| 符号说明 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-22页 |
| ·原核生物催化二硫键形成的酶系统 | 第13-14页 |
| ·真核细胞细胞器催化二硫键形成的酶学系统 | 第14-17页 |
| ·真核生物内质网内催化二硫键形成的酶学系统 | 第14-15页 |
| ·真核生物线粒体内催化二硫键形成的酶学系统 | 第15-17页 |
| ·维生素 K 环氧化物还原酶的研究 | 第17-19页 |
| ·动物维生素 K 环氧化物还原酶的研究 | 第17页 |
| ·微生物维生素 K 环氧化物还原酶的研究 | 第17-18页 |
| ·植物维生素 K 环氧化物还原酶的研究 | 第18-19页 |
| ·叶绿体内的氧化折叠的研究进展 | 第19-20页 |
| ·本实验的目的意义 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-44页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·菌株与质粒 | 第22页 |
| ·酶与各种生化试剂 | 第22-23页 |
| ·引物 | 第23页 |
| ·主要试剂的配制 | 第23-27页 |
| ·实验相关试剂溶液的配制 | 第23-26页 |
| ·CTAB 法提取植物 DNA 提取液的配制 | 第23-24页 |
| ·碱法大提质粒相关试剂的配制 | 第24页 |
| ·LeVKOR 功能鉴定相关试剂的配制 | 第24-25页 |
| ·MS 培养基母液的配制 | 第25页 |
| ·5×M63 储存液的配制 | 第25-26页 |
| ·实验所需培养基的配制 | 第26-27页 |
| ·LB 培养基 | 第26页 |
| ·MS 培养基 | 第26页 |
| ·M63 培养基 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-44页 |
| ·番茄 VKOR 基因的扩增、克隆及序列测定 | 第27-31页 |
| ·番茄 VKOR 基因的引物设计 | 第27页 |
| ·PCR 扩增 | 第27页 |
| ·PCR 扩增产物的胶回收 | 第27-28页 |
| ·胶回收产物与 pMD18-T simple 载体连接 | 第28页 |
| ·大肠杆菌感受态 DHB4 的制备 | 第28-29页 |
| ·连接产物转化 DHB4 感受态细胞 | 第29页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第29-31页 |
| ·用 RACE 方法扩增番茄全长基因 | 第31-32页 |
| ·内外侧引物的设计 | 第31页 |
| ·用 RACE 扩番茄 VKOR 3′端序列 | 第31-32页 |
| ·用全长引物扩番茄 VKOR 全长 | 第32页 |
| ·番茄 VKOR 基因生物信息学分析 | 第32-33页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·番茄 VKOR 基因全长的扩增 | 第33页 |
| ·目的片段和表达载体 pTrc99a 的双酶切 | 第33页 |
| ·目的片段与质粒酶切胶回收产物连接 | 第33-34页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第34-35页 |
| ·碱法大量提取载体 pBI121 质粒 | 第34-35页 |
| ·正义表达载体的构建 | 第35页 |
| ·反义表达载体的构建 | 第35页 |
| ·农杆菌介导的番茄遗传转化体系的建立 | 第35-37页 |
| ·根癌农杆菌 LBA4404 感受态细胞的制备与转化 | 第35-36页 |
| ·农杆菌介导的转化番茄 | 第36-37页 |
| ·转基因植株的筛选 | 第37页 |
| ·植物基因组 DNA 的提取（CTAB 法） | 第37页 |
| ·转基因植株的 PCR 筛选 | 第37页 |
| ·转基因植株 RNA 水平表达量检测 | 第37-39页 |
| ·TRIZOL 法提取植物 RNA | 第37-38页 |
| ·RNA 的反转录 | 第38页 |
| ·实时定量 PCR | 第38-39页 |
| ·转基因植株蛋白水平表达量检测 | 第39-42页 |
| ·植物类囊体蛋白的提取 | 第39-40页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第40-41页 |
| ·半干式转膜（PVDF 膜） | 第41页 |
| ·免疫检测 | 第41-42页 |
| ·ECL 发光底物 | 第42页 |
| ·H_2O_2与 O_2~—染色分析 | 第42页 |
| ·催化二硫键形成功能的方法 | 第42-44页 |
| ·Motility 方法检测 | 第42-43页 |
| ·X-gal 方法检测 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-58页 |
| ·番茄 VKOR 基因全长的克隆 | 第44-47页 |
| ·克隆 NCBI 数据库中番茄 VKOR 序列 | 第44页 |
| ·番茄 VKOR 序列分析 | 第44-45页 |
| ·RACE 扩增番茄 VKOR 3′端序列 | 第45-46页 |
| ·番茄 VKOR 基因全长克隆 | 第46页 |
| ·番茄 VKOR 基因全长序列分析 | 第46-47页 |
| ·植物 VKOR 生物信息学分析 | 第47-52页 |
| ·LeVKOR 信号肽及亚细胞定位的预测 | 第47-49页 |
| ·软件预测 LeVKOR 的信号肽及亚细胞定位 | 第47-48页 |
| ·免疫印迹实验证明 LeVKOR 定位于叶绿体的类囊体上 | 第48页 |
| ·植物 VKOR 信号肽及亚细胞定位的预测 | 第48-49页 |
| ·LeVKOR 高级结构的预测 | 第49-50页 |
| ·LeVKOR 与植物 VKOR 的氨基酸序列分析 | 第50-52页 |
| ·LeVKOR 与植物 VKOR 的进化树分析 | 第52页 |
| ·LeVKOR 基因在大肠杆菌中进行功能的研究 | 第52-53页 |
| ·LeVKOR 能够弥补大肠杆菌缺陷型菌株二硫键的形成 | 第52-53页 |
| ·LeVKOR 基因在番茄中的遗传转化 | 第53-56页 |
| ·LeVKOR 正义、反义和干涉表达载体的构建 | 第53-55页 |
| ·LeVKOR 正义表达载体的构建 | 第53页 |
| ·LeVKOR 反义表达载体的构建 | 第53-54页 |
| ·LeVKOR 干涉表达载体的构建 | 第54-55页 |
| ·LeVKOR 转基因番茄遗传转化再生体系的建立 | 第55-56页 |
| ·LeVKOR 基因在正义反义转基因番茄中表达分析 | 第56-57页 |
| ·LeVKOR 转基因植株 RNA 水平表达分析 | 第56-57页 |
| ·LeVKOR 基因在正义反义转基因番茄中活性氧积累分析 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-61页 |
| 5 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
