| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-16页 |
| 第一章 综述 | 第16-38页 |
| 1. 导言 | 第16-17页 |
| 2. 细胞周期调控因子 | 第17-28页 |
| ·正调控因子（positive regulators） | 第18-21页 |
| ·负调控因子（negative regulator） | 第21-28页 |
| 3. p~(21wif1/cip1)与肿瘤 | 第28-38页 |
| ·p21 的肿瘤抑制功能概述 | 第28-30页 |
| ·p21 的调控 | 第30-33页 |
| ·转录因子 Sp1/Sp3 概述 | 第33-35页 |
| ·研究内容及意义 | 第35-38页 |
| 第二章 实验结果 | 第38-65页 |
| 1. 化疗药物的疗效与 p21 表达水平呈正相关 | 第38-45页 |
| ·细胞转染条件确定 | 第38页 |
| ·奥沙利铂诱导 p21 启动子活化 | 第38-39页 |
| ·奥沙利铂诱导 p21 mRNA 增加 | 第39-41页 |
| ·原位免疫荧光鉴定 p21 在细胞内表达量 | 第41页 |
| ·奥沙利铂诱导 p21 蛋白表达增加 | 第41-42页 |
| ·细胞周期分析结果 | 第42-43页 |
| ·奥沙利铂对裸鼠异种移植肿瘤的抑制效果 | 第43-45页 |
| 2. 奥沙利铂对 p21 启动子转录调控的研究 | 第45-48页 |
| ·p21 启动子上的奥沙利铂应答元件 | 第45-47页 |
| ·奥沙利铂应答元件位置的独特性 | 第47页 |
| ·启动子上-1 至-500bp 的生物信息学分析 | 第47-48页 |
| 3. Sp1/Sp3 是与奥沙利铂应答元件结合的主要蛋白因子 | 第48-56页 |
| ·电泳迁移率(EMSA)实验条件确定 | 第48-50页 |
| ·蛋白浓度标准曲线制作 | 第50-51页 |
| ·细胞核提取物特异性的与 F3 结合 | 第51-52页 |
| ·转录因子 Sp1/Sp3 特异性的结合在 F3 上 | 第52-53页 |
| ·奥沙利铂诱导 Sp1 磷酸化 | 第53-56页 |
| 4. Sp1/Sp3 与 DNA 结合亲和力及结合位点分析 | 第56-59页 |
| ·奥沙利铂增加 Sp1/Sp3 蛋白与药物应答元件(F3)的亲和力 | 第56-57页 |
| ·F3 片段上 Sp1/Sp3 蛋白结合位点的重要性 | 第57-59页 |
| 5. F3(wt -213 /-242)在细胞内的生物学作用初探 | 第59-65页 |
| ·片段 F3 能够诱导激活 p21 启动子 | 第59-60页 |
| ·双链 DNA Sp1 及突变片段 mu4 均不能活化 p21 启动子 | 第60-61页 |
| ·片段 F3 能诱导细胞内源性的 p21 表达 | 第61-62页 |
| ·p53 与奥沙利铂应答元件协同作用诱导 p21 | 第62-65页 |
| 第三章 实验仪器和方法 | 第65-107页 |
| 1. PEI 介导的真核细胞转染 | 第65-85页 |
| ·缓冲溶液及试剂 | 第65-68页 |
| ·质粒 DNA 与 PEI 质量比的确定 | 第68-70页 |
| ·pFL-luc 和 pCMV- -gal 共转染 SKOV3 | 第70页 |
| ·定点突变构建 p21 启动子-报告基因突变体及重组质粒转染 | 第70-82页 |
| ·pFL-luc 或 pFL- 9 与 pCMV-p53 共转染 SKOV3 | 第82-83页 |
| ·质粒 pFL-luc 和双链寡核苷酸 DNA 共转染 SKOV3 细胞 | 第83-84页 |
| ·生物素标记探针(biotin-labeled probe)转染 SKOV3 细胞 | 第84-85页 |
| 2. 免疫印迹实验(western blot) | 第85-90页 |
| ·缓冲液、试剂和仪器 | 第85-87页 |
| ·细胞裂解液的获得 | 第87页 |
| ·配制 SDS-PAGE 蛋白胶及蛋白电泳 | 第87-89页 |
| ·电泳转膜及抗体杂交步骤 | 第89-90页 |
| 3. 半定量 RT-PCR(reverse transcription- PCR) | 第90-91页 |
| ·细胞总 RNA 提取 | 第90页 |
| ·反转录及 PCR 扩增 | 第90-91页 |
| 4. 流式细胞术（FACS） | 第91-93页 |
| ·溶液和仪器 | 第91-92页 |
| ·实验步骤 | 第92-93页 |
| 5. 原位免疫荧光实验（immunofluorescence studies） | 第93-94页 |
| 6. 奥沙利铂对 SKOV3 异种移植肿瘤的抑制 | 第94页 |
| 7. 电泳迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay, EMSA) | 第94-102页 |
| ·DNA 探针合成及制备 | 第94-96页 |
| ·细胞核提取物制备及浓度测定 | 第96-97页 |
| ·电泳迁移率实验条件确定 | 第97-102页 |
| 8. 统计分析 | 第102页 |
| 9. 序列保守性的生物信息学分析 | 第102-107页 |
| 第四章 讨论和展望 | 第107-112页 |
| 参考文献 | 第112-125页 |
| 符号与标记（附录 1） | 第125-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
| 攻读博士学位期间发表或待发表的学术论文及专利 | 第128页 |
