| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-15页 |
| 目录 | 第15-20页 |
| 前言 | 第20-27页 |
| 第1部分 TFA异构体对人脐静脉内皮细胞生存及凋亡的影响 | 第27-49页 |
| 1 引言 | 第27页 |
| 2 实验相关材料 | 第27-30页 |
| ·实验样本 | 第27-28页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·主要实验设备 | 第28-29页 |
| ·主要试剂配制 | 第29-30页 |
| 3 主要实验方法 | 第30-36页 |
| ·原代人脐静脉内皮细胞培养和鉴定 | 第30-32页 |
| ·TFA的处理及干预方法 | 第32-34页 |
| ·台盼蓝染色检测细胞存活率 | 第34页 |
| ·四哇蓝快速比色法(MTT)检测细胞的死亡率 | 第34-35页 |
| ·Annexin Ⅴ-PI双染法检测细胞凋亡率 | 第35-36页 |
| 4 统计学分析方法 | 第36-37页 |
| 5 结果 | 第37-45页 |
| ·原代人脐静脉内皮细胞培养和鉴定结果 | 第37-39页 |
| ·台盼蓝染色检测细胞存活率 | 第39-41页 |
| ·四哇蓝快速比色法(MTT)检测细胞的死亡率 | 第41-42页 |
| ·Annexin Ⅴ-PI双染法检测细胞凋亡率 | 第42-45页 |
| 6 讨论 | 第45-48页 |
| 7 结论 | 第48-49页 |
| 第2部分 TFA异构体对人脐静脉内皮细胞NOS-NO的影响 | 第49-75页 |
| 1 前言 | 第49-50页 |
| 2 材料与方法 | 第50-54页 |
| ·实验样本 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50-51页 |
| ·主要实验设备 | 第51页 |
| ·主要试剂配制 | 第51-54页 |
| 3 主要实验方法 | 第54-64页 |
| ·实验分组 | 第54页 |
| ·细胞培养上清液NO测定 | 第54-55页 |
| ·细胞培养上清液总NOS活性测定 | 第55-56页 |
| ·细胞eNOS mRNA表达量的测定 | 第56-60页 |
| ·总RNA的提取步骤 | 第56页 |
| ·总RNA质量、纯度和浓度测定 | 第56-57页 |
| ·RNA逆转录反应 | 第57页 |
| ·普通逆转录PCR | 第57-59页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第59-60页 |
| ·细胞eNOS蛋白表达量的测定 | 第60-64页 |
| ·细胞总蛋白的提取及蛋白浓度测定 | 第60-61页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳 | 第61-64页 |
| 4 统计学分析方法 | 第64页 |
| 5 结果 | 第64-72页 |
| ·各组细胞培养上清液NO浓度结果 | 第64-65页 |
| ·NO浓度与细胞调亡率的相关性分析 | 第65-66页 |
| ·各组细胞培养上清液总NOS活性结果 | 第66-67页 |
| ·各组总RNA质量、纯度和浓度测定 | 第67页 |
| ·正常对照组逆转录PCR结果 | 第67-68页 |
| ·各组GAPDH mRNA表达情况 | 第68-69页 |
| ·各组eNOS mRNA表达量比较 | 第69-70页 |
| ·各组eNOS蛋白表达量比较 | 第70-72页 |
| 6 讨论 | 第72-74页 |
| 7 结论 | 第74-75页 |
| 第3部分 TFA异构体对人脐静脉内皮细胞PRMT/ADMA/DDAH的影响 | 第75-93页 |
| 1 前言 | 第75-76页 |
| 2 材料与方法 | 第76-77页 |
| ·实验样本 | 第76页 |
| ·主要试剂 | 第76页 |
| ·主要实验设备 | 第76页 |
| ·主要试剂配制 | 第76-77页 |
| 3 主要实验方法 | 第77-79页 |
| ·实验分组 | 第77页 |
| ·细胞培养上清液ADMA测定 | 第77-78页 |
| ·细胞培养上清液DDAH活性测定 | 第78页 |
| ·细胞PRMT Ⅰ、DDAH Ⅰ和DDAH Ⅱ mRNA表达量的测定 | 第78-79页 |
| ·细胞PRMT Ⅰ、DDAH Ⅰ和DDAH Ⅱ蛋白表达量的测定 | 第79页 |
| 4 统计学分析方法 | 第79页 |
| 5 结果 | 第79-90页 |
| ·细胞培养上清液ADMA浓度 | 第79-80页 |
| ·细胞培养上清液DDAH活性 | 第80-81页 |
| ·ADMA浓度与DDAH活性及ADMA浓度与总NOS活性的相关性分析 | 第81-82页 |
| ·正常对照组逆转录PCR结果 | 第82-83页 |
| ·各组PRMT Ⅰ、DDAH Ⅰ和DDAH ⅡmRNA表达量比较 | 第83-86页 |
| ·各组PRMT Ⅰ、DDAH Ⅰ和DDAH Ⅱ蛋白表达量比较 | 第86-90页 |
| 6 讨论 | 第90-91页 |
| 7 结论 | 第91-93页 |
| 全文总结 | 第93-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-102页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第102-103页 |
| 综述一 | 第103-110页 |
| 参考文献 | 第107-110页 |
| 综述二 | 第110-116页 |
| 参考文献 | 第115-116页 |
