| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-37页 |
| 1 草鱼出血病病毒研究进展 | 第13-23页 |
| ·草鱼出血病的症状及流行规律 | 第13-14页 |
| ·GCRV形态特征 | 第14-16页 |
| ·GCRV理化特性 | 第16页 |
| ·病毒组织嗜性和病理变化 | 第16-19页 |
| ·GCRV分子生物学 | 第19页 |
| ·GCRV的免疫学效应 | 第19页 |
| ·草鱼出血病免疫防治研究 | 第19-23页 |
| 2 家蚕杆状病毒及其表达系统 | 第23-29页 |
| ·家蚕Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的构建 | 第24-26页 |
| ·家蚕杆状病毒表达系统的优点 | 第26-27页 |
| ·家蚕杆状病毒表达系统存在的缺陷 | 第27-28页 |
| ·利用杆状病毒作为表达载体的疫苗研究 | 第28-29页 |
| 参考文献 | 第29-37页 |
| 第二章 研究目的和研究内容 | 第37-40页 |
| 1 研究的目的和意义 | 第37-38页 |
| 2 研究的主要内容 | 第38-39页 |
| ·草鱼出血病病毒(GCRV)vp6核酸疫苗的构建及免疫效果评估 | 第38页 |
| ·GCRV VP6蛋白对草鱼出血病的免疫效果评估 | 第38-39页 |
| ·GCRV VP6蛋白亚单位/DNA联合口服疫苗的制备及免疫效果评估 | 第39页 |
| 3 技术路线 | 第39-40页 |
| 第三章 实验一般材料与方法 | 第40-62页 |
| 1 实验材料 | 第40-47页 |
| ·载体与菌种 | 第40页 |
| ·生物材料 | 第40页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第40页 |
| ·其它试剂 | 第40-41页 |
| ·主要实验试剂与配制 | 第41-46页 |
| ·免疫组化相关试剂 | 第46-47页 |
| ·间接凝集法测抗体效价相关试剂 | 第47页 |
| 2 常用仪器 | 第47-48页 |
| 3 试验方法 | 第48-60页 |
| ·TG1感受态细胞的制备 | 第48页 |
| ·DNA的连接反应体系 | 第48页 |
| ·连接产物的转化 | 第48-49页 |
| ·碱裂解法少量制备质粒DNA | 第49-50页 |
| ·DNA的酶切反应体系 | 第50页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第50-51页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第51页 |
| ·目的片段的分离和回收 | 第51页 |
| ·Bac to Bac系统 | 第51-55页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质电泳 | 第55页 |
| ·Western blotting | 第55-56页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第56页 |
| ·过柱纯化蛋白 | 第56-57页 |
| ·过柱纯化蛋白含量测定(Bradford蛋白质测定法) | 第57-58页 |
| ·免疫组化 | 第58-59页 |
| ·间接凝集法测抗体效价 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-62页 |
| 第四章 草鱼出血病病毒vp6核酸疫苗的免疫效果评估 | 第62-75页 |
| 摘要 | 第62-63页 |
| 1 材料与方法 | 第63-66页 |
| ·材料 | 第63页 |
| ·方法 | 第63-66页 |
| 2 结果与分析 | 第66-70页 |
| ·GCRV vp6基因的序列分析 | 第66页 |
| ·核酸疫苗载体pFastBac-FA-VP6-ph-VP6的鉴定 | 第66-68页 |
| ·免疫后鱼体中vp6基因的表达 | 第68页 |
| ·核酸疫苗免疫鱼后抗体效价检测 | 第68-69页 |
| ·核酸疫苗对草鱼出血病的免疫保护作用 | 第69-70页 |
| 3 讨论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 第五章 草鱼出血病病毒VP6蛋白的原核表达、纯化及免疫效果研究 | 第75-87页 |
| 摘要 | 第75-76页 |
| 1 材料与方法 | 第76-78页 |
| ·材料 | 第76页 |
| ·材料方法 | 第76-78页 |
| 2 结果与分析 | 第78-83页 |
| ·表达载体pET28a(+)-VP6的鉴定 | 第78-79页 |
| ·重组VP6蛋白的鉴定 | 第79-80页 |
| ·诱导表达时间的优化 | 第80页 |
| ·VP6重组蛋白的可溶性分析 | 第80-81页 |
| ·重组VP6蛋白的纯化 | 第81-82页 |
| ·重组VP6蛋白的免疫效果 | 第82-83页 |
| 3 讨论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-87页 |
| 第六章 GCRV VP6蛋白亚单位/DNA联合口服疫苗的制备及免疫效果评价 | 第87-108页 |
| 摘要 | 第87-88页 |
| 1 材料与方法 | 第88-93页 |
| ·实验材料 | 第88-89页 |
| ·方法 | 第89-93页 |
| 2 结果与分析 | 第93-101页 |
| ·重组病毒BacFish-VP6的产生及鉴定 | 第93-94页 |
| ·病毒滴度的测定 | 第94-95页 |
| ·VP6抗体的鉴定 | 第95页 |
| ·重组VP6蛋白在细胞和五龄家蚕中的表达 | 第95-97页 |
| ·口服免疫鱼体中vp6特异性抗体的产生规律 | 第97-98页 |
| ·口服免疫后鱼血中vp6 mRNA的检测 | 第98-99页 |
| ·免疫焚光检测免疫草鱼组织和BacFish-VP6感染CIK细胞中的VP6蛋白 | 第99-101页 |
| 3 讨论 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-108页 |
| 结论 | 第108-109页 |
| 1 已取得的成果 | 第108页 |
| 2 有待进行的研究 | 第108-109页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第109-110页 |
| 1 研究论文 | 第109页 |
| 2 GenBank登录序列 | 第109-110页 |
| 资助项目 | 第110-111页 |
| 附录 | 第111-114页 |
| 1 缩略词表 | 第111-112页 |
| 2 部分质粒图谱 | 第112-114页 |
| 致谢 | 第114页 |
