| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 缩略词表 | 第6-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-40页 |
| ·马铃薯Y病毒属病毒概述 | 第15-20页 |
| ·马铃薯Y病毒属病毒的特性 | 第15-16页 |
| ·马铃薯Y病毒属基因组结构与基因编码产物 | 第16页 |
| ·马铃薯Y病毒属病毒编码产物功能简介 | 第16-20页 |
| ·马铃薯Y病毒属病毒编码的VPg蛋白研究进展 | 第20-24页 |
| ·VPg蛋白的结构杂乱性 | 第20-21页 |
| ·VPg蛋白参与病毒的复制过程 | 第21-22页 |
| ·VPg蛋白参与病毒的翻译过程 | 第22页 |
| ·VPg具有核酸酶活性 | 第22-23页 |
| ·VPg影响病毒的移动 | 第23页 |
| ·与VPg互作的寄主因子 | 第23-24页 |
| ·转录延伸因子C亚基(Elongin C)研究概况 | 第24-27页 |
| ·泛素介导的蛋白质降解途径简介 | 第24页 |
| ·哺乳动物Elongin C蛋白研究进展 | 第24-26页 |
| ·酵母Elongin C蛋白的研究进展 | 第26-27页 |
| ·其它生物Elongin C蛋白的研究进展 | 第27页 |
| ·植物病毒诱导的基因沉默在单子叶植物中的研究现状 | 第27-38页 |
| ·RTBV VIGS载体的研究现状 | 第28-30页 |
| ·BSMV VIGS载体的研究现状 | 第30-33页 |
| ·BMV VIGS载体的研究现状 | 第33-36页 |
| ·单子叶植物中VIGS体系的评价和展望 | 第36-38页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第38-40页 |
| 第二章 基本实验材料与方法 | 第40-51页 |
| ·实验材料 | 第40-41页 |
| ·病毒、载体和菌种 | 第40页 |
| ·植物材料 | 第40页 |
| ·酶和生化试剂 | 第40页 |
| ·抗体 | 第40-41页 |
| ·常用溶液、试剂及培养基的配置 | 第41-42页 |
| ·基本实验方法 | 第42-51页 |
| ·植物组织总RNA的提取(TRIzol法) | 第42页 |
| ·去除总RNA中的基因组DNA | 第42页 |
| ·RNA的纯化 | 第42-43页 |
| ·反转录PCR(RT-PCR) | 第43-44页 |
| ·PCR产物的切胶回收 | 第44页 |
| ·PCR回收产物和载体的酶切及连接 | 第44-46页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第46页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第46-47页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第47-48页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第48-49页 |
| ·病毒接种 | 第49页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR | 第49-51页 |
| 第三章 SCMV VPg与ZmElc的互作验证 | 第51-59页 |
| ·材料与方法 | 第51-54页 |
| ·实验材料 | 第51页 |
| ·ZmELC基因的克隆及pGADT7-ZmELC的构建 | 第51-52页 |
| ·Y2H所需要的培养基和试剂的配制 | 第52页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第52页 |
| ·文库质粒和诱饵质粒共转化到酵母细胞 | 第52-53页 |
| ·BiFC相关载体的构建 | 第53页 |
| ·用于转化玉米原生质体的质粒的制备 | 第53-54页 |
| ·玉米原生质体分离和转化所需试剂的配制 | 第54页 |
| ·玉米原生质体的制备和转化 | 第54页 |
| ·结果与分析 | 第54-57页 |
| ·ZmELC基因的克隆 | 第54-55页 |
| ·利用Y2H验证SCMV-BJ VPg和ZmElc的互作 | 第55-56页 |
| ·利用BiFC验证SCMV-BJ VPg和ZmElc在玉米原生质体中的互作 | 第56-57页 |
| ·结论与讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 VPg与Elc互作的普遍性研究 | 第59-66页 |
| ·材料与方法 | 第59-60页 |
| ·实验材料 | 第59页 |
| ·高粱ELC(SvELC)和水稻ELC(OsELC)基因的克隆 | 第59页 |
| ·酵母双杂交相关载体的构建 | 第59页 |
| ·BiFC相关载体的构建 | 第59-60页 |
| ·结果与分析 | 第60-64页 |
| ·SvELC和OsELC基因的克隆 | 第60-61页 |
| ·利用Y2H研究SCMV VPg和Elc互作的普遍性和特异性 | 第61-62页 |
| ·利用Y2H研究ZmElc和VPg互作的普遍性和特异性 | 第62-63页 |
| ·利用BiFC在玉米原生质体中研究ZmElc和VPg互作的普遍性和特异性 | 第63-64页 |
| ·结论与讨论 | 第64-66页 |
| 第五章 ZmELC基因表达的研究 | 第66-76页 |
| ·材料与方法 | 第66-69页 |
| ·实验材料 | 第66页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR引物设计 | 第66-67页 |
