| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-28页 |
| ·苏云金芽胞杆菌 | 第12-17页 |
| ·苏云金芽胞杆菌生物学性质 | 第12-13页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因的分类 | 第13-14页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的表达与调控 | 第14-17页 |
| ·转录水平的调控 | 第15-16页 |
| ·转录后水平的调控 | 第16页 |
| ·翻译水平的调控 | 第16-17页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的应用 | 第17页 |
| ·苏云金芽胞杆菌菌株YBT-1520 | 第17页 |
| ·芽胞杆菌属中全局性转录因子 | 第17-23页 |
| ·CcpA(分解代谢物控制蛋白) | 第17-18页 |
| ·TnrA(氮代谢调控蛋白) | 第18-19页 |
| ·CodY(全局性调控蛋白) | 第19-23页 |
| ·CodY的结构 | 第19-20页 |
| ·CodY蛋白的效应物分子 | 第20-21页 |
| ·CodY结合热点 | 第21-22页 |
| ·CodY的功能 | 第22-23页 |
| ·转录因子与DNA相互作用的研究技术 | 第23-26页 |
| ·染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第24页 |
| ·Pull down技术 | 第24页 |
| ·酵母单杂交系统 | 第24-25页 |
| ·细菌单杂交系统 | 第25-26页 |
| ·凝胶阻滞实验(EMSA) | 第26页 |
| ·Avi-tag | 第26-27页 |
| ·本实验研究的目的与意义 | 第27-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-39页 |
| ·实验材料 | 第28-30页 |
| ·菌株、质粒与引物 | 第28-29页 |
| ·培养基的配制及主要成分 | 第29-30页 |
| ·抗生素使用浓度 | 第30页 |
| ·实验试剂和仪器 | 第30-33页 |
| ·常用试剂 | 第30-31页 |
| ·常用缓冲液及溶液 | 第31-33页 |
| ·质粒总DNA抽提及感受态制备所需试剂 | 第31页 |
| ·蛋白表达纯化及蛋白含量的测定相关试剂 | 第31-32页 |
| ·SDS-PAGE所需试剂 | 第32页 |
| ·Western blot相关试剂 | 第32-33页 |
| ·酶联免疫吸附测定(ELISA) | 第33页 |
| ·生物素-链霉亲和素系统筛选CodY靶基因 | 第33页 |
| ·常用仪器 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-39页 |
| ·质粒与总DNA的抽提 | 第33-35页 |
| ·大肠杆菌质粒的抽提 | 第33-34页 |
| ·苏云金芽胞杆菌总DNA的抽提 | 第34-35页 |
| ·体外分子克隆实验操作 | 第35-36页 |
| ·PCR扩增 | 第35页 |
| ·连接体系 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第36页 |
| ·蛋白表达纯化 | 第36-37页 |
| ·SDS-PAGE | 第37页 |
| ·Western blot | 第37-38页 |
| ·酶联免疫吸附测定(ELISA) | 第38页 |
| ·生物素-链霉亲和素系统筛选CodY靶基因 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-63页 |
| ·苏云金芽胞杆菌中codY基因的生物信息学分析 | 第39-40页 |
| ·体外生物素pull down实验方法的构建与验证 | 第40-49页 |
| ·CodY生物素受体蛋白表达载体的构建与验证 | 第40-42页 |
| ·CodY生物素受体蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第42-43页 |
| ·生物素连接酶BirA的表达及纯化 | 第43-44页 |
| ·CodY蛋白体外生物素化与验证 | 第44-48页 |
| ·生物素化实验 | 第44-45页 |
| ·ELISA实验检测 | 第45-47页 |
| ·Western blot实验验证 | 第47-48页 |
| ·生物素pull down预实验 | 第48-49页 |
| ·生物素pull down寻找CodY靶基因 | 第49-52页 |
| ·连接有接头序列的YBT-1520基因组片段的制备 | 第49-50页 |
| ·生物素-链霉亲和素系统筛选CodY调控的靶基因 | 第50-52页 |
| ·CodY蛋白靶基因的确定与分析 | 第52-58页 |
| ·筛选得到的CodY蛋白靶基因的验证 | 第58-63页 |
| ·CodY蛋白靶基因的细菌单杂交验证 | 第59-63页 |
| ·CodY蛋白单杂交体系的构建 | 第59-63页 |
| 4 讨论 | 第63-66页 |
| ·CodY蛋白的调控机制 | 第63页 |
| ·全基因组范围内研究CodY蛋白的直接作用靶基因 | 第63-64页 |
| ·CodY蛋白结合的保守序列 | 第64页 |
| ·苏云金芽胞杆菌中CodY靶基因结果分析 | 第64-65页 |
| ·本实验的创新之处 | 第65页 |
| ·下一步研究展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 附录 | 第72页 |