| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-23页 |
| ·巴西橡胶树主要病害及危害 | 第9-11页 |
| ·植物抗病性 | 第11-14页 |
| ·植物抗病反应 | 第11-13页 |
| ·植物抗病反应中的信号分子及信号途径 | 第13-14页 |
| ·促分裂原激活蛋白激酶研究进展 | 第14-18页 |
| ·MAPK级联反应 | 第14-15页 |
| ·植物MAPK研究进展 | 第15-17页 |
| ·MPK3、MPK6在植物抗病中的功能研究 | 第17-18页 |
| ·植物原生质体瞬时表达体系 | 第18-21页 |
| ·植物原生质体 | 第18-19页 |
| ·外源基因在原生质体系统中的瞬时表达 | 第19-20页 |
| ·植物瞬时表达系统的应用 | 第20-21页 |
| ·橡胶树抗病机制研究进展 | 第21-22页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第22页 |
| ·技术路线 | 第22-23页 |
| 2 橡胶树HbMPK3、HbMPK6基因的分离及序列分析 | 第23-31页 |
| ·实验材料 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-25页 |
| ·橡胶树叶片总RNA的提取 | 第23-24页 |
| ·引物设计 | 第24页 |
| ·RT-PCR扩增HbMPK3基因的全长序列及HbMPK6基因片段序列 | 第24页 |
| ·利用3'和5'RACE技术扩增HbMPK6基因的全长 | 第24-25页 |
| ·基因的生物信息学分析 | 第25页 |
| ·结果与分析 | 第25-31页 |
| ·橡胶树叶片总RNA提取方法筛选 | 第25页 |
| ·HbMPK3基因全长片段的克隆及生物信息学分析 | 第25-28页 |
| ·HbMPK3基因片段的扩增 | 第25-27页 |
| ·HbMPK3生物信息学分析 | 第27-28页 |
| ·HbMPK6 cDNA全长的扩增与生物信息学分析 | 第28-31页 |
| ·HbMPK6 cDNA全长的扩增 | 第28-29页 |
| ·HbMPK6生物信息学分析 | 第29-31页 |
| 3 HbMPK3和HbMPK6基因对不同抗病信号分子的应答 | 第31-33页 |
| ·实验材料 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-32页 |
| ·SA处理橡胶树叶片 | 第31页 |
| ·JA处理橡胶树叶片 | 第31页 |
| ·橡胶样品RNA提取及反转录 | 第31页 |
| ·RT-PCR半定量分析 | 第31-32页 |
| ·结果与分析 | 第32-33页 |
| ·HbMPK3、HbMPK6基因的表达不受SA的诱导 | 第32页 |
| ·JA诱导HbMPK3、HbMPK6基因的表达 | 第32-33页 |
| 4 利用拟南芥原生质体瞬时表达系统分析HbMPK3和HbMPK6对植物细胞PTI的影响 | 第33-42页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-37页 |
| ·flg22处理橡胶原生质体 | 第33-34页 |
| ·原生质体瞬时表达载体的构建 | 第34页 |
| ·氯化铯密度梯度离心大量提取质粒 | 第34-35页 |
| ·拟南芥植株的培养 | 第35页 |
| ·拟南芥原生质体制备与转化 | 第35页 |
| ·原生质体蛋白质提取和蛋白分离 | 第35-36页 |
| ·Western blot检测 | 第36页 |
| ·荧光素酶双报告系统分析 | 第36-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-42页 |
| ·flg22诱导HbMPK3、HbMPK6基因的表达 | 第37页 |
| ·HbMPK3和HbMPK6基因对植物细胞PTI的影响 | 第37-42页 |
| ·HbMPK3和HbMPK6基因原生质体瞬时表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·HbMPK3和HbMPK6基因在拟南芥原生质体中的表达检测 | 第38-39页 |
| ·HbMPK3基因对植物细胞PTI的影响 | 第39-40页 |
| ·HbMPK6基因对植物细胞PTI的影响 | 第40-42页 |
| 5 用根癌农杆菌介导橡胶HbMPK3、HbMPK6基因遗传转化拟南芥 | 第42-47页 |
| ·实验材料 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-44页 |
| ·HbMPK3、HbMPK6植物表达载体的构建 | 第42页 |
| ·农杆菌的制备 | 第42-43页 |
| ·电转化农杆菌感受态细胞的制备 | 第42-43页 |
| ·植物表达载体向农杆菌感受态细胞的转化 | 第43页 |
| ·农杆菌转化子的鉴定 | 第43页 |
| ·拟南芥植株的培养 | 第43-44页 |
| ·农杆菌法转化拟南芥 | 第44页 |
| ·抗性植株的筛选 | 第44页 |
| ·再生植株的PCR鉴定 | 第44页 |
| ·结果与分析 | 第44-47页 |
| ·植物表达载体的构建及鉴定 | 第44-45页 |
| ·植物表达载体农杆菌转化子的鉴定 | 第45-46页 |
| ·HbMPK3和HbMPK6转化对应拟南芥突变体 | 第46-47页 |
| 6 结论 | 第47-48页 |
| 7 讨论 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-57页 |
| 附录 | 第57-64页 |
| 附录一 试剂配制 | 第57-59页 |
| 附录二 Trizol一步法提取植物总RNA方法 | 第59页 |
| 附录三 cDNA第一链的合成 | 第59-60页 |
| 附录四 论文中所用引物序列 | 第60-61页 |
| 附录五 凝胶片段回收 | 第61页 |
| 附录六 转化反应 | 第61-62页 |
| 附录七 碱裂解法提取质粒 | 第62-63页 |
| 附录八 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
