| 摘要 | 第1-14页 |
| Abstract | 第14-24页 |
| 目录 | 第24-27页 |
| 缩略词表 | 第27-29页 |
| 前言 | 第29-32页 |
| 第一章 SLE患者B细胞MIR-1246表达与AKT信号调控 | 第32-57页 |
| 第一节 SLE患者B细胞中MIR-1246、AKT、P53表达水平 | 第32-50页 |
| 1 前言 | 第32页 |
| 2 材料和方法 | 第32-38页 |
| ·研究对象 | 第32-34页 |
| ·仪器设备与试剂 | 第34-38页 |
| 3 实验方法 | 第38-44页 |
| ·外周血单个核细胞的分离 | 第38-39页 |
| ·免疫磁珠进一步分离外周血B细胞 | 第39页 |
| ·RNA抽提 | 第39-40页 |
| ·RNA逆转录合成cDNA | 第40-41页 |
| ·引物合成 | 第41页 |
| ·实时—定量PCR | 第41-42页 |
| ·蛋白抽提、定量和Western Blotting | 第42-44页 |
| ·结果分析 | 第44页 |
| 4 统计学方法 | 第44-45页 |
| 5 结果 | 第45-50页 |
| ·SLE患者B细胞miR-1246表达水平 | 第45-47页 |
| ·B细胞P53蛋白,Akt总蛋白及磷酸化表达水平 | 第47-48页 |
| ·相关性分析 | 第48-50页 |
| 第二节 激活或抑制AKT信号通路检测MIR-1246及P53表达水平 | 第50-56页 |
| 1 前言 | 第50页 |
| 2 材料和方法 | 第50-53页 |
| ·研究对象 | 第50页 |
| ·仪器设备与试剂 | 第50-53页 |
| 3 实验方法 | 第53页 |
| ·外周血单个核细胞的分离及免疫磁珠进一步分离外周血B细胞 | 第53页 |
| ·Akt激活剂处理 | 第53页 |
| ·Akt抑制剂处理 | 第53页 |
| ·RNA抽提和实时—定量PCR | 第53页 |
| ·蛋白抽提、蛋白定量(BCA法)、Western Blotting实验步骤 | 第53页 |
| 4 统计学方法 | 第53-54页 |
| 5 结果 | 第54-56页 |
| ·Akt激活剂对正常人B细胞、Akt抑制剂对SLE患者B细胞miR-1246及P53 mRNA表达水平的影响 | 第54-55页 |
| ·Akt激活剂对正常人B细胞及Akt抑制剂对SLE患者B细胞Akt总蛋白及磷酸化水平,P53蛋白表达水平的影响 | 第55-56页 |
| 讨论 | 第56-57页 |
| 第二章 SLE患者B细胞MIR-1246靶基因表达水平 | 第57-85页 |
| 第一节 MIR-1246靶基因的预测与验证 | 第57-75页 |
| 1 前言 | 第57页 |
| 2 材料和方法 | 第57-61页 |
| ·细胞 | 第57-58页 |
| ·仪器设备与试剂 | 第58-61页 |
| 3 实验方法 | 第61-69页 |
| ·抽提细胞基因组DNA | 第61-62页 |
| ·质粒重组、转化、抽提与鉴定 | 第62-69页 |
| ·细胞转染及荧光素酶报告基因活性分析 | 第69页 |
| 4 结果 | 第69-75页 |
| ·软件预测分析miRNA-1246潜在靶基因 | 第69-70页 |
| ·证实EBF1是miR-1246的直接靶基因 | 第70-75页 |
| 第二节 SLE患者B细胞MIR-1246靶基因EBF1表达水平 | 第75-82页 |
| 1 前言 | 第75页 |
| 2 材料和方法 | 第75-80页 |
| ·研究对象 | 第75-76页 |
| ·仪器设备与试剂 | 第76-80页 |
| 3 实验方法 | 第80页 |
| ·外周血单个核细胞的分离及免疫磁珠进一步分离外周血B细胞 | 第80页 |
| ·蛋白抽提、定量和Western Blotting | 第80页 |
| ·结果分析 | 第80页 |
| 4 结果 | 第80-82页 |
| 讨论 | 第82-85页 |
| 第三章 MIR-1246表达异常与自身免疫反应 | 第85-102页 |
| 1 前言 | 第85-86页 |
| 2 材料和方法 | 第86-91页 |
| ·研究对象 | 第86页 |
| ·仪器设备与试剂 | 第86-91页 |
| 3 实验方法 | 第91-94页 |
| ·外周血单个核细胞的分离及免疫磁珠进一步分离外周血B细胞及CD4+T细胞 | 第91-92页 |
| ·转染 | 第92页 |
| ·B细胞与自身CD4+T细胞孵育和IgG抗体检测 | 第92-94页 |
| ·流式细胞仪检测 | 第94页 |
| ·RNA抽提和实时—定量PCR | 第94页 |
| ·蛋白抽提、蛋白定量(BCA法)、Western Blotting实验步骤 | 第94页 |
| 4 统计学方法 | 第94页 |
| 5 结果 | 第94-100页 |
| ·转染miR-1246 inhibitor对正常人B细胞及转染miR-1246 mimic对SLE患者B细胞miR-1246表达水平的影响 | 第94-95页 |
| ·转染miR-1246 inhibitor对正常人B细胞及转染miR-1246 mimic对SLE患者B细胞EBF1蛋白表达水平的影响 | 第95-96页 |
| ·转染miR-1246 inhibitor对正常人B细胞及转染miR-1246 mimic对SLE患者B细胞产生IgG水平的影响 | 第96-97页 |
| ·转染miR-1246 inhibitor对正常人B细胞及转染miR-1246 mimic对SLE患者B细胞CD40,CD80和CD86mRNA、蛋白及P53 mRNA表达水平的影响 | 第97-99页 |
| ·转染miR-1246 inhibitor对正常人B细胞及转染miR-1246 mimic对SLE患者B细胞Akt总蛋白及磷酸化水平,P53蛋白水平的影响 | 第99-100页 |
| 讨论 | 第100-102页 |
| 结论 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-111页 |
| 综述 | 第111-124页 |
| 参考文献 | 第120-124页 |
| 攻读学位期间的主要研究成果 | 第124-126页 |
| 致谢 | 第126-129页 |