| ·在玉米细胞中研究ZmElc蛋白亚细胞定位的载体的构建 | 第67页 |
| ·用基因枪将质粒DNA包被的钨颗粒轰击到玉米表皮细胞 | 第67页 |
| ·玉米原生质体中瞬时表达ZmELC基因载体的构建 | 第67-68页 |
| ·SCMV病毒粒子的粗提纯 | 第68页 |
| ·从SCMV病毒粒子中提取病毒RNA | 第68页 |
| ·SCMV的接种 | 第68-69页 |
| ·样品的采集 | 第69页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR实验的设计和数据的统计学分析 | 第69页 |
| ·结果与分析 | 第69-74页 |
| ·ZmELC基因在苗期玉米各组织的表达特异性 | 第69-70页 |
| ·ZmELC基因在开花期玉米各组织的表达特异性 | 第70页 |
| ·ZmElc蛋白的亚细胞定位 | 第70-71页 |
| ·SCMV侵染对ZmElc蛋白亚细胞定位的影响 | 第71-73页 |
| ·SCMV侵染对接种叶中ZmELC基因表达的影响 | 第73页 |
| ·SCMV侵染对第一片系统侵染叶中ZmELC基因表达的影响 | 第73-74页 |
| ·结论与讨论 | 第74-76页 |
| 第六章 瞬时过量表达ZmELC促进SCMV RNA的积累 | 第76-81页 |
| ·材料与方法 | 第76-78页 |
| ·实验材料 | 第76页 |
| ·玉米原生质体总蛋白和总RNA的提取 | 第76-77页 |
| ·Western blotting分析 | 第77页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR数据的统计学分析 | 第77-78页 |
| ·结果与分析 | 第78-79页 |
| ·原生质体转化率的计算 | 第78页 |
| ·Western blotting检测GFP和GFP-ZmElc蛋白的表达 | 第78页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR检测ZmELC基因的表达和SCMV-BJ RNA的积累 | 第78-79页 |
| ·结论与讨论 | 第79-81页 |
| 第七章 在玉米植株中瞬时沉默ZmELC抑制SCMV侵染 | 第81-90页 |
| ·材料与方法 | 第81-83页 |
| ·实验材料 | 第81页 |
| ·ZmELC BMV VIGS载体的构建 | 第81页 |
| ·玉米BMV VIGS体系 | 第81-83页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR检测ZmELC基因的沉默效率 | 第83页 |
| ·SCMV-OH VPg的克隆及其与ZmElc的互作验证 | 第83页 |
| ·对已接种BMV的玉米植株二次接种SCMV | 第83页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR检测ZmELC基因的表达和SCMV RNA的积累 | 第83页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR实验的设计和数据的统计学分析 | 第83页 |
| ·结果与分析 | 第83-88页 |
| ·对玉米中BMV VIGS体系的改进 | 第83-84页 |
| ·在玉米植株中瞬时沉默ZmELC基因 | 第84-85页 |
| ·在玉米植株中瞬时沉默ZmELC基因对SCMV-BJ系统侵染的影响 | 第85-86页 |
| ·在玉米植株中瞬时沉默ZmELC基因对SCMV-OH系统侵染的影响 | 第86-88页 |
| ·结论与讨论 | 第88-90页 |
| 第八章 SCMV侵染过程中ZmElc与ZmeIF4E相互关系的探索 | 第90-100页 |
| ·材料与方法 | 第90-91页 |
| ·玉米eIF4E和eIF(iso)4E基因的克隆 | 第90-91页 |
| ·pGADT7-ZmeIF4E和pGADT7-ZmeIF(iso)4E的构建 | 第91页 |
| ·pUC-ZmeIF4E-SPYNE和pUC-ZmeIF4E-SPYCE的构建 | 第91页 |
| ·pGBKT7-ZmELC的构建 | 第91页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR实验的设计和数据的统计学分析 | 第91页 |
| ·结果与分析 | 第91-98页 |
| ·ZmeIF4E和ZmeIF(iso)4E基因的克隆 | 第91-92页 |
| ·利用Y2H研究SCMV VPg与ZmeIF4E和/或ZmeIF(iso)4E的互作 | 第92-93页 |
| ·利用BiFC验证SCMV VPg与ZmeIF4E在玉米原生质体中的互作 | 第93-94页 |
| ·ZmElc与ZmeIF4E在SCMV侵染过程中的相互作用关系 | 第94-95页 |
| ·ZmElc与ZmeIF4E在非SCMV侵染时的相互作用关系 | 第95页 |
| ·SCMV侵染对ZmeIF4E基因表达的影响 | 第95-96页 |
| ·ZmElc与ZmeIF4E的互作研究 | 第96-98页 |
| ·结论与讨论 | 第98-100页 |
| 结论与展望 | 第100-102页 |
| 1. 主要结果与结论 | 第100页 |
| 2. 展望 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-127页 |
| 致谢 | 第127-129页 |
| 附录 引物列表 | 第129-133页 |
| 附表1 本研究中构建载体所用的引物 | 第129-131页 |
| 附表2 本研究中实时荧光定量RT-PCR所用的引物 | 第131-133页 |
| 个人简介 | 第133页 |
