| ·生化试剂 | 第99页 |
| 2 实验方法 | 第99-101页 |
| ·荔枝古树LcCu/Zn-SOD4基因组5’端调控序列分析 | 第99页 |
| ·荔枝古树proLcCu/Zn-SOD4(+intron)表达载体的构建 | 第99页 |
| ·重组质粒p1301-proLcCSD(+intron)-GUS转化农杆菌 | 第99页 |
| ·重组质粒p1301-proLcCSD(+intron)-GUS菌液注射烟草的瞬时表达分析 | 第99页 |
| ·重组质粒p1301-proLcCSD(+intron)-GUS菌液叶盘法转化烟草 | 第99-100页 |
| ·转基因烟草的DNA水平鉴定 | 第100页 |
| ·转基因烟草的转录水平及不同组织部位的RT-PCR分析 | 第100页 |
| ·转基因烟草的不同组织部位的实时荧光定量qPCR分析 | 第100页 |
| ·转基因烟草的GUS组织化学染色分析 | 第100-101页 |
| 3 结果与分析 | 第101-108页 |
| ·荔枝古树LcCu/Zn-SOD4基因组5’侧翼序列分析 | 第101-102页 |
| ·proLcCSD4(+intron)表达载体的构建及转化农杆菌的鉴定 | 第102-103页 |
| ·重组质粒p1301-proLcCSD4(+intron)-GUS菌液注射烟草的瞬时表达分析 | 第103-104页 |
| ·重组质粒p1301-proLcCSD4(+intron)-GUS菌液转化烟草表达分析 | 第104-108页 |
| ·转基因烟草植株的GUS组织化学染色鉴定 | 第104页 |
| ·转基因烟草植株的DNA水平鉴定 | 第104-105页 |
| ·转基因烟草植株的不同组织转录水平鉴定 | 第105-106页 |
| ·转基因烟草植株的不同组织部位的qPCR分析 | 第106-107页 |
| ·转基因阳性烟草植株GUS组织化学染色再分析 | 第107-108页 |
| 4 讨论 | 第108-111页 |
| 小结 | 第111-115页 |
| 参考文献 | 第115-126页 |
| 附录1 图版及图版说明 | 第126-130页 |
| 附录2 GenBank上登录的荔枝古树EC SOD基因家族的序列信息 | 第130-136页 |
| 致谢 | 第136页 |
