| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 縮略语表 | 第11-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-17页 |
| ·PPRSV的分类地位及分型 | 第12-13页 |
| ·病毒粒子的理化特性 | 第13页 |
| ·PRRSV基因组及编码蛋白 | 第13-15页 |
| ·PRRS流行病学 | 第15页 |
| ·PRRSV的诊断方法 | 第15-17页 |
| ·病毒的分离 | 第15-16页 |
| ·分子生物学诊断方法 | 第16页 |
| ·血清学诊断方法 | 第16-17页 |
| ·IPMA | 第16页 |
| ·SN | 第16页 |
| ·IFA | 第16页 |
| ·ELISA | 第16-17页 |
| 第2章 目的意义 | 第17-18页 |
| 第3章 材料与方法 | 第18-32页 |
| 1. 材料 | 第18-21页 |
| ·蛋白原核表达及纯化所需材料和试剂 | 第18页 |
| ·表达载体 | 第18-20页 |
| ·SDS-PAGE和Western-Blot所需试剂和材料 | 第20页 |
| ·动物免疫所需的材料和试剂 | 第20页 |
| ·细胞培养所需的材料和试剂 | 第20页 |
| ·单抗腹水纯化所需的材料和试剂 | 第20-21页 |
| ·ELISA所需的材料和试剂 | 第21页 |
| 2. 实验方法 | 第21-32页 |
| ·GST基因的获得 | 第21-22页 |
| ·pET-28a-GST重组质粒的构建 | 第22-23页 |
| ·GST蛋白的原核表达 | 第23-24页 |
| ·蛋白表达形式的确定 | 第24页 |
| ·常规包涵体提取 | 第24页 |
| ·实验动物的免疫 | 第24-25页 |
| ·骨髓瘤细胞的复苏活化及融合用骨髓瘤细胞的制备 | 第25页 |
| ·免疫脾细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·饲养细胞的准备 | 第26页 |
| ·细胞融合 | 第26页 |
| ·阳性细胞孔的筛选 | 第26-27页 |
| ·阳性细胞的克隆 | 第27页 |
| ·单克隆抗体的验证 | 第27-28页 |
| ·单克隆抗体的大量制备 | 第28页 |
| ·抗体的纯化 | 第28-29页 |
| ·包被抗体的确定 | 第29页 |
| ·抗体最佳包被浓度及蛋白最佳结合浓度的确定 | 第29页 |
| ·最佳封闭液的选择 | 第29页 |
| ·血清样品最佳稀释度的确定 | 第29-30页 |
| ·血清样品最佳反应时间的确定 | 第30页 |
| ·二抗最佳工作浓度的确定 | 第30页 |
| ·二抗最佳作用时间的确定 | 第30页 |
| ·底物最佳反应时间的确定 | 第30页 |
| ·阴阳性临界值的确定 | 第30页 |
| ·捕获ELISA检测方法的建立 | 第30页 |
| ·特异性试验 | 第30-31页 |
| ·重复性试验 | 第31页 |
| ·批内重复性试验 | 第31页 |
| ·批间重复性试验 | 第31页 |
| ·临床样品的检测 | 第31-32页 |
| 第4章 结果与分析 | 第32-43页 |
| 1. GST基因的获得 | 第32页 |
| 2. pET-28a-GST重组质粒的构建 | 第32-33页 |
| 3. GST蛋白的原核表达 | 第33页 |
| 4. GST融合蛋白表达形式的确定及蛋白纯化 | 第33-34页 |
| 5. 免疫小鼠血清效价的测定 | 第34-35页 |
| 6. 针对GST融合蛋白单抗的筛选 | 第35页 |
| 7. 抗GST蛋白单抗的Western Blot验证 | 第35-36页 |
| 8. 抗体的大量制备及效价测定 | 第36页 |
| 9. 包被抗体的确定 | 第36-37页 |
| 10. 抗体最佳包被浓度及蛋白最佳结合浓度的确定 | 第37-38页 |
| 11. 最佳封闭液的选择 | 第38页 |
| 12. 血清样品最佳稀释倍数的确定 | 第38-39页 |
| 13. 血清样品最佳反应时间的确定 | 第39页 |
| 14. 二抗最佳工作浓度的确定 | 第39-40页 |
| 15. 二抗最佳作用时间的确定 | 第40页 |
| 16. 底物最佳反应时间的确定 | 第40页 |
| 17. 阴阳性临界值的确定 | 第40-41页 |
| 18. 捕获ELISA检测方法的建立 | 第41页 |
| 19. 特异性实验 | 第41页 |
| 20. 重复性试验 | 第41-42页 |
| ·批内重复性试验 | 第41-42页 |
| ·批间重复性试验 | 第42页 |
| 21. 临床样品的检测 | 第42-43页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第43-45页 |
| 1. 讨论 | 第43-44页 |
| ·关于蛋白表达 | 第43页 |
| ·关于试验动物的选择 | 第43页 |
| ·关于细胞融合 | 第43页 |
| ·本检测方法的创新之处 | 第43-44页 |
| ·关于海藻糖 | 第44页 |
| ·关于符合率 | 第44页 |
| 2. 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 致谢 | 第50页 |